防風(fēng)藥材及其偽品的揮發(fā)油類成分氣相指紋圖譜研究

張 丹，牟玉瑩，木盼盼，郭 梅，郭 龍，鄭玉光

(河北中醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，河北 石家莊 050200)

防風(fēng)為傘形科植物防風(fēng)Saposhnikoviadivaricata(Turcz.)Schischk.的干燥根，具有祛風(fēng)解表、勝濕止痛、止痙的功效，主要用于感冒頭痛、風(fēng)濕痹痛、風(fēng)疹瘙癢、破傷風(fēng)等癥[1]。近年來防風(fēng)需求量日益增大，而野生藥材資源日益減少，難以滿足市場需要，栽培防風(fēng)逐漸成為市場的主流。目前，防風(fēng)藥材品質(zhì)差異較大，主要體現(xiàn)在規(guī)范化種植防風(fēng)所占面積較小以及地方習(xí)用品的混入，造成主流市場真?zhèn)位祀s、質(zhì)量良莠不齊。近年來對于防風(fēng)藥材的質(zhì)量評價多基于高效液相色譜法對其香豆素類成分進行研究[2-8]，而對其揮發(fā)油類成分的研究較少。中藥作為一個整體，是由多種成分共同作用發(fā)揮其活性的。鑒于此，本研究開展了防風(fēng)藥材及其偽品的揮發(fā)油類成分的氣相指紋圖譜研究，以期完善防風(fēng)的質(zhì)量評價體系，為防風(fēng)藥材的質(zhì)量綜合評價體系的建立提供依據(jù)。

1 材料

1.1 設(shè)備器材

美國安捷倫7890B氣相色譜儀(安捷倫科技有限公司)；BSA224S-CW電子分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；KQ2200E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；一次性使用無菌注射器帶針2.5 mL(江西洪達(dá)醫(yī)療器械集團有限公司)。

1.2 試劑

正己烷(分析純AR，天津歐博凱化工有限公司)。

1.3 藥材

34批防風(fēng)藥材購買于各地藥材市場，經(jīng)鑒定為防風(fēng)S.adivaricata(Turcz.)Schischk.(關(guān)防風(fēng)、口防風(fēng))、葛縷子CarumcarviL.(小防風(fēng))、竹葉西風(fēng)芹SeselimaireiWolff.(云防風(fēng))、寬萼巖風(fēng)Libanotislaticalycina(水防風(fēng))的干燥根，憑證標(biāo)本保存于河北中醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)研究室。

表1 防風(fēng)樣品詳細(xì)信息

2 方法

2.1 防風(fēng)揮發(fā)油的提取

經(jīng)多種提取方法的篩選，最后結(jié)合《香港藥典》中艾葉的提取方法，用正己烷超聲提取，過濾，將濾液倒入蒸發(fā)皿中，揮干。所有樣品都有油析出，方法可靠。

2.2 氣相色譜條件

色譜柱：載氣：高純氮氣(99.999%)；載氣流速1 mL/min；進樣量：2進樣；分流比5∶1；檢測器溫度：250 ℃。程序升溫：柱初始溫度50 ℃：保持3 min，然后以10 ℃/min速率升溫至210 ℃，保持5 min，再以2 ℃/min，初始升溫至240 ℃，保持2 min，最后以3 ℃/min，升溫至280 ℃保持2 min。

2.3 供試品溶液的制備

精密取樣品粉末約l g，置于50 mL具塞錐形瓶中，精密加入正己烷10 mL，稱定重量，置超聲波清洗器中超聲30 min，放冷，再稱定重量，用正己烷補足減失的重量，搖勻，濾過。取濾液至10 mL量瓶中，加正己烷至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3 結(jié)果

3.1 精密度試驗

精密吸取同一防風(fēng)(S1)供試品溶液，連續(xù)進樣6次，以1號峰為參照峰，各特征峰保留時間的RSD<3.0%，相對峰面積的RSD<3.0%。

3.2 穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一防風(fēng)(S1)供試品溶液，分別在供試品溶液制備后第0、2、6、8、12、24 h進樣，以1號峰為參照峰，各特征峰保留時間的RSD<3.0%，相對峰面積的RSD<3.0%，表明供試品溶液在制備后24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.3 重復(fù)性試驗

取同一批防風(fēng)(S1)粉末約1 g，平行6份，精密稱定，按“2.3”項下方法處理，得供試品溶液，分別進樣，記錄特征圖譜，以3號峰為參照峰，各特征峰保留時間的RSD<3.0%，相對峰面積的RSD<3.0%，表明該方法的重復(fù)性良好。

3.4 防風(fēng)揮發(fā)油的指紋圖譜研究

33批防風(fēng)樣品的色譜見圖1，采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004 A版”對防風(fēng)藥材氣相圖譜進行處理。防風(fēng)藥材及其偽品的指紋圖譜相似度結(jié)果見表4，由結(jié)果可知不同產(chǎn)地的防風(fēng)藥材揮發(fā)油的各樣品間相似度在0.030～0.990之間，表現(xiàn)為關(guān)防風(fēng)、口防風(fēng)和河南防風(fēng)具有較好的相似度，而甘肅產(chǎn)小防風(fēng)、云南產(chǎn)云防風(fēng)與之具有較大的差異。由此說明，所建立的防風(fēng)藥材揮發(fā)油指紋圖譜適用于防風(fēng)藥材的真?zhèn)舞b別。

圖1 防風(fēng)藥材揮發(fā)油指紋圖譜

表2 防風(fēng)藥材HPLC指紋圖譜共有峰的相似度

4 討論

本實驗通過對不同產(chǎn)區(qū)、不同來源的防風(fēng)及其偽品的揮發(fā)油類成分進行氣相分析，并建立了氣相指紋圖譜，通過對指紋圖譜及相似度分析結(jié)果進行對比發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地的正品防風(fēng)具有較好的相似性，而不同來源防風(fēng)，其所含揮發(fā)油種類存在顯著差異。相似度分析結(jié)果表明，內(nèi)蒙古、黑龍江、河北、河南產(chǎn)的防風(fēng)與對照圖譜具有較好的相似性，說明所含揮發(fā)油種類相似度較高；甘肅、云南所產(chǎn)防風(fēng)與對照圖譜相似度較差，可見所建立的氣相指紋圖譜可用于防風(fēng)藥材的真?zhèn)舞b別。