乳腺癌組織中雌激素受體、孕激素受體、P-糖蛋白、谷胱甘肽-s-轉(zhuǎn)移酶-π及DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ的表達(dá)及臨床意義

顏霞 采麗 唐海旭

[摘要]目的 探討乳腺癌組織中雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、P-糖蛋白（P-gP）、谷胱甘肽-s-轉(zhuǎn)移酶-π（GST-π）及DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ（Topo Ⅱ）的表達(dá)水平。方法 選取淮安市婦幼保健院2010年9月～2014年1月手術(shù)切除后經(jīng)病理診斷為乳腺癌的91例標(biāo)本，采用免疫組化方法檢測ER、PR、P-gP、GST-π、Topo Ⅱ在91例乳腺癌組織中的表達(dá)強度。結(jié)果 ER、PR、GST-π、Tope Ⅱ的表達(dá)強度與組織學(xué)分級顯著相關(guān)，Topo Ⅱ的表達(dá)強度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，P-gP的表達(dá)強度與腫瘤大小差異顯著相關(guān)。ER和PR表達(dá)成正相關(guān)（r=0.637，P=0.000）。結(jié)論 ER、PR、GST-π、P-gP、Topo Ⅱ的檢測對選擇化療方案和評估預(yù)后有重要意義。

[關(guān)鍵詞]乳腺癌;P-糖蛋白;谷胱甘肽-s-轉(zhuǎn)移酶-π;DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ

[中圖分類號] R737.9? ? ? ? ? [文獻標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-4721（2019）3（c）-0070-03

[Abstract] Objective To explore the expression of estrogen receptor （ER）， progesterone recetor （PR）， P-glycoprotein （P-gp）， glutathione-s-transferases π （GST-π） and P-glycoprotein Ⅱ （Topo Ⅱ） in breast cancer. Methods A total of 91 cases of specimens of breast cancer diagnosed by pathology after surgical excision in Huai′an Maternal and Child Health Hospital from September 2010 to January 2014 were selected. The expression of ER， PR， GST-π， P-gP， Topo Ⅱ in 91 patients from breast cancer tissues were detected by immunohistochemistry technique. Results The expression of ER， PR， GST-π， Topo Ⅱ were significantly associated with histological grades， there existed correlation between Topo Ⅱ and lympnode metastasis， P-gP expression was significantly associated with tumor size. The expression of ER was positively correlated with the expression of PR （r=0.637， P=0.000）. Conclusion The detection of the expression of ER， PR， GST-π， P-gP， Topo Ⅱ have important meaning for assessing the prognosis of patients with breast cancer and chemtherapy options.

[Key words] Brest carcinoma; P-glycoprotein; Glutathione-s-transferases-π; Topoisomerase Ⅱ

乳腺癌已成為世界范圍內(nèi)影響女性健康的腫瘤之一。全世界每年將近有120萬新發(fā)乳腺癌病例，且將近50萬乳腺癌患者死亡[1]。乳腺癌的治療雖然取得了重大的進展，但其預(yù)后仍然不理想。一些資料顯示，乳腺癌的發(fā)生與雌激素分泌紊亂、大量接觸放射線、絕經(jīng)遲、未婚、未育、晚育、遺傳因素等相關(guān)，但其病因尚未完全明了。研究顯示，乳腺癌組織中的雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）與激素治療、化療以及乳腺癌患者的預(yù)后存在著密切關(guān)系，目前已成為乳腺癌的常規(guī)檢測手段。P-糖蛋白（P-gP）、谷胱甘肽-s-轉(zhuǎn)移酶-π（GST-π）及DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ（Topo Ⅱ）等多重耐藥基因與患者的化療以及預(yù)后也密切相關(guān)。本研究采用免疫組化方法檢測乳腺癌組織中的ER、PR、P-gP、GST-π及Topo Ⅱ的表達(dá)并探討其相互間關(guān)系，為乳腺癌患者術(shù)后化療提供方案。

1資料與方法

1.1一般資料

收集淮安市婦幼保健院2010年9月～2014年1月手術(shù)切除后經(jīng)病理診斷為乳腺癌的91例標(biāo)本，其中導(dǎo)管內(nèi)癌15例，浸潤性導(dǎo)管癌68例，其他類型8例;患者年齡為28～75歲，平均（41.2±10.1）歲;年齡>50歲39例，年齡≤50歲52例;腫瘤直徑≤2 cm 52例，2.1～5.0 cm 33例，>5.0 cm 6例;組織學(xué)1級9例，組織學(xué)2級46例，組織學(xué)3級36例。納入標(biāo)準(zhǔn)：有完整的臨床病理資料，所有病例術(shù)前未做過放、化療等其他治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：病理資料不完整。本研究經(jīng)淮安市婦幼保健院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均知情同意。

1.2方法

1.2.1免疫組化? 常規(guī)石蠟切片，恒溫箱烘烤，脫蠟水化，水化按說明書進行操作。ER、PR、GST-π、P-gP、Topo Ⅱ抗體均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.2.2判定標(biāo)準(zhǔn)? ER、PR、Topo Ⅱ陽性物質(zhì)位于細(xì)胞核;GST-π陽性細(xì)胞為細(xì)胞漿染色;P-gP陽性物質(zhì)位于胞膜及胞漿中。根據(jù)陽性細(xì)胞在隨機選取的500個腫瘤細(xì)胞中所占的比例進行判定，其中<10%為（-），≥10%且<25%為（+），≥25%而<50%為（++），≥50%為（+++）。GST-π、P-gP、TopoⅡ（++）以上[包括（++）級]作為陽性標(biāo)準(zhǔn)，ER、PR（+）以上[包括（+）]為陽性標(biāo)準(zhǔn)。

1.3組織學(xué)分級

按照《乳腺腫瘤WHO組織學(xué)分類、分級標(biāo)準(zhǔn)》（2012年版）對全部切片進行組織學(xué)分級[2]，主要按腺管形成、核的多形性、核分裂數(shù)三項指標(biāo)進行評分。腺管形成：>75%為1分;10%～75%為2分;<10%為3分。核的多形性：核小、規(guī)則、形態(tài)一致為1分;核的形狀、大小有中等度的變化為2分;核的形狀、大小有明顯變化為3分。核分裂數(shù)：計數(shù)20個高倍視野（×400），然后算出每10個高倍視野的核分裂像數(shù)。0～5個/10 HPF為1分;6～10個/10 HPF為2分;>11個/10 HPF為3分。以上3項相加，總分3～5分為1級，低度惡性;6～7分為2級，中度惡性;8～9分為3級，高度惡性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗;計數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗，采用Spearman進行相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 ER、PR、GST-π、P-gP、TopoⅡ與乳腺癌病理指標(biāo)的關(guān)系

ER、PR、GST-π、Topo Ⅱ的表達(dá)強度與組織學(xué)分級顯著相關(guān)（P<0.05）;Topo Ⅱ的表達(dá)強度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;P-gP的表達(dá)強度與腫瘤大小顯著相關(guān)（P<0.05）（表1）。

2.2 ER、PR、GST-π、P-gP、Topo Ⅱ的相互關(guān)系

Spearman相關(guān)性分析顯示，ER和PR表達(dá)成正相關(guān)（r=0.637，P=0.000）（表2）。

3討論

乳腺癌是發(fā)生于乳腺導(dǎo)管和腺泡上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，發(fā)病率呈上升趨勢，且有年輕化趨勢。研究顯示，乳腺癌的發(fā)生發(fā)展、臨床治療以及預(yù)后與ER、PR、GST-π、P-gP、Topo Ⅱ等多種生物標(biāo)志物密切相關(guān)。

ER和PR能有效調(diào)節(jié)乳腺細(xì)胞的分化，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生癌變時，ER和PR會發(fā)生部分或完全的缺失[3]。ER和（或）PR的缺失或保留對乳腺癌治療方案的選擇有指導(dǎo)意義[4-5]，ER和PR已成為臨床上檢測乳腺癌以及制訂化療方案的常規(guī)檢測手段。本研究結(jié)果顯示，ER和PR的表達(dá)強度與腫瘤的大小和年齡以及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移均無顯著相關(guān)，而與組織學(xué)分級顯著有關(guān)，提示乳腺癌細(xì)胞的分化越差，對激素的依賴性越低，可幫助選擇治療方案。進一步Spearman相關(guān)分析顯示，ER和PR成正相關(guān)，與杜璟等[6-7]的報道一致。

GST-π主要與烷化劑和蒽環(huán)類藥物的耐藥有關(guān)。本實驗中，GST-π蛋白的表達(dá)強度與組織學(xué)分級顯著相關(guān)，而與年齡、腫瘤大小以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異無顯著性。GST-π與ER、PR的表達(dá)無相關(guān)性，這與李占文等[8]報道的文獻一致，但也有文獻報道與此不一致[9-10]，尚待進一步探討。

Topo Ⅱ已經(jīng)成為很多化療藥物的靶點，細(xì)胞Topo Ⅱ水平影響Topo Ⅱ抑制劑的抗腫瘤活性。本研究結(jié)果顯示Topo Ⅱ的表達(dá)強度與組織學(xué)分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異有顯著性，提示在腫瘤的耐藥和轉(zhuǎn)移中Topo Ⅱ發(fā)揮了重要作用。

P-gP能排除細(xì)胞內(nèi)高脂溶性和疏水性化療藥物，使細(xì)胞內(nèi)藥物濃度始終維持于低水平，細(xì)胞由此獲得耐藥性[11]。P-gP表達(dá)水平與耐藥程度成正相關(guān)[12-13]。本研究結(jié)果顯示，P-gP的表達(dá)與GST、Topo Ⅱ無相關(guān)性，與鄧再興等[14]報道的文獻一致。但也有文獻與本研究結(jié)果不一致[15]。

綜上所述，ER、PR、GST-π、P-gP、Topo Ⅱ與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、臨床治療以及預(yù)后密切相關(guān)。聯(lián)合檢測乳腺癌組織中ER、PR、GST-π、P-gP、Topo Ⅱ的表達(dá)強度，并結(jié)合患者的臨床資料，有助于制訂乳腺癌的治療方案和判斷預(yù)后。

[參考文獻]

[1]樊鑫鑫，呂慧芳，陳貝貝，等.乳腺癌術(shù)后輔助化療前后HER-2表達(dá)改變1例[J].河南醫(yī)學(xué)研究，2017，26（3）：446-447.

[2]Lakhani SR，Ellis IO，Schnitt SJ，et al.WHO classification of tumours of the breastst[M].Lyon，F(xiàn)rance：IARC Press，2012.

[3]王梅，顧軍，沈曉瑩，等.中國上海地區(qū)乳腺癌的臨床病理特征分析[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2012，17（5）：437-441.

[4]張濤.ER、PR、Cerb-B2、P53蛋白、LRP、GST-π、TopoⅡ在乳腺粘液癌中的表達(dá)[D].遵義：遵義醫(yī)學(xué)院，2009：1-41.

[5]Zhang Z，Wang J，Skinner KA，et al.Pathological features and clinical outcomes of breast cancer according to levels of oestrogen receptor expression[J].Histopathology，2014，65（4）：508-516.

[6]杜璟，張曉麗，蔣麗娜.雌、孕激素受體和表皮生長因子受體在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].中國老年學(xué)雜志，2014，34（19）：5405-5407.

[7]李維權(quán)，宋茂民.HER-2、P53、Ki-67、Nm23、ER、PR蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2011，18（1）：18-22.

[8]李占文，楊華鋒，胡云鏘，等.P-gp、GST-π、Topo Ⅱ在乳腺癌中的表達(dá)及其意義[J].浙江醫(yī)學(xué)，2007，29（9）：919-921.

[9]陳萍，劉新蘭，崔潔.GST-π、Topo Ⅱ、ER、PR在乳腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2008，30（1）：13-15.

[10]徐光輝，葉勝龍，鄭義同，等.人乳腺癌中3種耐藥基因產(chǎn)物的表達(dá)及其與預(yù)后的相關(guān)性[J].復(fù)旦學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2005，32（1）：33-35.

[11]張成晨.葉酸靶向和藥物共載的聚合物納米膠束逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性及其熒光成像研究[D].成都：電子科技大學(xué)，2017：1-71.

[12]桂賢，劉會敏.腫瘤多藥耐藥發(fā)生機制的研究進展[J].上海醫(yī)學(xué)，2005，28（2）：16l-164.

[13]Pusztai L，Wagner P，Ibrallim N，et al.Phase Ⅱ study of Tariquidar，a selective P-glycoprotein inhibitor，in patients with chemotherapy-re-sistant，advanced breast carcinoma[J].Cancer，2005，104（4）：682-691.

[14]鄧再興，謝貝，俞文菊.乳腺癌P-gp、GST-π及TopoⅡ的表達(dá)及意義[J].腫瘤研究與臨床，2005，17（1）：13-15.

[15]孫麗梅，王魯建，宋敏，等.乳腺癌中耐藥蛋白P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ的表達(dá)[J].中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2006，15（2）：169-172.

（收稿日期：2018-11-12? 本文編輯：祁海文）