槐杞黃顆粒對傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒免疫失衡的干預(yù)作用

黃閃 李慧霞 董慧 劉江華 楊莉 孫紅啟

傳染性單核細(xì)胞增多癥（infectious mononucleosis，IM）是一種急性單核-巨噬細(xì)胞增生性疾病，一般由EB 病毒（Epstein-Barr Virus，EBV）感染致淋巴細(xì)胞急性或亞急性增生引起，是兒童常見的感染性疾病之一，臨床以發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大、外周血淋巴細(xì)胞增高、出現(xiàn)異常淋巴細(xì)胞為特征[1]。流行病學(xué)顯示，近年IM的發(fā)病率有明顯升高趨勢。IM的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，可能與EB病毒感染機(jī)體后致免疫系統(tǒng)異常相關(guān)，且免疫功能低下的兒童患IM后病情進(jìn)展快，死亡率高[2]。中成藥槐杞黃顆粒具有益氣養(yǎng)陰的效果，是重要的免疫調(diào)節(jié)劑[3]。本研究觀察槐杞黃顆粒對傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒免疫功能的干預(yù)作用，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料選擇2015年1月～2017年1月我科診斷的104例初發(fā)傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒入選本研究?；辫近S治療組58例，其中男30例，女28例，年齡2.5～14.3歲；常規(guī)治療組46例，男25例，女21例，年齡2.5～14.3歲。兩組患兒年齡、性別、身高和免疫功能等因素差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：①臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、咽峽炎和淺表淋巴結(jié)腫大，并合并咽痛、皮疹、肝大、脾大和肝功能異常中任何一項(xiàng)；②外周血異常淋巴細(xì)胞≥10%；③血嗜異性凝集試驗(yàn)陽性；④EBV抗體陽性。符合前兩項(xiàng)，并排除化膿性扁桃體炎、巨細(xì)胞感染、病毒性肝炎、HIV感染、白血病和淋巴瘤等，即可作出臨床診斷；如具備后兩項(xiàng)中的任何一項(xiàng)即可明確診斷。

1.3 排除與剔除標(biāo)準(zhǔn)排除標(biāo)準(zhǔn)：1年內(nèi)靜脈注射脾多肽、胎盤多肽或口服匹多莫德口服液/轉(zhuǎn)移因子口服液等免疫調(diào)節(jié)劑的患兒；原發(fā)性免疫缺陷患兒；合并其他系統(tǒng)疾病的患兒，如心肌炎、肺炎、消化道感染、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染等；不能配合治療的患兒。剔除標(biāo)準(zhǔn)：觀察期間服用藥物能影響觀察指標(biāo)的患兒；治療期間合并并發(fā)癥且不能繼續(xù)觀察的患兒；噬血細(xì)胞增多癥；慢性活動性EB病毒感染；自行退出或失訪的患兒。

1.4 治療常規(guī)治療組患兒給予阿昔洛韋抗病毒，10mg·kg-1·次-1，q8h 治療 2 周，輔以清熱、對癥支持治療等常規(guī)治療，合并細(xì)菌感染者予抗感染治療，總療程為2～3周?；辫近S治療組除接受常規(guī)治療外，體溫正常后加用槐杞黃顆粒聯(lián)合治療（商品名：還爾金，啟東蓋天力藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字 B200220074，規(guī)格：10g/袋）。用法：3歲以下5g/次，每日2次；3～12歲者10g/次，每日2次，口服，連服3月。

1.5 觀察指標(biāo)及方法

1.5.1 血清IgA、IgG、IgM水平檢測所有患兒入院時和治療3月后分別采集靜脈血5ml，分離血清，采用免疫投射比濁法進(jìn)行檢測，由我院多學(xué)科試驗(yàn)室按照試劑盒（FASC Calibur，Becton Dickinson 公司，美國）操作說明進(jìn)行檢測。

1.5.2 血CD4+T、CD8+T、CD19+、CD16+CD56+淋巴細(xì)胞百分比及CD4+/CD8+比值及中性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞（NLR）比值檢測 所有患兒入院后和治療后3月采集清晨空腹外周EDTA抗凝靜脈血3ml，由專人嚴(yán)格按照操作說明采用全自動流氏細(xì)胞分析儀（FASC Calibur，Becton Dickinson公司，美國）檢測CD4+T、CD8+T、CD19+、CD16+CD56+淋巴細(xì)胞百分比及CD4+/CD8+比值，同時采用全自動五分類血液分析儀檢測血常規(guī)，計(jì)算中性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比值（NLR）。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用兩樣本t檢驗(yàn)；兩組治療前后比較采用配對樣本t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患兒血清IgA、IgG、IgM水平比較兩組患兒治療前血清IgA、IgG、IgM水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療3月后兩組患兒血清IgA、IgG、IgM水平均較治療前明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）?；辫近S治療組血清IgA、IgG、IgM水平明顯高于常規(guī)治療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組血清免疫球蛋白的變化（±s，mg/L）

表1 兩組血清免疫球蛋白的變化（±s，mg/L）

注：與治療前比較，*P＜0.05；與槐杞黃組比較，#P＜0.05

組別 IgG IgM IgA治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后槐杞黃治療組 10.56±2.37 16.58±3.23* 1.03±0.46 1.56±0.58* 0.98±0.49 1.26±0.35*常規(guī)治療組 11.02±3.12 14.35±2.89*# 1.06±0.38 1.20±0.36*# 1.02±0.53 1.15±0.47*#

2.2 兩組患兒外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較兩組患兒治療前外周血CD4+T、CD8+T、CD19+、CD16+CD56+淋巴細(xì)胞百分比及CD4+/CD8+差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療3月后，兩組患兒外周血CD4+T、CD19+、CD16+CD56+淋巴細(xì)胞百分比及CD4+/CD8+比值較治療前明顯升高（P＜0.05）；CD8+T細(xì)胞百分比較治療前明顯降低（P＜0.05）；槐杞黃治療組外周血CD4+T、CD19+、CD16+CD56+淋巴細(xì)胞百分比及CD4+/CD8+比值明顯高于常規(guī)治療組（P＜0.05）；CD8+T細(xì)胞百分比明顯低于常規(guī)治療組（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組淋巴細(xì)胞亞群的變化（±s）

表2 兩組淋巴細(xì)胞亞群的變化（±s）

注：與治療前比較，*P＜0.05；與槐杞黃治療組比較，#P＜0.05

組別 CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ CD19+ CD16+CD56+治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后槐杞黃治療組 19.56±6.58 32.54±4.36* 58.98±8.61 25.63±8.31* 0.64±0.43 1.32±0.68* 5.17±3.68 15.67±4.25* 8.35±3.87 11.63±4.20*常規(guī)治療組 20.15±7.63 28.10±5.62*#56.78±8.93 30.20±7.65*#0.59±0.67 1.23±0.37*# 6.42±4.23 11.32±5.38*# 8.98±3.04 10.02±2.84*#

2.3 兩組患兒中性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比值（NLR）比較治療前常規(guī)治療組患兒NLR比值為0.29±0.23，槐杞黃治療組患兒NLR比值為0.32±0.17，兩組患兒NLR比值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療后常規(guī)治療組患兒NLR比值為0.58±0.13，槐杞黃治療組患兒NLR比值為0.62±0.20，治療后兩組患兒NLR明顯高于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）?；辫近S治療組NLR稍高于常規(guī)治療組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.12）。

2.4 兩組患兒不良反應(yīng)發(fā)生情況比較槐杞黃治療組3例患兒發(fā)生腹瀉，總發(fā)生率5.17%（3/58），常規(guī)治療組2例發(fā)生腹瀉，總發(fā)生率4.35%（2/46），兩組患兒不良反應(yīng)發(fā)生率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.5648）。

3 討論

傳染性單核細(xì)胞增多癥是機(jī)體感染EB病毒后引起的全身性疾病，是一種非腫瘤性增殖性疾病。EB病毒是人皰疹病毒γ亞科DNA病毒的一種，其感染在全球范圍內(nèi)廣泛存在，約90%成人體內(nèi)EB病毒抗體陽性[5]。EB病毒可侵襲宿主的T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞，導(dǎo)致機(jī)體免疫失衡。槐杞黃顆粒是由槐耳菌質(zhì)為君，枸杞和黃精共為臣組成的一種真菌類免疫調(diào)節(jié)劑，可激活巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和NK細(xì)胞，調(diào)節(jié)Th/Ts，上調(diào)Treg細(xì)胞表達(dá)，刺激IL-2等細(xì)胞因子產(chǎn)生，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用[6]。槐耳菌質(zhì)所含的槐耳多糖具有較高的免疫活性，可促進(jìn)吞噬細(xì)胞功能，增強(qiáng)溶菌酶活性；枸杞養(yǎng)肝、滋腎、潤肺，其所含枸杞多糖可增強(qiáng)非特異性免疫，抑制腫瘤生長及突變；黃精可提高小鼠脾臟指數(shù)和巨噬細(xì)胞的吞噬功能[7]。國內(nèi)多項(xiàng)研究顯示[8，9]，槐杞黃顆粒具有抗炎、抗過敏效果，可減少小兒呼吸道感染的次數(shù)，明顯改善腎臟疾病患兒的免疫狀態(tài)，減少腎臟疾病的復(fù)發(fā)[10]。

B細(xì)胞是EB病毒感染的主要靶細(xì)胞，因其表面表達(dá)EBV特異性受體CD21[11]。EB病毒感染B細(xì)胞后隨著EB病毒的擴(kuò)增，B細(xì)胞表面表達(dá)多種抗原，經(jīng)抗原提呈細(xì)胞提呈后激活CD8+T細(xì)胞，產(chǎn)生細(xì)胞毒效應(yīng)，殺滅感染的B細(xì)胞[12]。B細(xì)胞的主要功能是產(chǎn)生并分泌免疫球蛋白，IM急性期B細(xì)胞被大量殺滅，其分泌的免疫球蛋白亦隨之減少，提示IM急性期機(jī)體體液免疫嚴(yán)重失衡。本研究顯示IM急性期兩組患兒外周血CD19+細(xì)胞百分比明顯降低，血清IgA、IgG、IgM水平明顯降低，治療后IM恢復(fù)期兩組患兒外周血CD19+細(xì)胞百分比升高，血清IgA、IgG、IgM水平較前明顯升高，槐杞黃治療組明顯高于常規(guī)治療組，該結(jié)果說明槐杞黃顆粒具有調(diào)節(jié)體液免疫失衡的作用。

調(diào)節(jié)性 B 細(xì)胞（regulatory B cell，Breg）是近年發(fā)現(xiàn)的一類具有免疫調(diào)節(jié)功能的B細(xì)胞，它可分泌IL-10、TGF-β等抑制性細(xì)胞因子，IM急性期時分泌的抑制性細(xì)胞因子減少，有利于細(xì)胞毒性T細(xì)胞產(chǎn)生選擇性克隆擴(kuò)增，殺滅感染的B細(xì)胞，IM恢復(fù)期Breg細(xì)胞功能恢復(fù)，抑制細(xì)胞毒性T細(xì)胞功能及炎癥因子釋放，避免過度免疫反應(yīng)[13]。T淋巴細(xì)胞包括 CD4+的輔助性 T 細(xì)胞（helper T cell，Th）和CD8+的細(xì)胞毒性 T 細(xì)胞（cytotoxic T cell，Tc）和抑制性 T 細(xì)胞（suppressor T cell，Ts）。國內(nèi)外多項(xiàng)研究顯示[14]，IM急性期CD4+T淋巴細(xì)胞百分比和CD4+/CD8+比值明顯降低，且與EBV-DNA拷貝呈明顯負(fù)相關(guān)，CD8+T細(xì)胞百分比明顯高于正常，與本研究結(jié)果一致。NK細(xì)胞為自然殺傷細(xì)胞，不依賴抗體殺傷靶細(xì)胞，本研究結(jié)果顯示，IM急性期CD16+CD56+細(xì)胞百分比較低，說明IM急性期機(jī)體存在嚴(yán)重的細(xì)胞免疫失衡。兩組患兒治療3月后CD4+T、CD19+、CD16+CD56+細(xì)胞百分比和CD4+/CD8+比值較治療前明顯增高，CD8+T淋巴細(xì)胞百分比較治療前降低，提示患兒免疫功能均有恢復(fù)，槐杞黃治療組優(yōu)于常規(guī)治療組，說明槐杞黃顆?？杉せ罹奘杉?xì)胞、自然殺傷細(xì)胞，促進(jìn)CD4+T細(xì)胞分裂、增殖、分化，調(diào)節(jié)免疫失衡，增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能。

中性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比值（neutrophil-lymphocyte ratio，NLR）是系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)的特異性指標(biāo)之一，可反應(yīng)機(jī)體的免疫狀態(tài)。多項(xiàng)研究顯示，NLR與腫瘤（如肝癌、肺癌、胃癌等）的治療效果、預(yù)后和復(fù)發(fā)密切相關(guān)[15]，NLR升高是胃癌患者總生存期縮短的獨(dú)立預(yù)后因素[16]，F(xiàn)an等[17]發(fā)現(xiàn)外周血NLR增高與慢性肝病急性變相關(guān)，但仍有研究表明，乙型肝炎肝硬化患兒的NLR明顯低于健康兒童[18]。因此NLR是否可反映疾病治療效果及預(yù)后仍存在爭議。本研究發(fā)現(xiàn)，IM急性期NLR明顯降低，治療后恢復(fù)期NLR較前升高，同時槐杞黃治療組明顯高于常規(guī)治療組。同時NLR在IM中的明確作用及與預(yù)后的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，槐杞黃顆?？梢蕴岣邆魅拘詥魏思?xì)胞增多癥患兒血清中IgA、IgG、IgM等免疫球蛋白水平，提高 CD4+T、CD19+、CD16+CD56+細(xì)胞百分比、CD4+/CD8+比值及NLR比值，降低CD8+T淋巴細(xì)胞百分比，調(diào)節(jié)傳染性單核細(xì)胞增多癥急性期免疫失衡，增強(qiáng)患兒抗病能力，提高臨床療效，同時不良反應(yīng)小，安全有效，是臨床治療傳染性單核細(xì)胞增多癥的重要輔助藥物。但本研究樣本數(shù)量較少，需進(jìn)行多中心聯(lián)合研究以驗(yàn)證本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。