益生菌Probio-Fit?聯(lián)合二甲雙胍對(duì)Ⅱ型糖尿病患者療效及腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響

陳 曄 王彥杰 尤利軍 靳 昊 張 丹 李冬梅 張和平*

（1 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 乳品生物技術(shù)與工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 呼和浩特010018）

2 內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院 呼和浩特010018）

3 呼倫貝爾市海拉爾區(qū)人民醫(yī)院 內(nèi)蒙古呼倫貝爾021000）

Ⅱ型糖尿?。═2D）是一種流行性代謝疾病，隨著人們生活方式的改變，該病患者在近幾十年來急劇增加，并逐漸趨于年輕化[1]。目前已成為全世界重要的公共衛(wèi)生問題之一。同時(shí)T2D 代謝異?？蓪?dǎo)致多種嚴(yán)重并發(fā)癥，如糖尿病視網(wǎng)膜病變、心血管疾病、腎病等[2]，給家庭和社會(huì)帶來沉重負(fù)擔(dān)。

之前很多研究認(rèn)為T2D 主要是由胰島素抗性和β 細(xì)胞功能紊亂所引起，然而隨著腸道菌群研究的深入，發(fā)現(xiàn)腸道菌群紊亂也會(huì)導(dǎo)致T2D 的發(fā)生、發(fā)展[3]。宏基因組關(guān)聯(lián)分析顯示T2D 患者腸道菌群出現(xiàn)失調(diào)，部分丁酸鹽產(chǎn)生菌減少，大量條件致病菌增多，厚壁菌門和梭狀芽胞桿菌綱顯著降低[4-5]。鑒于此，患者腸道菌群組成及變化可以作為除臨床指標(biāo)外評(píng)價(jià)T2D 患者健康狀態(tài)及藥物治療效果的另一項(xiàng)重要指標(biāo)。

二甲雙胍作為一種雙胍類藥物，是當(dāng)前治療初期T2D 的首選藥物之一，它具有較好的降低肝臟糖異生及抑制腸道對(duì)糖吸收的作用[6]。此外，Naito 等[7]發(fā)現(xiàn)高脂飲食的肥胖小鼠攝入益生菌Lactobacillus casei Shirota 后，胰島素抗性得到改善；補(bǔ)充Bifidobacteria 可改善胰島素抗性，促進(jìn)血糖濃度降低[8]；飲用益生菌酸奶可顯著降低血糖濃度和糖化血紅蛋白濃度（HbAlc）[9]。上述研究均表明，攝入益生菌或益生菌發(fā)酵產(chǎn)品對(duì)于改善T2D患者健康狀態(tài)具有一定的作用。由此，本文提出疑問，即：將益生菌與二甲雙胍聯(lián)合治療T2D 能否取得比單獨(dú)使用二甲雙胍更好的治療效果？

基于上述問題，本研究選取診斷為T2D 的患者，以服用安慰劑聯(lián)合二甲雙胍作為安慰劑組，以服用益生菌Probio-Fit?聯(lián)合二甲雙胍作為益生菌組，通過測定患者治療前、后的臨床指標(biāo)，分析糞便腸道菌群結(jié)構(gòu)和菌群代謝通路的差異和變化，評(píng)估兩種方法的療效。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

羅氏COBAS C501 全自動(dòng)生化分析儀，美國Roche Diagnostics 公司；Applied biosystems PCR儀，基因有限公司；ND-1000 型微量紫外分光光度計(jì)，美國生命技術(shù)公司；HWS24 型恒溫水浴鍋，上海一恒科技有限公司；AR2202CN 電子天平，奧豪斯儀器上海有限公司；Eppendorf 5810R 高速冷凍離心機(jī)，德國Eppendorf 公司；ML-30L 型全自動(dòng)高壓蒸汽滅菌器，日本HIRAYAMA 公司。

糞便宏基因組DNA 試劑盒 （QIAamp Fast DNA Stool Mini kit），德國QIAGEN 公司；南芯糞便保護(hù)液試劑盒（longseegen stool storage kit），廣東南芯醫(yī)療科技；Illumina HiseqXten 測序平臺(tái)，美國Illumina 公司。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

納入本研究的10 名Ⅱ型糖尿病志愿者中，3名為女性，7 名為男性，具體志愿者信息如表1所示。隨機(jī)分為益生菌組（6 人）、安慰劑組（4 人），進(jìn)行為期90 d 的益生菌或安慰劑干預(yù)。益生菌組實(shí)驗(yàn)人員在標(biāo)準(zhǔn)二甲雙胍治療（二甲雙胍腸溶片，拜耳公司產(chǎn)品，商品名：格華止）前提下，加服益生菌Probio-Fit?2 g（1.5×1010CFU/g）。益生菌Probio-Fit?中含有3 種本實(shí)驗(yàn)室自主篩選的優(yōu)良益生菌，分別為干酪乳桿菌張（Lactobacillus casei Zhang），植物乳桿菌P-8（Lactobacillus plantarum P-8）和動(dòng)物雙歧桿菌V9（Bifidobacterium animalis subsp.lactis V9），活菌數(shù)均為5×109CFU/g。安慰劑組患者在標(biāo)準(zhǔn)二甲雙胍治療基礎(chǔ)上，加服安慰劑2 g。

表1 志愿者基本信息Table1 The information of volunteers

1.3 方法

1.3.1 血液及糞便樣品采集 采集志愿者0 d 和90 d 血液樣本和糞便樣本，血液樣本采集到真空采血管中，離心后取血清測定與T2D 相關(guān)的血液指標(biāo)。糞便樣品使用一次性糞便采樣器收集，并用干冰冷藏寄回內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)乳品生物技術(shù)與工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，于-80 ℃冰箱暫存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 臨床指標(biāo)測定 將采集后的血液樣本離心后收集血清，使用羅氏COBAS C501 全自動(dòng)生化分析儀測定空腹血糖 （GLU）、 糖化血紅蛋白（HbAlc）、總膽固醇（TC）、血尿酸（BUA）、甘油三酯（TG）、 高密度脂蛋白（HDL）、 低密度脂蛋白（LDL）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、尿素氮（BUN）和血肌酐（SCR）。

1.3.3 糞便宏基因組DNA 提取及測序 使用宏基因組DNA 提取試劑盒提取糞便樣品宏基因組，利用1.0%瓊脂糖凝膠電泳和微量紫外分光光度計(jì)檢測DNA 樣品的完整度、純度和濃度，將符合要求的DNA 置于-20 ℃冰箱備用。使用Illumina Hiseq Xten 測序平臺(tái)檢測所有糞便樣本宏基因組DNA 序列。

1.3.4 生物信息學(xué)分析 應(yīng)用HUMAnN2 工具對(duì)高質(zhì)量的序列進(jìn)行微生物群落結(jié)構(gòu)分析[10]。同時(shí)基于物種信息使用香農(nóng)指數(shù)（Shannon index）和辛普森指數(shù)（Simpson index）對(duì)每份樣本的α 多樣性指數(shù)進(jìn)行評(píng)估，通過Parallel-META 軟件 （Version 3.4.4）分析腸道菌群功能和代謝通路信息[11]。使用megahit 軟件基于宏基因組數(shù)據(jù)組裝單個(gè)細(xì)菌基因組，通過binning 方法在菌株水平分析益生菌對(duì)腸道菌群的影響[12]。利用metabat2 軟件取出高質(zhì)量基因組（完整度＞80%，污染率＜5%）。使用drep 軟件[12]，基于默認(rèn)參數(shù)去除冗余基因組，將每個(gè)樣品的clean reads 比對(duì)到非冗余基因組集合，計(jì)算每百萬條序列中來自某基因每千堿基長度的序列數(shù)，即bin 在樣品下的豐度=（該樣品比對(duì)到該bin 序列數(shù)×106）/[該樣品樣品比對(duì)到非冗余bin集合序列數(shù)×bin 長度（bp）]。

1.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用配對(duì)Mann-Whitney 檢驗(yàn)對(duì)兩組樣品治療前、 后菌群結(jié)構(gòu)進(jìn)行差異顯著性分析，使用Benjaminiand Hochberg 的方法校正多次檢驗(yàn)的假陽性率[13]，將P＜0.05 視為差異顯著。使用R 語言軟件（v3.3.2）中的Prcomp 函數(shù)進(jìn)行主成分分析（Principal component analysis，PCA）。將不同組Z 值＞1.6 的代謝通路判定為在兩組間存在顯著差異[14]。使用R 軟件和Origin 8.5 軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)期間血液指標(biāo)分析

分析了治療前和治療90 d 后血液樣品中11種常見的基礎(chǔ)指標(biāo)，結(jié)果見表2。

表2 血液指標(biāo)信息Table2 The information of blood indicators

運(yùn)用Wilcoxon 檢驗(yàn)對(duì)治療前、后指標(biāo)進(jìn)行差異性檢驗(yàn)。基于血液指標(biāo)的數(shù)據(jù)顯示，經(jīng)過90 d的治療，兩組患者空腹血糖、糖化血紅蛋白、總膽固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白和血尿酸均有較大幅度下降，高密度脂蛋白無明顯變化。谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和血尿氮有上升趨勢。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)在益生菌組空腹血糖、 糖化血紅蛋白和血尿酸出現(xiàn)顯著下降（P＜0.05），而安慰劑組無顯著差異。其它各項(xiàng)血液指標(biāo)如甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、血尿氮和血肌酐在治療前、后均無顯著差異。

2.2 T2D 患者腸道菌群多樣性分析

通過Illumina Hiseq Xten 宏基因組測序，20份糞便樣品共得到182.13Gb 高質(zhì)量序列，平均每個(gè)樣品（7.29±0.97）Gb 序列?；谥委熐皹悠返腍UMAnN2 分析結(jié)果，發(fā)現(xiàn)T2D 患者腸道菌群在門水平主要由厚壁菌門 （Firmicutes）、 擬桿菌門（Bacteroidetes）、放線菌門（Actinobacteria）、變形菌門（Proteobacteria）和疣微菌門（Verrucomicrobia）組成，各菌門的相對(duì)含量分別為45.85%，33.11%，16.48%，2.87%和1.55%。各樣品治療前、后，腸道菌群在屬和種水平的相對(duì)含量如圖1所示，在屬水平上所有樣品共檢測到89 個(gè)菌屬，其中19 個(gè)菌屬的相對(duì)含量大于1%（圖1a）。這19 個(gè)菌屬共占腸道細(xì)菌菌群的92.26%，其中真桿菌屬（Eubacterium）、雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）、糞桿菌屬（Faecalibacterium）、普氏菌屬（Prevotella）和瘤胃球菌屬（Ruminococcus）的平均相對(duì)含量最高，分別為12.35%，12.24%，6.12%，6.00%和5.72%。在種水平上共檢測到240 個(gè)菌種，其中平均相對(duì)含量大于1%的共有26 個(gè) （圖1b），糞便擬桿菌（Bacteroides stercoris，9.89%）、 直腸真桿菌（Eubacterium rectale，7.70%）、普拉氏糞桿菌（Faecalibacterium prausnitzii，6.12%）、青春雙歧桿菌（Bifidobacterium adolescentis，5.78%） 和長雙歧桿菌（Bifidobacterium longum，5.08%） 等相對(duì)含量較高。

圖1 志愿者腸道菌群組成Fig.1 The gut bacterial composition of volunteers

2.3 T2D 患者經(jīng)治療后腸道菌群結(jié)構(gòu)的變化分析

通過分析香農(nóng)指數(shù)和辛普森指數(shù)評(píng)估菌群α多樣性。由圖2可知，雖然治療前、后α 多樣性指數(shù)沒有發(fā)生顯著變化，但是治療后患者腸道菌群α 多樣性均呈下降趨勢。

圖2 樣品α 多樣性指數(shù)比較分析Fig.2 Comparison of the α-diversity index between samples

為了進(jìn)一步評(píng)估兩種治療方案對(duì)腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響，采用主成分分析評(píng)估患者在治療前、后腸道菌群結(jié)構(gòu)的差異，結(jié)果如圖3所示。同一患者在治療前、后存在明顯的聚類趨勢，同時(shí)益生菌組治療前、后菌群結(jié)構(gòu)更相似，安慰劑組則表現(xiàn)的更加離散。

配對(duì)Mann-Whitney 檢驗(yàn)結(jié)果顯示，益生菌組治療后，門水平上放線菌門顯著增加（P＜0.05），在屬的水平，雙歧桿菌屬和瘤胃球菌屬顯著增加（P＜0.05），另支菌屬顯著降低（P＜0.05）；在種的水平上霍氏真桿菌、長鏈多爾氏菌（Dorea formicigenerans）和卵瘤胃球菌（Ruminococcus obeum）顯著增加（P＜0.05），單形擬桿菌（Bacteroides uniformis）、毛螺科菌（Lachnospiraceae bacterium）、多行擬桿菌（Bacteroides thetaiotaomicron）和nordii 擬桿菌（Bacteroides nordii）顯著降低（P＜0.05）。值得關(guān)注的是動(dòng)物雙歧桿菌在益生菌組治療90 d 后有明顯的增加，接近顯著水平（P=0.06），而安慰劑組未發(fā)現(xiàn)顯著變化的細(xì)菌。

2.4 基于宏基因組數(shù)據(jù)的菌株水平基因組組裝

圖3 志愿者菌群結(jié)構(gòu)主成分分析圖Fig.3 The PCA of gut microbiota population structure

基于各樣品測序數(shù)據(jù)，本研究共組裝得到1 192 個(gè)菌株基因組。通過進(jìn)一步評(píng)估各菌株基因組的完整度和污染率，剔除完整度低于80%或污染率大于5%的基因組，最后保留了230 個(gè)菌株基因組進(jìn)行后續(xù)分析。通過對(duì)各基因組進(jìn)行注釋，結(jié)果顯示：上述基因組可以注釋到103 個(gè)不同的菌株，組裝結(jié)果中數(shù)量較多的菌株包括普拉糞桿菌（Faecalibacterium prausnitzii）13 個(gè)、未培養(yǎng)瘤胃球菌屬 （uncultured Ruminococcus sp.）11 個(gè)和瘤胃桿菌屬（Ruminococcaceae bacterium）10 個(gè)。抽取各樣品的測序序列以相同序列數(shù)后，將測序原始數(shù)據(jù)與各基因組進(jìn)行比對(duì)，以確定各菌株在各樣品中的相對(duì)含量。通過配對(duì)Mann-Whitney 檢驗(yàn)比較治療前、后各菌株在樣品中的變化，共發(fā)現(xiàn)14個(gè)菌株在益生菌組治療前、后發(fā)生了顯著變化，結(jié)果如表3所示。益生菌組治療后，有較多的屬于擬桿菌屬和梭菌屬的菌株相對(duì)含量顯著下降，而部分屬于雙歧桿菌和真桿菌屬的菌株顯著升高。

2.5 腸道菌群與血液指標(biāo)的相關(guān)性分析

由上述分析發(fā)現(xiàn)患者菌群發(fā)生一定改變，同時(shí)患者病情得到改善。本文運(yùn)用Spearman’s rank相關(guān)性分析解析菌群與各血液指標(biāo)的相關(guān)性，結(jié)果如圖4所示。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雙歧桿菌、丹毒絲菌屬（Erysipelotrichaceae）、 長雙歧桿菌和布氏瘤胃球菌與空腹血糖濃度負(fù)相關(guān)，羅斯氏菌屬和毛螺旋菌屬與空腹血糖正相關(guān)；雙歧桿菌屬、丹毒絲菌屬和長雙歧桿菌與糖化血紅蛋白濃度負(fù)相關(guān)，羅斯氏菌屬、普通擬桿菌、馬塞擬桿菌、多行擬桿菌、nordii 擬桿菌和longicatena 多爾氏菌與糖化血紅蛋白濃度正相關(guān)；多爾氏菌、假小鏈雙歧桿菌、長鏈多爾氏菌和霍氏真桿菌與血尿酸濃度負(fù)相關(guān)，毛螺科菌屬和糞便擬桿菌與血尿酸濃度正相關(guān)。

表3 益生菌治療前、后發(fā)生顯著變化的菌株Table3 The strains have changed after supplement probiotic

圖4 腸道優(yōu)勢菌群與血液指標(biāo)關(guān)聯(lián)分析熱圖Fig.4 The spearman correlation between gut microbiota and blood indicators

2.6 腸道菌群功能代謝分析

通過Parallel-META 軟件將基因序列與KEGG（Kyoto encyclopedia of genes and genomes）數(shù)據(jù)庫進(jìn)行注釋，得到6 549 個(gè)KOs（Kyoto encyclopedia）。為了解析治療前、后腸道菌群功能的改變，本研究將所檢測到的基因進(jìn)一步劃分到KEGG 代謝通路水平，分析治療前、后兩組代謝通路差異，結(jié)果如表4所示。

表4 治療前、后腸道菌群差異代謝通路Table4 Differential metabolic pathway of gut microbiota before and after treatment

益生菌組注釋得到4 個(gè)差異代謝通路，均在治療后豐富度下降，包括酮體的合成與降解，鞭毛組裝，脂多糖合成和細(xì)菌趨藥性。安慰劑組注釋得到4 個(gè)差異代謝通路，同樣在治療后豐富度下降，包括脂多糖合成，鞭毛組裝，細(xì)菌分泌系統(tǒng)和香葉醇降解。

治療后兩組患者腸道菌群之間差異代謝通路如表5所示。結(jié)果顯示：安慰劑組含量較高的代謝通路有3 個(gè)，包括香葉醇降解，磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)和鞭毛組裝。益生菌組含量較高的代謝通路包括雙酚降解和D-谷丙酰胺代謝通路。

表5 治療后益生菌組和對(duì)照組之間的差異代謝通路Table5 Differential metabolic pathways between probiotic group and control group after treatment

3 討論

T2D 是一種因胰島素作用不足而引起以高血糖為特征的代謝性疾病，除了常規(guī)的血糖值外，糖化血紅蛋白也是一種重要的診斷指標(biāo)[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，患者經(jīng)治療后各項(xiàng)空腹血糖、總膽固醇、糖化血紅蛋白和甘油三脂均有所改善，由此證明兩種治療方案可有效緩解T2D 患者癥狀。其中益生菌組空腹血糖和糖化血紅蛋白出現(xiàn)顯著下降，這一結(jié)果與之前的研究結(jié)果相一致[16]。谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和血尿氮出現(xiàn)上升趨勢，可能是因機(jī)體藥物的攝入對(duì)肝臟、腎臟損傷所致。值得關(guān)注的是益生菌組血尿酸濃度顯著降低，血尿酸與腎臟疾病相關(guān)，血尿酸增加可加重糖尿病腎病的發(fā)生[17]。與安慰劑組相比，補(bǔ)充益生菌Probio-Fit?可有效輔助二甲雙胍達(dá)到降血糖的作用，同時(shí)具有降低糖尿病、腎病的可能性。

有研究發(fā)現(xiàn)二甲雙胍的作用位置以腸道為主，而靜脈注射二甲雙胍無法調(diào)節(jié)人類血糖[18-19]。這可能由于二甲雙胍的降血糖作用與調(diào)節(jié)腸道菌群中的部分物種有關(guān)，這些菌群協(xié)助二甲雙胍發(fā)揮降糖作用[20]。也有研究認(rèn)為藥物能夠改變腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)和代謝，從而影響宿主代謝功能[21]。通過對(duì)患者腸道菌群結(jié)構(gòu)的分析發(fā)現(xiàn)：本研究患者的腸道菌群結(jié)構(gòu)與Nadja 等[4]的研究結(jié)果相似。值得注意的是患者經(jīng)過二甲雙胍治療后，腸道菌群α 多樣性均出現(xiàn)下降趨勢，該結(jié)果與二甲雙胍顯著降低高脂飲食肥胖Wistar 大鼠腸道菌群多樣性和豐度相一致[22]。該變化趨勢據(jù)報(bào)道[23]可增加葡萄糖耐受性和胰島素敏感性。

患者在接受二甲雙胍治療的同時(shí)補(bǔ)充益生菌Probio-Fit?，結(jié)果發(fā)現(xiàn)大量有益菌如雙歧桿菌屬和霍氏真桿菌相對(duì)含量顯著增加；而有害菌降低，如另支菌屬和毛螺科菌相對(duì)含量顯著下降。同時(shí)還有部分?jǐn)M桿菌種出現(xiàn)顯著下降。有研究[24]發(fā)現(xiàn)腸道中的擬桿菌與另支菌屬在腸道中相對(duì)含量常出現(xiàn)同時(shí)升高或降低的現(xiàn)象。霍氏真桿菌是一種可以代謝葡萄糖和發(fā)酵中間產(chǎn)物產(chǎn)生丁酸鹽的細(xì)菌[25]。近期研究認(rèn)為，丁酸鹽是一種短鏈脂肪酸，短鏈脂肪酸占健康人能量來源的5%～10%，對(duì)哺乳動(dòng)物的能量代謝有多重有益影響[26-27]，而患有T2D 的人群腸道中丁酸鹽產(chǎn)生菌減少[28]，因此該菌的增加對(duì)T2D 患者有益。毛螺科菌與代謝紊亂相關(guān)，它可誘導(dǎo)空腹血糖顯著升高[29]，該結(jié)果與本研究結(jié)果一致。同樣霍氏真桿菌與代謝紊亂正相關(guān)。本研究顯示益生菌組該菌出現(xiàn)顯著降低。趙立平等[30]也發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充復(fù)合益生菌可降低代謝紊亂小鼠腸道中霍氏真桿菌的相對(duì)含量。本研究發(fā)現(xiàn)，治療90 d 時(shí)，益生菌組發(fā)現(xiàn)較多的動(dòng)物雙歧桿菌，這可能與攝入的益生菌Probio-Fit?中含有動(dòng)物雙歧桿菌V9 有關(guān)。眾多研究顯示，雙歧桿菌可作為益生菌添加在食品中，是臨床干預(yù)的潛在理想對(duì)象。有研究稱糖尿病人群腸道中雙歧桿菌的數(shù)量顯著少于健康人群[31]。本研究通過相關(guān)性分析顯示：雙歧桿菌與空腹血糖和糖化血紅蛋白呈負(fù)相關(guān)。Gu 等[32]也得到相似的研究結(jié)果。通過口服攝入雙歧桿菌可能是一種有效降低T2D 患者血糖的途徑。PCA 分析顯示：益生菌組治療前、后菌群結(jié)構(gòu)更為相似，這可能是由于二甲雙胍攝入導(dǎo)致腸道菌群在短時(shí)間內(nèi)發(fā)生劇烈的變化，而益生菌可在一定程度上維持腸道菌群穩(wěn)態(tài)，緩解因藥物攝入而導(dǎo)致的腸道菌群失調(diào)。本研究采用單菌株基因組組裝的方法成功組裝出的一些菌株在益生菌組治療過程中發(fā)生了顯著變化，其中屬于兩歧雙歧桿菌菌株、 瘤胃球菌屬菌株和屬于真桿菌的菌株顯著增加，而較多屬于擬桿菌屬菌株出現(xiàn)顯著下降，整體菌株水平的變化趨勢與HUMAnN2 工具統(tǒng)計(jì)得到的結(jié)果一致。而這些菌株的代謝功能有待后續(xù)的基因組學(xué)分析，以進(jìn)一步揭示其變化與T2D 癥狀之間的關(guān)系。

在功能水平，有研究發(fā)現(xiàn)腸道微生物產(chǎn)生的脂多糖具有誘發(fā)肥胖，胰島素抗性和糖尿病[21，33]的作用，而具有鞭毛組裝通路的相關(guān)細(xì)菌則可以間接參與肥胖等人類代謝性疾病[34]。本研究中，兩組患者治療后腸道菌群執(zhí)行脂多糖合成和鞭毛組裝代謝的基因豐富度均顯著下降，表明患者腸道菌群代謝向有利于宿主健康的方向轉(zhuǎn)變。此外，安慰劑組在治療后鞭毛組裝通路豐度較益生菌組高，表明益生菌結(jié)合二甲雙胍比單獨(dú)服用二甲雙胍效果好。香葉醇代謝通路主要包含于假單胞菌屬、無色桿菌屬和農(nóng)桿菌屬中[35]，而這些菌屬大多為致病菌和條件致病菌[36]。本研究結(jié)果表明香葉醇降解途徑在治療后豐富度降低，同時(shí)治療后安慰劑組比益生菌組豐富度高，這可能與上述有害菌的降低有關(guān)。由此也表明益生菌對(duì)部分有害菌具有抑制作用。

4 結(jié)論

綜上所述，對(duì)T2D 患者補(bǔ)充益生菌Probio-Fit?有助于二甲雙胍的降血糖作用，同時(shí)能改善腸道菌群的結(jié)構(gòu)和代謝通路，使患者腸道中一些致病菌降低，有益菌升高，部分參與代謝性相關(guān)疾病的代謝通路基因豐富度下降。然而，樣本量較少是本研究的局限性。本研究團(tuán)隊(duì)已開始進(jìn)行大量樣本的采集，以更深入地分析復(fù)合益生菌聯(lián)合二甲雙胍對(duì)T2D 患者治療的影響，以期為治療T2D 患者提供更有效的方法。