不同碳源對(duì)Delftia tsuruhatensis HT01脫氮性能的影響

金翠萍,向 斯,郭 溪,程 凱*

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不同碳源對(duì)HT01脫氮性能的影響

金翠萍1,向 斯2,郭 溪2,程 凱1*

(1.湖北工業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境工程學(xué)院,河湖生態(tài)修復(fù)及藻類(lèi)利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖北 武漢 430068；2.武漢凱諾金環(huán)境生物科技有限公司,湖北 武漢 430068)

以一株異養(yǎng)氨氧化菌HT01為研究對(duì)象,比較了以十二烷基硫酸鈉(SDS)、甘蔗糖蜜、丁二酸鈉、乙酸鈉、蔗糖、葡萄糖、果糖或檸檬酸鈉等為唯一碳源時(shí)的生長(zhǎng)情況及對(duì)TOC、NH4+-N、TN的去除率,并通過(guò)兩輪中試測(cè)試了該菌對(duì)皮革污水的處理效果.結(jié)果表明:HT01在異養(yǎng)條件下能夠生成NO2--N,并可以在利用SDS(去除率為34%)的同時(shí)去除NH4+-N和TN(去除率分別為74%和14%);丁二酸鈉和乙酸鈉分別有利于實(shí)現(xiàn)最快的生長(zhǎng)速度和最高的TOC去除率(71%),而果糖則有利于實(shí)現(xiàn)最高的NH4+-N和TN去除率(分別為98%和29%). HT01能夠在皮革污水中生長(zhǎng),第2輪中試對(duì)COD,NH4+-N和TN的去除率分別達(dá)到38%,49%和22%.

HT01；十二烷基硫酸鈉；異養(yǎng)氨氧化；皮革污水

傳統(tǒng)生物脫氮技術(shù)首先需要在好氧條件下經(jīng)自養(yǎng)硝化菌將NH4+-N氧化為NO2--N或NO3--N,再于厭缺氧條件下經(jīng)異養(yǎng)反硝化菌還原生成含氮?dú)怏w[1].而異養(yǎng)氨氧化-好氧反硝化菌則突破了上述理論限制,該類(lèi)微生物可以在異養(yǎng)好氧條件下同時(shí)實(shí)現(xiàn)氨氧化和反硝化,并同步去除有機(jī)物[2-5],因此能夠極大簡(jiǎn)化微生物脫氮工藝,具有重要的應(yīng)用價(jià)值.考慮到異養(yǎng)氨化-好氧反硝化菌的異養(yǎng)生長(zhǎng)特性,碳源種類(lèi)對(duì)這類(lèi)微生物的脫氮效果有著顯著影響[6-12].

以十二烷基硫酸鈉(SDS)為代表的陰離子表面活性劑,是工業(yè)及生活洗滌劑的核心成分,由于其具有高起泡性及低氧化電位,會(huì)通過(guò)影響污水處理過(guò)程中微生物的活性而降低污水處理效率[13-15],甚至?xí)档褪芗{水體的溶解氧(DO)量乃至毒害水生生物[13-15].微生物降解SDS具有特異性高、成本低和副作用少的優(yōu)點(diǎn),國(guó)外雖已報(bào)道了多株以假單胞菌為主的SDS降解菌[16-19],但目前國(guó)內(nèi)對(duì)于SDS降解菌的報(bào)道還非常罕見(jiàn)[20-21],能夠同步去除SDS、NH4+-N與總氮(TN)的菌種更是尚未見(jiàn)諸報(bào)道.

戴爾福特菌(sp.)廣泛分布于自然界,在地表水、土壤、污水中均有分布,并具有降解多種環(huán)境污染物的能力,有關(guān)其去除TN能力的研究較多[22-29],也有零星報(bào)道指出部分該屬菌株能夠異養(yǎng)氨氧化[30-31],而對(duì)這類(lèi)菌降解(利用)SDS的能力知之甚少,對(duì)不同碳源影響戴爾福特菌異養(yǎng)氨氧化-好氧反硝化能力的研究也較少.為此,本文探索了一株戴爾福特菌對(duì)SDS的去除能力,還研究了不同碳源對(duì)該菌株脫氮能力的影響并進(jìn)行了皮革污水處理的中試,為應(yīng)用戴爾福特菌進(jìn)行污水處理提供參考.

1 材料與方法

1.1 培養(yǎng)基

基礎(chǔ)培養(yǎng)基:MgSO4×7H2O 0.05g,K2HPO41g, NaCl 2g,FeSO4×7H2O 0.4g,NaHCO31.5g,CaCl2×2H2O 0.5g;微量元素溶液1mL;加純水至1L[32].微量元素溶液:CuSO4×/5H2O 0.075g, ZnSO4×7H2O 0.3g, CoCl2×6H2O 0.375g,MnCl2×2H2O 0.3g,EDTA 0.5g, NaMoO4×2H2O 0.22g, H3BO40.014g;加純水至1L.SDS碳源培養(yǎng)基:在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加0.4g/L NH4Cl作為唯一氮源,再添加2g/L SDS作為唯一碳源.常規(guī)碳源培養(yǎng)基:在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加0.4g/L NH4Cl作為唯一氮源,再分別添加2g/L蔗糖、葡萄糖、果糖、檸檬酸鈉、丁二酸鈉、甘蔗糖蜜或乙酸鈉作為唯一碳源.

1.2 接種菌液的制備

HT01[33]分離于垃圾滲濾液污水處理系統(tǒng).為制備接種液,先將該菌種接種于添加了0.4g/L NH4Cl和2g/L乙酸鈉的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,于27℃,190r/min振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期,再將菌懸液于6000r/min離心10min,棄上清液,用基礎(chǔ)培養(yǎng)基離心洗滌3次,并用基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸菌體,于27℃, 190r/min振蕩饑餓處理1d后,作為接種菌液.

1.3 不同碳源對(duì)生長(zhǎng)及脫氮性能的影響

按5%的接種比例,將接種菌液分別接種至120mL不同碳源的培養(yǎng)基中,以此作為實(shí)驗(yàn)組,相應(yīng)的不接種菌液的培養(yǎng)基作為對(duì)照組.實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組均設(shè)置3個(gè)平行,并置于27℃,190r/min振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng).

每隔8h取樣,測(cè)量菌懸液的吸光值OD600(以指示其生長(zhǎng)情況)、TN和TOC.另將菌懸液6000r/min離心10min,取上清液用0.22μm針頭過(guò)濾器過(guò)濾,測(cè)定透過(guò)液中NH4+-N、NO2--N及NO3--N含量.

NH4+-N含量采用水楊酸法[34], NO2--N和NO3--N的測(cè)量分別采用N-(1-萘基)-乙二胺光度法和硫酸肼還原法[34]. TN和TOC含量采用德國(guó)Elementar vario TOC/TN測(cè)定儀完成.

1.4 菌株SDS降解轉(zhuǎn)錄激活酶基因系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)

根據(jù)HT01的全基因組測(cè)序結(jié)果,發(fā)現(xiàn)該菌具有SDS降解轉(zhuǎn)錄激活酶基因[35],將測(cè)序結(jié)果在NCBI中進(jìn)行Blastn序列比對(duì)[https:// blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi],并采用Neighbor- Joining法(Mega 6)構(gòu)建了該基因的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù).

1.5 菌株處理皮革污水中試

采用的皮革污水由于鹽度較高(約20000mg/L)而不適于自養(yǎng)氨氧化菌的生長(zhǎng),實(shí)驗(yàn)期間污水的COD與NH4+-N含量的波動(dòng)范圍分別為4350~ 5355, 687~768mg/L.實(shí)驗(yàn)分2輪進(jìn)行,第1輪實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)組為向1t污水中接種3.5L以乙酸鈉為唯一碳源的對(duì)數(shù)期HT01菌液,同時(shí)向污水中加入1.4kg乙酸鈉,并在通氣培養(yǎng)至第3,4, 5,6d時(shí)各補(bǔ)加1.4kg乙酸鈉,繼續(xù)培養(yǎng)至第7d.對(duì)照組為未加入菌液(但按照與實(shí)驗(yàn)組相同的劑量補(bǔ)加了乙酸鈉),空白組則既不加菌液,也不加乙酸鈉.試驗(yàn)期間的水溫為21~23℃,DO為3.22~5.59mg/L,pH值為7.8~8.0.

為模擬污水序批處理的效果,又開(kāi)展了第2輪試驗(yàn):取第2輪培養(yǎng)至第7d的實(shí)驗(yàn)組污水0.5t,加入0.5t未經(jīng)處理的污水,同時(shí)加入1.4kg乙酸鈉,并在培養(yǎng)至第2d時(shí)補(bǔ)加乙酸鈉1.4kg,繼續(xù)培養(yǎng)至第3d.對(duì)照組與空白組的設(shè)置及試驗(yàn)過(guò)程中的水溫、DO及pH值的變化均與第1輪試驗(yàn)相同.

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

采用Origin7.5作圖,圖中的誤差線(xiàn)均用SD表示.統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS17.0,顯著水平以< 0.05計(jì).

2 結(jié)果分析

2.1 以SDS為唯一碳源時(shí)的生長(zhǎng)與脫氮性能

圖1 SDS為碳源的培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線(xiàn)

HT01能夠在以SDS為唯一碳源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng),其對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期從24h開(kāi)始,至84h達(dá)到穩(wěn)定期時(shí)(圖1),其最大OD600接近0.3,TOC去除率達(dá)到33.94%,說(shuō)明細(xì)菌具有利用SDS生長(zhǎng)并去除SDS的能力.與此同時(shí),NH4+-N和TN的去除率分別達(dá)到了73.73%和13.95%,說(shuō)明該菌能夠同時(shí)利用SDS并高效脫氮和去除TN.

HT01菌株的SDS降解轉(zhuǎn)錄激活酶基因的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)如圖2所示.可見(jiàn)HT01菌株的SDS降解轉(zhuǎn)錄激活酶基因與其它的同類(lèi)基因的同源性較高,而與其它菌種的同類(lèi)基因的差異較大.

圖2 HT01菌株SDS降解轉(zhuǎn)錄激活酶基因的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)

2.2 菌株在常規(guī)碳源中的生長(zhǎng)及碳源利用情況

HT01在7種常規(guī)碳源中的生長(zhǎng)量(圖3)均明顯高于以SDS為唯一碳源時(shí)生長(zhǎng)量,但該菌株在這7種常規(guī)碳源中的生長(zhǎng)曲線(xiàn)仍明顯不同:以丁二酸鈉為唯一碳源時(shí),接種8h后即表現(xiàn)出了明顯生長(zhǎng),16h時(shí)就達(dá)到穩(wěn)定期,OD600最大為0.81;而以乙酸鈉或檸檬酸鈉為唯一碳源時(shí),8h起進(jìn)入對(duì)數(shù)期,至24h進(jìn)入穩(wěn)定期,OD600最大值分別為0.89, 0.75;當(dāng)以蔗糖、果糖和甘蔗糖蜜為唯一碳源時(shí),雖然晚至24h時(shí)才進(jìn)入對(duì)數(shù)期,但卻具有最大的生物量,其OD600最大分別能達(dá)到1.21,1.08和1.13;而當(dāng)以葡萄糖為唯一碳源時(shí),延遲期長(zhǎng)至48h,最大生物量時(shí)的OD600也達(dá)到了0.95.

HT01在利用7種常規(guī)碳源生長(zhǎng)的過(guò)程中,培養(yǎng)基中的TOC濃度也明顯下降(圖4),至穩(wěn)定期時(shí),以蔗糖、葡萄糖、果糖、檸檬酸鈉、丁二酸鈉、甘蔗糖蜜或乙酸鈉為唯一碳源時(shí)的TOC去除率分別為54.87%(64h),59.77%(80h),62.49%(64h), 47.29% (32h),26.49%(24h),38.34%(48h),70.92%(32h).特別是,以乙酸鈉為唯一碳源時(shí)的TOC去除率顯著高于其它碳源(<0.05),說(shuō)明碳源種類(lèi)明顯影響了TOC去除率.此外,以蔗糖、果糖或甘蔗糖蜜為唯一碳源時(shí)的TOC去除率也較高,此現(xiàn)象與這3種碳源條件下該菌的生物量(以O(shè)D600計(jì))較大的結(jié)果是吻合的.

圖3 不同常規(guī)碳源中的生長(zhǎng)曲線(xiàn)

圖4 不同常規(guī)碳源條件下的TOC去除率

此外,為了驗(yàn)證該菌的異養(yǎng)氨氧化性能,選取以乙酸鈉為唯一碳源時(shí)的組別,測(cè)量了24h時(shí)(生物量峰值)的NO3--N與NO2--N含量.結(jié)果發(fā)現(xiàn), NO3--N含量無(wú)法檢出,而NO2--N含量則達(dá)到(64±33)μg/L,考慮到培養(yǎng)基中的本底NO2--N含量低于3μg/L(N-(1-萘基)-乙二胺光度法檢測(cè)下限),說(shuō)明HT01能夠異養(yǎng)氨氧化生成NO2--N.

2.3 菌株在常規(guī)碳源中的脫氮性能

隨著細(xì)菌的生長(zhǎng),HT01也表現(xiàn)出明顯的脫氨和脫總氮性能.由圖5可見(jiàn),當(dāng)達(dá)到穩(wěn)定期時(shí):以果糖為唯一碳源時(shí)的NH4+-N去除率最高,達(dá)到了97.79%,相應(yīng)的TN去除率也達(dá)到了28.58%;以葡萄糖為碳源時(shí), NH4+-N去除率也高達(dá)89.62%,但TN去除率僅為10.19%;以蔗糖為碳源時(shí), NH4+- N和TN的去除率分別為75.25%和22.19%;以乙酸鈉為唯一碳源時(shí)的NH4+-N去除率雖然高達(dá)70%,但其TN去除率卻僅為約10%;以檸檬酸鈉、丁二酸鈉或甘蔗糖蜜為唯一碳源時(shí),NH4+-N去除率約為60%,且以丁二酸鈉為碳源時(shí)的TN去除率較高達(dá)到28.54%,而在以檸檬酸鈉為碳源時(shí)則完全不能去除TN.進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)分析表明,NH4+-N的去除率與測(cè)量時(shí)的培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)顯著正相關(guān)(<0.05,2=0.67),而與對(duì)數(shù)期時(shí)長(zhǎng)無(wú)顯著相關(guān)性(>0.05),說(shuō)明培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)是影響NH4+-N去除率的主要因素.而TN去除率與培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)及對(duì)數(shù)期時(shí)長(zhǎng)等均無(wú)顯著相關(guān)(>0.05),說(shuō)明該菌的反硝化脫氮性能與生長(zhǎng)的關(guān)系較弱.

圖5 不同常規(guī)碳源條件下的NH4+-N和TN去除率

2.4 皮革污水處理結(jié)果

由圖6可見(jiàn),接種HT01并補(bǔ)充碳源(乙酸鈉)后,污水中NH4+-N和COD的去除率均顯著高于對(duì)照組與空白組(<0.05),至第1輪試驗(yàn)結(jié)束時(shí)(第7d),試驗(yàn)組的NH4+-N和COD去除率分別達(dá)到47%和79%,而對(duì)照組的去除率則分別為28%和49%,空白組的去除率更是僅為15%和36%,說(shuō)明HT01明顯促進(jìn)了皮革污水中NH4+-N與COD的同步去除.

圖6 第1輪中試的NH4+-N和COD去除率

與第1輪試驗(yàn)的結(jié)果類(lèi)似,第2輪試驗(yàn)中(圖7),試驗(yàn)組的NH4+-N和COD的去除率也顯著高于對(duì)照組與空白組(<0.05).

圖7 第2輪中試的NH4+-N和COD去除率

對(duì)比2輪污水處理中試,第2輪中試至第3d時(shí),試驗(yàn)組的NH4+-N去除率即達(dá)到了49%,甚至高于第1輪中試時(shí)第7d時(shí)的NH4+-N去除率(47%).由于第1輪中試時(shí)HT01的接種量?jī)H為0.35%,而第2輪中試的換水率為50%,說(shuō)明HT01能夠在第1輪的試驗(yàn)中持續(xù)生長(zhǎng),并積累了更多的生物量,所以在第2輪試驗(yàn)中才表現(xiàn)出了更快的脫氮速度.此外,2輪中試終點(diǎn)時(shí),試驗(yàn)組的TN去除率(平均為22%)也明顯高于對(duì)照組和空白組(平均為11%),也說(shuō)明該菌在本次中試中能夠去除皮革污水中的部分TN.

3 討論

目前國(guó)內(nèi)關(guān)于SDS降解菌的分離報(bào)道較少[20-21],國(guó)外雖分離得到了較多的SDS降解菌[36],但這些菌多屬于sp.和sp.,僅Yilmaz等[14]從地表水體中篩選出一株具有降解SDS能力的,但目前尚未有降解去除SDS的報(bào)道.SDS降解轉(zhuǎn)錄激活酶基因的進(jìn)化分析表明,盡管Genbank中的部分菌的某些基因與本菌的SDS降解轉(zhuǎn)錄激活酶基因同源性極高,但這些基因卻并未被注釋為SDS降解轉(zhuǎn)錄激活酶基因,這些菌的SDS降解活性也均未見(jiàn)諸報(bào)道,說(shuō)明菌的SDS降解活性很可能被低估了.考慮到多來(lái)源于污水[24-28],具有較強(qiáng)的耐污性能,因此其在污水處理中的應(yīng)用潛力也更大.此外,Paulo等[13]分離出的2株sp.能夠以NO3--N為唯一氮源,實(shí)現(xiàn)同步去除SDS和反硝化,而本研究則首次發(fā)現(xiàn)HT01能夠以NH4+-N為唯一氮源,實(shí)現(xiàn)同步去除SDS、NH4+-N和TN,為污水中SDS的降解及脫氮提供了新的思路.

有關(guān)異養(yǎng)氨氧化性能的研究報(bào)道較少,不同碳源對(duì)去除NH4+-N和TN影響的研究屈指可數(shù),僅劉晶晶等[22]比較了檸檬酸三鈉、乙酸鈉和琥珀酸鈉對(duì)好氧反硝化性能的影響,發(fā)現(xiàn)檸檬酸三鈉為最優(yōu)的反硝化碳源.此外,王歡等[25,27]研究發(fā)現(xiàn)sp. WXZ-1以檸檬酸三鈉為碳源時(shí)的NH4+-N去除率為55%,略低于HT01在檸檬酸鈉中的NH4+-N去除率(59.43%).匡燕[31]等定性描述了對(duì)葡萄糖、碳源、蔗糖等碳源有利用能力,但沒(méi)有細(xì)致研究菌株在不同碳源中的生長(zhǎng)特點(diǎn).Li等[28]僅以丁二酸鈉為碳源對(duì)HS-043開(kāi)展了好氧反硝化性能研究.崔文娟等[37]僅以酵母粉作為sp. NS2和NS5硝化過(guò)程中的碳源,最大生物量OD600均在0.45左右,明顯低于本研究中HT01在各種常規(guī)碳源中的生物量.此外,類(lèi)似于[31]和WXZ-15[25]的異養(yǎng)氨氧化過(guò)程,HT01也能在以乙酸鈉為碳源時(shí)積累少量的NO2--N,既證明了HT01具有異養(yǎng)氨氧化能力,也說(shuō)明該菌異養(yǎng)氨氧化的產(chǎn)物可以被好氧反硝化所迅速消耗[38].

本研究發(fā)現(xiàn),HT01能利用多種形式的碳源,但不同碳源對(duì)該菌的生長(zhǎng)及脫氮性能影響較大,綜合考慮到實(shí)際污水處理的成本與耗時(shí),如僅以去除NH4+-N為目標(biāo),應(yīng)選擇乙酸鈉作為碳源,但如以去除TN為目標(biāo),則應(yīng)以蔗糖(或果糖)作為碳源.因此在本次處理皮革污水的中試研究中,以NH4+-N為主要目標(biāo)污染物,補(bǔ)加乙酸鈉作為碳源,不但能夠有效去除NH4+-N,而且(通過(guò)第2輪序批式中試)證明該菌能夠適應(yīng)高鹽度的皮革污水并能夠積累生物量,說(shuō)明在實(shí)際應(yīng)用該菌種處理皮革污水時(shí),初期只需少量接種,即可在皮革污水中自行增殖,再通過(guò)污泥回流等方式即可使生物量不斷積累,從而達(dá)到增效的目的.此外,HT01分離于垃圾滲瀝液,考慮到垃圾滲瀝液具有高鹽、高氨、高COD的特征[39-41]與皮革污水[42-44]高度相似,很可能是該菌能夠適應(yīng)并有效處理皮革污水的主要原因.

4 結(jié)論

4.1HT01能夠通過(guò)異養(yǎng)氨氧化積累少量的NO2--N,還能夠同步去除SDS、NH4+-N及TN.

4.2 碳源種類(lèi)明顯影響HT01的生長(zhǎng)與脫氮能力,以丁二酸鈉為碳源時(shí)的生長(zhǎng)速度最快,以乙酸鈉為碳源時(shí)的TOC去除率最高,以果糖為碳源時(shí)的NH4+-N和TN去除率最高.

4.3HT01能夠適應(yīng)高鹽皮革污水,并有效去除其COD、NH4+-N及TN.

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The influence of different carbon sources on the nitrogen removal characters of aHT01.

JIN Cui-ping1, XIANG Si2, GUO Xi2, CHENG Kai1*

(1.Hubei Key Laboratory of Ecological Restoration for River-Lakes and Algal Utilization, College of Resources and Environmental Engineering, Hubei University of Technology, Wuhan 430068, China；2.Wu Han Cyano-King Enviromental Technology, Wuhan 430068, China)., 2019,39(4)：1478~1484

The growth and the removal ef?ciency of TOC, NH4+-N and TN of a heterotrophic ammonia oxidizerHT01 were studied when SDS, cane molasses, sodium succinate, sodium acetate, sucrose, glucose, fructose or sodium citrate was used as sole carbon source. Furthermore, two rounds of the pilot-scale test were performed using leather sewage. The results indicated that NO2--N was produced in heterotrophic condition by HT01 and NH4+-N, TN and SDS were removed simultaneously at the removal ef?ciency of 74%, 14% and 34%, respectively. Moreover, the highest growth rate and the highest removal ef?ciency of TOC (71%) were observed when sodium succinate and sodium was used as sole carbon source, respectively. While the highest removal ef?ciency of NH4+-N (98%) and TN (29%) were observed when fructose was used as sole carbon source. The growth of HT01 was observed in leather sewage, and the removal efficiency of COD, NH4+-N and TN was 38%, 49% and 22%, respectively, in the second round of pilot-scale test.

HT01；sodium dodecyl sulfate(SDS)；heterotrophic ammonia oxidation；leather sewage

X172

A

1000-6923(2019)04-1478-07

2018-09-13

國(guó)家科技重大專(zhuān)項(xiàng)(2017ZX07602002)

*責(zé)任作者, 教授, chengkaicn@163.com

金翠萍(1992-),女,山東濱州人,湖北工業(yè)大學(xué)碩士研究生,主要從事污水微生物法脫氮研究.發(fā)表論文1篇.