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    甲狀腺自身免疫性抗體及甲狀腺球蛋白稀釋性能分析

    2019-05-10 00:19:06唐芳張波張立
    健康大視野 2019年10期
    關(guān)鍵詞:稀釋液回收率

    唐芳 張波 張立

    【摘 要】目的:通過分析甲狀腺自身抗體TRAb、TGAb、TPOAb及TG的稀釋性能,以探究各項目能否稀釋、最佳的稀釋液及最適的稀釋倍數(shù)。 方法:選取核工業(yè)四一六醫(yī)院進行TRAb、TGAb、TPOAb及TG檢測的門診患者血清各20份,濃度超過正常參考值上限但不超過各項目最高檢測限;分別檢測各項目組的稀釋回收率,用相關(guān)分析和線性回歸進行分析比較。用配對t檢驗分析TRAb和TGAb不同稀釋濃度下的差異。結(jié)果:TRAb使用混合陰性血清和通用稀釋液的平均回收率分別為(154.6±37.6)%和(126.3±33.2)%,CV分別為25%和27%;TGAb使用不同稀釋液時回收率分別為(231.6±182.9)%和(200.8±149.4)%,CV分別為79%和75%;TPOAb稀釋后的平均回收率為(238.9±78.3)%,CV為33%;TG的回收率在(100.7±5.2)%,CV為5.3%。TRAb和TGAb不同稀釋液稀釋所得數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:TRAb可選擇1:5進行稀釋,所得結(jié)果需結(jié)合數(shù)據(jù)模型TRAb(混合陰性血清)期望值=0.740×測定值-0.036進行調(diào)整;TGAb和TPOAb在目前實驗室條件下不建議稀釋;TG可選擇1:20的倍數(shù)進行稀釋。

    【關(guān)鍵詞】稀釋倍數(shù) ;稀釋液;TRAb;TGAb;TPOAb;TG;回收率

    【中圖分類號】R581【文獻標(biāo)識碼】A【文章編號】1005-0019(2019)10--01

    化學(xué)發(fā)光免疫分析法將高靈敏的光反應(yīng)與高特異性的免疫反應(yīng)結(jié)合,其特異性好、靈敏度高,但反應(yīng)體系明顯受溫度、濕度、基質(zhì)效應(yīng)、反應(yīng)原理、儀器、試劑性能影響,均有各自的最高檢出水平限制。在日常臨床工作中,患者某項指標(biāo)超過最高檢出水平時,往往需要對標(biāo)本進行稀釋后重測,以得較準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。由于免疫反應(yīng)定量分析的反應(yīng)體系受基質(zhì)效應(yīng)的影響較明顯,因此在選擇稀釋液及稀釋倍數(shù)時,需格外謹慎[1]。本文就甲狀腺自身免疫性抗體促甲狀腺激素受體抗體(Thyrotropin-receptor antibody,TRAb);抗甲狀腺球蛋白抗體(thyroglobulin antibody,TGAb);甲狀腺過氧化物酶抗體(thyroperoxidase antibady,TPOAb)及甲狀腺球蛋白(thyroglobulin,TG)的稀釋性能進行分析,擬找出該檢測項目的最適稀釋液和最佳的稀釋倍數(shù)。

    1 資料與方法

    1.1 標(biāo)本來源 隨機收集核工業(yè)四一六醫(yī)院2018年5月門診患者血清標(biāo)本各20份,標(biāo)本無黃疸、溶血、脂血。項目參考值范圍:TRAb <1.75IU/L;TGAb <115IU/ml;TPOAb<34IU/ml;TG 1.4-78ng/ml。所選標(biāo)本濃度超過參考值范圍上限,低于此項目的最高檢測限,如下:TRAb(10 - 40)IU/L,TGAb(900-4000)IU/ml,TPOAb(290-600)IU/ml,TG(100-500)ng/ml。收集到的標(biāo)本貯存于-20℃冰箱中,待集中分析。

    1.2 方法

    1.2.1 混合陰性血清制備:收集新鮮血清標(biāo)本,充分混合后測定TRAb、TGAb水平,要求所測濃度都低于各自的最低檢測水平:0.3IU/L和10.00IU/ml[2]。

    1.2.2 稀釋液及稀釋方案選擇:(1)TRAb使用羅氏公司提供的通用稀釋液和混合陰性血清,分別進行5倍、10倍、20倍及40倍稀釋。(2)TGAb使用羅氏公司的通用稀釋液和混合陰性血清,分別進行2倍、5倍、10倍及20倍稀釋。(3)TPOAb使用羅氏公司的通用稀釋液,分別進行5倍、10倍及20倍稀釋。(4)TG使用羅氏公司的通用稀釋液,進行5倍、10倍及20倍稀釋[2]。根據(jù)原始血清標(biāo)本結(jié)果和各自稀釋倍數(shù)計算出各組項目期望值,實際測定結(jié)果做為實測值,回收率=實測值/期望值×100%。

    1.2.3 檢測方法:電化學(xué)發(fā)光免疫分析法(ECLIA),檢測儀器為羅氏電化學(xué)發(fā)光分析儀cobase601,檢測試劑及質(zhì)控品均來自羅氏公司。

    1.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法:采用SPSS22.0軟件進行統(tǒng)計。計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,各項檢測指標(biāo)稀釋后實測值與期望值采用Pearson相關(guān)檢驗和回歸分析;TRAb與TGAb在使用不同稀釋液后所得結(jié)果之間的比較,采用配對t檢驗進行分析。P<0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2結(jié)果

    2.1 各項目組回收率比較

    根據(jù)國家衛(wèi)計委《臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》,回收率在100±15%時為稀釋性能可接受范圍[3]。從回收率看,僅TG在選用的各個稀釋倍數(shù)的回收率滿足性能驗證的要求。2.2 各項目組Pearson相關(guān)及回歸分析(1)TRAb使用混合陰性血清稀釋液和通用稀釋液時,R2為0.954和0.876;TGAb使用混合陰性血清稀釋液和通用稀釋液以及TPOAb稀釋時,引起的變異占總變異的比例為0.483、0.573和0.788,建立的回歸方程較差。TG的R2為0.998,稀釋原因引起變異占總變異的比例分別為0.954和0.998,歸入回歸方程的變量顯著,建立的回歸方程好。

    (2)各項目根據(jù)回歸分析建立的模型如下:

    混合陰性血清期望值:

    TRAb=0.740×測定值-0.036

    TGAb=84.01+0.480×測定值

    通用稀釋液期望值:

    TRAb=0.478+0.588×測定值

    TGAb=39.90+0.585×測定值

    TPOAb=3.817+0.443×測定值

    TG =1.046×測定值-0.597

    其中, TRAb(通用稀釋液)、TGAb兩種稀釋液條件下及TPOAb各自所獲得的模型由于回歸平方和數(shù)據(jù)占總平方和的比例較低,所建線性模型解決不了總的平方和,模型擬合效果較差。TG模型擬合效果好。

    2.3 TRAb及TGAb采用混合陰性血清和通用稀釋液稀釋后各回收率配對t檢驗分析 結(jié)果顯示,不論是TRAb還是TGAb,兩種稀釋液的檢測結(jié)果均有顯著差異(P<0.05)。

    3 討論

    甲狀腺自身免疫性疫?。╝utoimmune thyroid disease,AITD)主要包括自身免疫性甲狀腺功能減退(autoimmune hypothyroidism,AIH)和Graves病。AITD在男性和女性中的發(fā)病率分別為0.2%和2.0%[4]。Graves病在我國人群患病率約為1.2%[5],約占所有甲亢的85%[6];AIH又分為甲狀腺腫型即橋本甲狀腺炎(Hashimotos thyroiditis,HT)和非甲狀腺腫型即原發(fā)性黏液性水腫(Primary myxedema,PM)。TRAb、TGAb、TPOAb是目前臨床常用于AITD的實驗室檢查。TRAb按照功能將其分為刺激型抗體(thyroid stimloating antibody ,TSAb)與抑制型抗體(thyroid blocking antibody ,TBAb)。TSAb主要見于Graves病,它在臨床用于Graves病時期診斷、提示復(fù)發(fā)和判斷是否停藥中有重要的價值,目前實驗室化學(xué)發(fā)光法僅檢測總的TRAb。TGAb是診斷甲狀腺自身免疫性疾病的一個特異性指標(biāo),在HT患者血清中,TGAb陽性檢出率可達90%-95%;TPOAb是HT的診斷標(biāo)志物,70%以上的甲狀腺功能亢進患者、阿托品甲狀腺炎和原發(fā)性黏膜水腫患者體內(nèi)均存TPOAb。TG對于因甲狀腺腫瘤而接受甲狀腺全切的患者術(shù)后的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)有一定的提示作用。

    本次研究TRAb、TGAb、TPOAb及TG主要用電化學(xué)發(fā)光免疫分析。由于疾病的檢測、治療、療效監(jiān)測的需要,臨床醫(yī)生在日常工作中,常常需要檢驗科給出一個具體的數(shù)據(jù)這時,需要對樣本進行稀釋。由于免疫反應(yīng)遵循“海德堡曲線”,當(dāng)對超過線性的樣本進行稀釋時,因基質(zhì)效應(yīng)、操作等引起的誤差,將隨著稀釋倍數(shù)的增大,所有的誤差也同時放大相應(yīng)的倍數(shù),誤差就會更明顯。

    本研究中,根據(jù)廠家試劑說明書和實際工作所能具備的條件,4個分析項目根據(jù)各自不同的需要選用了不同的稀釋液和稀釋倍數(shù)進行檢測。TRAb結(jié)果相對較好的是做5倍和10倍稀釋的結(jié)果;在稀釋液的選擇上,混合陰性血清較通用稀釋液好。在使用混合陰性血清進行的檢測中,TRAb選著5倍稀釋后稀釋數(shù)據(jù)的相關(guān)性良好(0.977),實驗室根據(jù)所建的數(shù)據(jù)模型,進行反算,得到的結(jié)果回收率能滿足質(zhì)量管理的要求。但由于實驗數(shù)據(jù)有限,模型是否能在日常的工作中運用,還需要更多的數(shù)據(jù)進行驗正。

    TGAb無論使用混合陰性血清還是通用稀釋液,稀釋后數(shù)據(jù)的平均回收率均高,不同水平的回收率變異明顯(回收率>200%,SD>100%,CV>70%),各數(shù)據(jù)間無較明顯的規(guī)律可循,因而通過實驗結(jié)果,認為TGAb不宜進行稀釋。TGAb本身檢測范圍較寬,但造成稀釋回收率差是否與試劑本身的不穩(wěn)定因素有關(guān),還需進一步研究。

    TPOAb按照廠家試劑說明書的建議,采用的稀釋液是通用稀釋液,稀釋倍數(shù)5倍進行操作,試驗數(shù)據(jù)回收率仍然很大(206%-270%,SD=33%),因此,建議是在日常工作中不宜選擇稀釋操作。

    TG稀釋后具有很好的回收率(R2=0.998),可以初步判斷各水平的回收率符合性能驗證的要求[3]。在10倍(廠家建議的稀釋倍數(shù))、20倍稀釋得到的數(shù)據(jù)均符合質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)(93.9%-110%)。在日常工作中,選擇20倍做為TG的稀釋倍數(shù),可以得到更寬的檢測范圍,所得的結(jié)果也是可靠的。

    通過本研究,提示因化學(xué)發(fā)光免疫中抗原抗體反應(yīng)中干擾物對分析過程的影響,實驗室在開展新項目或改良試驗方法時,在參考廠家給出的性能參數(shù)時,應(yīng)該對這些性能參數(shù)進行驗證。其中TPOAb及TGAb試驗結(jié)果不能滿足實驗室要求,能否通過降低稀釋比例,或通過使用光電子數(shù)計算的方式得到結(jié)果,因本次實驗未涉及,還需進一步驗證。

    參考文獻

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    葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版.南京:東南大學(xué)出版社.2006:443-444.

    臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證:WST420-2013[S].中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會,2013.

    張秀明,黃憲章,曾方銀,劉忠民.臨床生化檢驗[M].1版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2012:1382-1384.

    陸再英,鐘南山.內(nèi)科學(xué)[M].7版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:712-721.

    中華醫(yī)學(xué)會內(nèi)分泌分會《中國甲狀腺疾病診斷指南》編寫組.中國甲狀腺疾病診治指南--甲狀腺功能亢進癥[J].中華內(nèi)科雜志,2007,46(10):876-882.

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