廣西貴港市豬偽狂犬病血清學(xué)流行率和風(fēng)險(xiǎn)因素橫斷面研究

劉林青，楊文歡，韓銀華，郭建剛，鄭宏偉，張淼潔，翟新驗(yàn)

(1.中國動物疫病預(yù)防控制中心，北京朝陽100125 ； 2.陜西省動物疫病預(yù)防控制中心，陜西西安710016 ； 3.廣西壯族自治區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，廣西南寧530001 ； 4.廣西貴港市動物疫病預(yù)防控制中心，廣西貴港537100)

豬偽狂犬病是由偽狂犬病病毒(PRV)引起的一種以生產(chǎn)母豬繁殖障礙、哺乳仔豬神經(jīng)癥狀及急性死亡、保育豬和育成豬呼吸道癥狀為主要特征的高度傳染性疫病[1]。20世紀(jì)90年代開始，我國通過PRV gE基因缺失弱毒疫苗的使用與推廣逐漸控制了豬偽狂犬病的流行[2]。但是，從2011年開始，我國多地暴發(fā)豬偽狂犬病，其病毒致病力明顯增強(qiáng)，發(fā)病豬場損失嚴(yán)重，對養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[3]。為了掌握廣西貴港市豬偽狂犬病的流行情況，為其科學(xué)防控提供理論依據(jù)，于2017年7月在貴港市進(jìn)行了豬偽狂犬病血清學(xué)場群流行率和風(fēng)險(xiǎn)因素橫斷面調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 目標(biāo)群與研究單元 將廣西貴港市，包括城三區(qū)(港北區(qū)、港南區(qū)和覃塘區(qū))和周邊市/縣(桂平市和平南縣)的規(guī)模豬場(年出欄量500頭以上)作為研究的目標(biāo)群，研究單元為規(guī)模豬場。抽樣框?yàn)橘F港市畜牧獸醫(yī)部門提供的規(guī)模豬場名單。

1.2 抽樣策略與樣本量計(jì)算

1.2.1 群體水平 采用分層隨機(jī)抽樣，按養(yǎng)殖代次分為種豬場和商品豬場兩層。種豬場采用簡單隨機(jī)抽樣，抽樣數(shù)量(N)按照估計(jì)流行率的方式，50%預(yù)期流行率(p)，5%可接受誤差(d)，95%置信水平(CI)，按照公式N=1.962×p×(1-p)/d2(公式1)計(jì)算。商品豬場采用分層隨機(jī)抽樣，按照區(qū)域分為城三區(qū)和周邊市/縣兩層，兩層均設(shè)75%p，15%d，95%CI，按照公式1計(jì)算。經(jīng)計(jì)算，種豬場需隨機(jī)抽20家，商品豬場需在城三區(qū)隨機(jī)抽取28家，周邊市/縣隨機(jī)抽取31家。本研究實(shí)際種豬場抽21家，商品豬場城三區(qū)抽29家，周邊市/縣抽31家，使用Microsoft Excel 2010隨機(jī)函數(shù)進(jìn)行抽樣。

1.3 采樣檢測與病例定義 血清樣品采集時(shí)間為2017年7月。每頭豬前腔靜脈采血5 mL，離心后取上層血清，置于4 ℃保存?zhèn)溆?。PRV gE-ELISA抗體檢測試劑盒為美國IDEXX公司產(chǎn)品(批號：99-09836)。

陽性樣品(個體)：按照試劑盒說明書，檢測結(jié)果為陽性的采樣個體。

陽性場：任何一個樣品檢測為陽性，其所在場即定義為PR陽性場。

1.4 問卷調(diào)查 在采集樣本的同時(shí)開展現(xiàn)場問卷調(diào)查，問卷設(shè)計(jì)包括養(yǎng)殖場基本信息、生物安全體系、綜合管理、外周環(huán)境等可能影響場群感染PR的相關(guān)因素。

1.5 結(jié)果統(tǒng)計(jì)

1.5.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 22.0軟件，采用卡方檢驗(yàn)分別對不同區(qū)/縣場群陽性率和樣品陽性率進(jìn)行比較分析。將問卷調(diào)查中收集到的風(fēng)險(xiǎn)因素作為自變量，以豬場是否感染PR作為因變量，使用SPSS 22.0軟件，采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行單因素分析，篩選P<0.2的因素進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，結(jié)合生物學(xué)意義進(jìn)行多變量Logistic回歸分析，確定回歸模型，并做Hosmer-Lemeshow檢驗(yàn)和ROC曲線評估模型擬合優(yōu)度。

2 結(jié)果

2.1 規(guī)模豬場總體流行情況 經(jīng)計(jì)算，本試驗(yàn)方法的群敏感性為95.9%，群特異性為98.0%。貴港市規(guī)模豬場PR血清學(xué)場群真實(shí)流行率為23.94%(95%CI：13.90%～33.98%)，樣品陽性率為11.47%(184/1 604)(表1)。

2.2 種豬場流行情況 種豬場PR血清學(xué)場群真實(shí)流行率為33.37%(95%CI：13.20%～53.54%)，樣品陽性率為13.09%(53/405)。其中陽性場均為擴(kuò)繁場，貴港市的1個種公豬站、4個原種豬場均未檢測到陽性。擴(kuò)繁場PR血清學(xué)場群真實(shí)流行率為44.46%(95% CI：20.11%～68.81%)，樣品陽性率為17.38%(53/305)(表1)。

2.3 商品豬場流行情況 商品豬場PR血清學(xué)場群真實(shí)流行率為23.65%(95% CI：12.83%～34.48%)，樣品陽性率為10.93%(131/1 199)。其中城三區(qū)商品豬場場群真實(shí)流行率為38.27%(95%CI：20.58%～55.96%)，樣品陽性率為17.79%(103/579)，周邊市/縣商品豬場場群真實(shí)流行率為18.48%(95%CI：4.82%～32.15%)，樣品陽性率為4.52%(28/620)(表1)。

表1 不同場點(diǎn)豬偽狂犬病場群流行率

2.4 場內(nèi)樣品陽性率分布 本次調(diào)查共檢出陽性場群24個，包括擴(kuò)繁場7個，商品豬場17個，陽性場群場內(nèi)gE抗體樣品陽性率離散度較大(圖1)。陽性擴(kuò)繁場場內(nèi)樣品陽性率中位數(shù)為25.00%，平均數(shù)是43.64%，標(biāo)準(zhǔn)偏差是38.90%；陽性商品豬場場內(nèi)樣品陽性率中位數(shù)為20.00%，平均數(shù)是38.53%，與擴(kuò)繁場無顯著差異(P>0.05)，標(biāo)準(zhǔn)偏差31.51%。

圖1 gE陽性場場內(nèi)樣品陽性率分布注：長橫線和短橫線分別代表中位數(shù)和四分位數(shù)

2.5 地域分布情況 貴港市5個區(qū)/縣中，港南區(qū)規(guī)模豬場場群陽性率最高(表2)，為54.55%(12/22)，顯著高于桂平市(P<0.05)。港南區(qū)12個陽性場，均集中在新塘鎮(zhèn)(9個)和瓦塘鎮(zhèn)(3個)。共計(jì)檢測gE抗體血清學(xué)樣品1 604份，平均樣品陽性率11.47%(184/1604) (表3)，港南區(qū)樣品陽性率最高，為31.29%(133/425)，極顯著高于其他各區(qū)(縣)(P<0.01)。

2.6 風(fēng)險(xiǎn)因素分析

2.6.1 單因素分析 對調(diào)查問卷中的19個風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行單因素分析，豬場“位于港南區(qū)”、“飼料為外購”、“方圓3 km內(nèi)有豬場”是規(guī)模豬場感染PRV 的主要風(fēng)險(xiǎn)因素(P<0.05)(表4)。

2.6.2 多因素logistic回歸 篩選出單因素分析結(jié)果P<0.2的8個風(fēng)險(xiǎn)因素，使用SPSS軟件進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，結(jié)合生物學(xué)有關(guān)知識，8個因素之間均相互獨(dú)立，將8個風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行l(wèi)ogistic回歸分析，用倒退法選擇變量。結(jié)果表明，位于港南區(qū)(X1)、方圓3 km內(nèi)有豬場(X2)、離主干道距離≤500 m(X3)、飼料來源外購(X4)是貴港市規(guī)模豬場感染偽狂犬病的風(fēng)險(xiǎn)因素(表5)。經(jīng)Hosmer-Lemeshow檢驗(yàn)，該模型擬合較好(P>0.05)。模型的ROC曲線下面積為0.834(95% CI：0.746～0.923)(圖2)。

表2 各區(qū)/縣不同場點(diǎn)gE抗體場群陽性率分布

※:港南區(qū)規(guī)模豬場場群陽性率極顯著高于桂平市，P<0.05

表3 各區(qū)/縣不同場點(diǎn)gE抗體樣品陽性率分布

※:港南區(qū)規(guī)模豬場樣品陽性率極顯著高于其他各區(qū)(縣)，P<0.01

表4 貴港市規(guī)模豬場感染豬偽狂犬病風(fēng)險(xiǎn)因子單因素分析結(jié)果

表5 回歸模型中的變量

圖2 回歸模型的ROC曲線

3 討論

PR在我國流行廣泛，各地區(qū)場群流行率在30%～70%之間[4-8]，中國動物疫病預(yù)防控制中心對全國100個原種豬場的監(jiān)測顯示，2011-2016年P(guān)RV gE抗體的場陽性率在25.3%～64.3%之間[11]。本試驗(yàn)第一次將貴港市的規(guī)模豬場作為研究的目標(biāo)群，通過橫斷面調(diào)查了解該市PR的流行情況。貴港市總體規(guī)模豬場PR場群流行率相對較低，尤其是種公豬站和原種豬場均為陰性，說明該市高代次種豬場對PR凈化效果良好，但是隨著豬群代次下降PR流行情況加重，特別是擴(kuò)繁場的場群流行率偏高。由于基礎(chǔ)母豬的飼養(yǎng)周期較長，一旦感染可終生帶毒并不定期排毒，成為持續(xù)的傳染源，所以PR野毒陽性擴(kuò)繁場對該病的傳播起著放大作用，使豬群感染情況通過種豬不斷擴(kuò)大[12]。多個研究認(rèn)為引入種豬不經(jīng)檢測或檢疫隔離的豬場發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)較高[3-16]，所以在貴港市的PR控制和凈化中，要加強(qiáng)種豬場種源管理，強(qiáng)化引種檢測意識，引導(dǎo)養(yǎng)殖場從陰性原種豬場購買種豬。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)貴港市港南區(qū)的場群陽性率和樣品陽性率均高于其他區(qū)縣。港南區(qū)面積僅占貴港市10.27%，但擴(kuò)繁場數(shù)量占貴港市68.75%。本研究中，港南區(qū)12個陽性場，均集中在新塘鎮(zhèn)和瓦塘鎮(zhèn)。推測港南區(qū)PR污染相對嚴(yán)重可能與港南區(qū)擴(kuò)繁場數(shù)量較多、場群分布較密有關(guān)，由于豬只飼養(yǎng)密度大，病毒可通過人員、車輛及空氣傳播。因此要指導(dǎo)養(yǎng)殖場戶科學(xué)選址，降低港南區(qū)養(yǎng)豬密度、合理規(guī)劃新建豬場位置，同時(shí)，做好豬場的消毒管理，加強(qiáng)對飼料車、拉豬車以及外來人員的管理。

風(fēng)險(xiǎn)因素分析中發(fā)現(xiàn)豬場“位于港南區(qū)”是豬場感染PR的重要因素，與流行率研究結(jié)果相一致，說明本研究中的場群流行率結(jié)果能夠客觀反映貴港市的PR流行現(xiàn)狀。此外，調(diào)查發(fā)現(xiàn)“方圓3 km有豬場”、“離主干道距離≤500 m”是場群感染PR的重要風(fēng)險(xiǎn)因素，也一定程度解釋了港南區(qū)PR流行相對嚴(yán)重的可能原因。黃燁禎等[17]調(diào)查發(fā)現(xiàn)，PR陽性場主要分布在養(yǎng)殖較密集的地區(qū)，場區(qū)周圍3 km范圍內(nèi)有其他豬場(OR=4.77，95%CI：1.280～17.77)是種豬場感染PRV的潛在風(fēng)險(xiǎn)因素，與本試驗(yàn)結(jié)果一致，提示養(yǎng)殖密度與PRV感染存在一定的聯(lián)系。本研究發(fā)現(xiàn)“飼料外購”是PR感染的一個風(fēng)險(xiǎn)因素，可能與飼料車、外來人員頻繁出入增加病毒水平傳播的風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。

本試驗(yàn)考慮到不同養(yǎng)殖代次的生物安全水平不同可能會導(dǎo)致PR場群流行率不同，同時(shí)也為了更清楚的了解種豬場和商品豬場分別的流行情況，故將目標(biāo)群分為種豬場和商品豬場兩層進(jìn)行隨機(jī)抽樣。在商品豬場抽樣中，為了分別了解不同區(qū)域的流行情況，針對商品豬場所在地域不同開展了第二次分層抽樣，所以本試驗(yàn)結(jié)果能夠相對全面真實(shí)的反映貴港市PR場群流行率情況。對于調(diào)查發(fā)現(xiàn)的擴(kuò)繁場和港南區(qū)陽性率較高的結(jié)果，后續(xù)仍需要進(jìn)一步研究以確證陽性率高的原因。

風(fēng)險(xiǎn)因素調(diào)查是在開展流行率研究的同時(shí)開展的，調(diào)查前對各區(qū)/縣調(diào)查人員進(jìn)行了采樣和問卷填寫集中培訓(xùn)，問卷反饋有效率較高，但仍存在個別問題填寫不規(guī)范或與實(shí)際情況不相符。此外，被調(diào)查養(yǎng)殖戶對某些問題的回答可能存在偏倚，如回答“外來人員可進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)”；“流浪貓犬可進(jìn)入場內(nèi)”；“生產(chǎn)區(qū)和生活區(qū)分開”等問題時(shí)選擇認(rèn)為正確的答案。因此，后續(xù)研究需進(jìn)一步探討如何設(shè)計(jì)更為針對性的問題，盡可能降低信息偏倚。