三種ABO血型檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用

盤(pán)國(guó)雄 劉祉琳 何嘉穎

[摘要]目的 探討微柱凝膠法（MGT）、凝聚胺法（MPT）及玻片法檢測(cè)ABO血型的準(zhǔn)確性及影響因素。方法 分析我院在2017年12月～2018年6月收治的3000例患者的血型鑒定標(biāo)本，使用微柱凝膠法（MGT）、凝聚胺法（MPT）及玻片法進(jìn)行ABO血型正定型檢測(cè)。比較三種血型檢測(cè)方法血型檢測(cè)結(jié)果的復(fù)查率;對(duì)血型結(jié)果可疑的標(biāo)本，加做反定型進(jìn)行復(fù)檢，并分析影響ABO血型檢測(cè)的因素。結(jié)果 3000例標(biāo)本中，發(fā)現(xiàn)血型結(jié)果需復(fù)查者共57例。按復(fù)查率排列為：MGT（0.17%）MPT（27.3%）>MGT（20.0%）;器材因素：MGT（80.0%） >MPT（9.1%）>玻片法（7.3%）;操作因素：MPT（63.6%）>玻片法（22.0%）>MGT（0.0%）。結(jié)論 三種ABO血型檢測(cè)方法均存在某些不足，MGT的準(zhǔn)確率高于MPT及玻片法，建議正反定型相結(jié)合以彌補(bǔ)正定型的不足，為臨床輸血治療提供準(zhǔn)確的ABO血型結(jié)果。

[關(guān)鍵詞]微柱凝膠法;凝聚胺法;玻片法;血型鑒定;復(fù)查率

[中圖分類(lèi)號(hào)] R457.1+1? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-4721（2019）3（c）-0161-04

[Abstract] Objective To discuss the accuracy and influence factors of ABO blood type detected by microcolumn gel test （MGT）， manual polybrene test （MPT） and slide method. Methods Blood identification samples of 3000 patients admitted to our hospital from December 2017 to June 2018 were analyzed， and ABO blood type was detected by MGT， MPT and slide method. Re-examination rate of blood group test results of three blood group detection methods was compared. The samples with suspicious blood group results were re-examined by adding reverse typing， and the factors affecting ABO blood type detection were analyzed. Results Among the 3000 samples， 57 cases were found to need to be re-examined for blood group results. According to the re-examination rate， MGT （0.17%）MPT （27.3%）>MGT （20.0%）; equipment factor： MGT （80.0%）>MPT （9.1%）>Slide Method （7.3%）; operation factor： MPT （63.6%）>Slide Method （22.0%）>MGT （0.0%）. Conclusion There are some deficiencies in three ABO blood group detection methods， the accuracy of MGT is higher than that of MPT and slide method. It is suggested that the combination of positive and negative typing be used to compensate for the deficiency of positive typing and provide accurate ABO blood type results for clinical transfusion treatment.

[Key words] Microcolumn gel test; Manual polybrene test; Slide method; Blood type identification; Re-examination rate

血型鑒定是臨床輸血首要步驟，是確保輸血安全的關(guān)鍵[1]。為了更迅速地獲得血型結(jié)果，很多實(shí)驗(yàn)室常用試管法及玻片法進(jìn)行血型測(cè)定，玻片法因其檢測(cè)快速簡(jiǎn)便，常用作急診血型檢測(cè)或血型篩查[2]。這兩種方法雖然操作簡(jiǎn)單，卻容易受各種因素的影響，操作過(guò)程難于標(biāo)準(zhǔn)化。為了保障輸血安全，近年來(lái)大型醫(yī)院和中心血站都采用微柱凝膠法（MGT）及凝聚胺法（MPT）進(jìn)行血型檢測(cè)，MGT集合了凝膠分子篩過(guò)濾技術(shù)和抗原抗體免疫反應(yīng)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，可以將凝集紅細(xì)胞與分散紅細(xì)胞按區(qū)域分離開(kāi)，使結(jié)果直觀易判[3-4]。MGT既可手工操作也可以配備使用全自動(dòng)血型儀進(jìn)行全程自動(dòng)化標(biāo)準(zhǔn)操作（自動(dòng)吸樣、稀釋、離心，自動(dòng)判讀結(jié)果等），對(duì)于大批量標(biāo)本的檢測(cè)更方便快捷，因此得以廣泛應(yīng)用[5]。MPT法是紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在低離子介質(zhì)中發(fā)生的凝集反應(yīng)，由于待檢紅細(xì)胞經(jīng)過(guò)稀釋洗滌，減少了血漿中非特異性抗體的影響，而且其檢測(cè)直接在原試管中進(jìn)行，抗原及抗體的接觸更直接，從而使該方法的靈敏度及準(zhǔn)確度高于玻片法[6-7]。本研究同時(shí)采用MGT、MPT及玻片法對(duì)3000例標(biāo)本進(jìn)行ABO血型鑒定，對(duì)結(jié)果可疑的標(biāo)本，重測(cè)并加做反定型復(fù)檢，并分析其影響因素。

1資料與方法

1.1一般資料

采用回顧性分析方法，選取我院2017年12月～2018年6月收治的3000例需要作血型鑒定的患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①內(nèi)外婦兒科住院患者，年齡1～76歲，平均（45±3.2）歲;②病情穩(wěn)定，包括輕度及中度貧血患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①新生兒及年齡<1周歲的患者;②重度貧血及搶救患者;③門(mén)診患者。參與本研究的患者均知情同意。本研究已經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2儀器與檢測(cè)試劑

Autovue innova全自動(dòng)血型分析系統(tǒng)及其微柱凝膠試劑卡由Orth-Clinical Diagnostics公司生產(chǎn);抗A、抗B血型定型試劑由上海血液生物研究所提供;抗人球蛋白試劑和凝聚胺試劑由合肥天一生物技術(shù)研究所提供;ABO血型定型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞，由本實(shí)驗(yàn)室按《輸血技術(shù)學(xué)》[8]制備，系3名獻(xiàn)血員新鮮紅細(xì)胞洗滌后混合使用。

1.3 檢測(cè)方法

抽取患者靜脈血3～5 ml（抗凝），離心分離血漿與紅細(xì)胞，用全自動(dòng)血型儀-MGT對(duì)所有標(biāo)本進(jìn)行ABO血型正反定型檢測(cè)，獲得正確的血型結(jié)果，作為對(duì)照組。使用MG、MPT及玻片法對(duì)同一標(biāo)本進(jìn)行ABO血型正定型檢測(cè)，對(duì)血型結(jié)果可疑（不確定）或與對(duì)照組結(jié)果不相符的標(biāo)本，在排除影響因素后再加做反定型進(jìn)行復(fù)檢確認(rèn)，并查找分析原因。

1.3.1 MGT? 標(biāo)本離心2 min后直接用Autovue innova全自動(dòng)血型分析系統(tǒng)進(jìn)行自動(dòng)吸樣檢測(cè)，由儀器讀數(shù)直接導(dǎo)出實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.3.2 MPT法? 加入洗滌后5%的紅細(xì)胞懸液1滴后， 每管加入低離子溶液0.7 ml，再加凝聚胺溶液2滴，離心棄去上清夜，觀察有無(wú)凝集（若無(wú)凝集需重做），再加入懸浮液2滴，1 min后觀察結(jié)果。

1.3.3 玻片法? 先將玻片用蠟筆進(jìn)行劃線(xiàn)分A、B區(qū)，再于玻片中分別加入抗A、 抗B標(biāo)準(zhǔn)血清及抗凝全血各2滴， 緩慢揺動(dòng)玻片1～2 min后觀察結(jié)果。

1.3.4回顧實(shí)驗(yàn)過(guò)程? 查找導(dǎo)致血型結(jié)果異常的原因，根據(jù)其性質(zhì)將其歸類(lèi)成：標(biāo)本因素（包括溶血，高濃度纖維蛋白，高效價(jià)冷凝集素、抗原明顯減弱等）;器材因素（包括實(shí)驗(yàn)儀器、耗材、試劑等）;操作因素（包括操作不當(dāng)、人為錯(cuò)誤等）三類(lèi)。

1.4觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

MGT：凝集的紅細(xì)胞位于凝膠中部或上部，為陽(yáng)性，紅細(xì)胞位于凝膠底部為陰性。凝集的紅細(xì)胞部位不明確或難以辨認(rèn)，儀器自動(dòng)報(bào)警提示進(jìn)行人工判斷的為可疑結(jié)果。MPT法與傳統(tǒng)玻片法：凝集塊散開(kāi)者為陰性，凝集塊不散開(kāi)者為陽(yáng)性。凝集呈小顆粒狀，不能明確判斷的為可疑結(jié)果，需用顯微鏡進(jìn)行觀察。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用SPSS 17.0軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1三種檢測(cè)方法ABO血型結(jié)果復(fù)查率的比較

3000例標(biāo)本中，發(fā)現(xiàn)血型結(jié)果需復(fù)查者共57例。按復(fù)查率排列為：MGT（0.17%）

2.2 三種檢測(cè)方法血型實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響因素的比較

標(biāo)本因素：玻片法（70.7%）>MPT（27.3%）>MGT（20.0%）;器材因素：MGT（80.0%） >MPT（9.1%）>玻片法（7.3%）;操作因素：MPT（63.6%）>玻片法（22.0%）>MGT（0.0%）。MGT、MPT法的影響因素比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.7850，P=0.03229），MPT、玻片法的影響因素比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.5950，P=0.05517）;玻片法、MGT的影響因素比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=18.327，P=0.0038）（表2）。

3討論

MGT檢測(cè)原理基于單克隆抗體技術(shù)[9-10]，其特異性及準(zhǔn)確率（99.73%）高于玻片法與MPT，因其既可手工操作也可以配備使用全自動(dòng)血型儀進(jìn)行全程自動(dòng)化標(biāo)準(zhǔn)操作，所以MGT已逐漸作為常規(guī)方法應(yīng)用于血型定型、未知血型抗體篩查以及直接抗球蛋白等試驗(yàn)。MGT的復(fù)查率最低，受各種因素影響最少，其次為MPT，其結(jié)果與MGT高度吻合，而傳統(tǒng)玻片法的復(fù)查率最高，易受各種因素影響。MGT在檢測(cè)血型IgG不完全抗體等方面也有一定的優(yōu)勢(shì)，采用MGT檢測(cè)新生兒血型血清學(xué)檢查的準(zhǔn)確性及敏感性最佳，MGT在新生兒ABO溶血患兒輸血前檢測(cè)中的作用是顯著的，值得臨床推廣應(yīng)用。MGT也存在某些不足，因其自動(dòng)化程度高，所以易受儀器及試劑因素的影響，離心不徹底導(dǎo)致紅細(xì)胞濃度過(guò)低或過(guò)高、血清中纖維蛋白含量過(guò)高、標(biāo)本含高效價(jià)冷凝集素、細(xì)菌污染等，可導(dǎo)致MGT假陰性或假陽(yáng)性，在試驗(yàn)前必須對(duì)標(biāo)本進(jìn)行觀察及離心并做好儀器的日常維護(hù)保養(yǎng)等工作以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性[11-12]。

MPT法可用于血型抗體效價(jià)檢測(cè)、不完全抗體鑒定及交叉配血等，但該方法不適合急診標(biāo)本的使用，使用MPT不需特殊儀器設(shè)備，且其檢測(cè)成本比MGT低廉，因此在血型血清學(xué)檢測(cè)中也得到普及與推廣。但該方法操作歩驟較多，實(shí)驗(yàn)時(shí)間比MGT及玻片法長(zhǎng)，操作過(guò)程難于標(biāo)準(zhǔn)化，易受手工操作因素影響，冷凝集、藥物、肝素、異常蛋白等也可干擾其定型結(jié)果[13-14]。因此在應(yīng)用MPT法檢測(cè)時(shí)，要嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，對(duì)可疑結(jié)果，需借助顯微鏡進(jìn)行觀察判斷。

傳統(tǒng)玻片法與MPT、MGT相比其操作更簡(jiǎn)單快捷，但其極易受標(biāo)本因素的影響，血清中蛋白異常增高、冷凝集素、過(guò)量纖維蛋白、血型抗原明顯減弱、受污、抗原抗體比例不適當(dāng)?shù)冉钥捎绊懫錂z測(cè)結(jié)果，易出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性等情況[15-16]。實(shí)驗(yàn)中使用的標(biāo)準(zhǔn)抗A、B血清，因血清效價(jià)水平不穩(wěn)定等也會(huì)導(dǎo)致鑒定出現(xiàn)誤差。因此在應(yīng)用玻片法檢測(cè)時(shí)，要注意紅細(xì)胞與標(biāo)準(zhǔn)血清的比例。對(duì)可疑結(jié)果復(fù)檢時(shí)用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞2～3次，延長(zhǎng)37℃孵育時(shí)間，可以去除患者血清中的纖維蛋白和冷凝集素對(duì)血型檢測(cè)的影響。在檢測(cè)中要待血清與紅細(xì)胞充分混勻并反應(yīng)后才能觀察結(jié)果，凝集呈小顆粒狀或不能明確判斷的可疑結(jié)果，需用顯微鏡進(jìn)行觀察，以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

綜上所述，MGT、MPT及玻片法三種血型檢測(cè)方法都存在某些不足，雖然MGT的準(zhǔn)確性高于MPT、玻片法，但是其檢測(cè)結(jié)果仍然存在0.17%的復(fù)查率。各檢測(cè)方法在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中均存在可影響檢測(cè)結(jié)果的各種因素，所以在日常工作中，對(duì)血型結(jié)果可疑的標(biāo)本，應(yīng)及時(shí)查找原因，消除影響因素后再加做反定型進(jìn)行復(fù)檢，使用正反定型進(jìn)行綜合分析才能獲得準(zhǔn)確的血型結(jié)果。

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（收稿日期：2018-09-25? 本文編輯：許俊琴）