Nrf2/ARE信號(hào)通路與多發(fā)性硬化預(yù)后的相關(guān)性研究

柴競(jìng)艷 吳向斌 夏忠斌 鮑兵 陳志穎

[摘要] 目的 探討Nrf2/ARE信號(hào)通路與多發(fā)性硬化預(yù)后的相關(guān)性研究。 方法 將我院2014年6月～2017年6月收治的40例多發(fā)性硬化癥患者作為研究對(duì)象，隨機(jī)分為觀察1組、觀察2組，各20例。選擇同期我院20例健康體檢者作為對(duì)照組。觀察1組給予糖皮質(zhì)激素聯(lián)合常規(guī)營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)治療，觀察2組采用單純營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)治療。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)三組入組Nrf2、HO-1、TNF-α表達(dá)水平，分析ADL及神經(jīng)功能評(píng)分。 結(jié)果 隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月，觀察1組Nrf2、HO-1表達(dá)水平、ADL評(píng)分高于觀察2組，而其TNF-α表達(dá)水平、神經(jīng)功能評(píng)分低于觀察2組（P<0.05），觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1表達(dá)水平、ADL評(píng)分高于治療前，而其TNF-α表達(dá)水平、神經(jīng)功能評(píng)分低于治療前（P<0.05），觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1、TNF-α表達(dá)水平高于對(duì)照組（P<0.05）;隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月，觀察1組、觀察2組ADL評(píng)分低于對(duì)照組，神經(jīng)功能評(píng)分高于對(duì)照組（P<0.05）。 結(jié)論 糖皮質(zhì)激素聯(lián)合常規(guī)營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)改善多發(fā)性硬化癥患者神經(jīng)功能損傷，其可能通過上調(diào)Nrf2、HO-1表達(dá)，下調(diào)TNF-α表達(dá)而發(fā)揮作用。

[關(guān)鍵詞] Nrf2/ARE;信號(hào)通路;多發(fā)性硬化;預(yù)后;相關(guān)性

[中圖分類號(hào)] R744.5? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2019）07-0011-03

[Abstract] Objective To explore the correlation between Nrf2/ARE signaling pathway and prognosis of multiple sclerosis. Methods Forty patients with multiple sclerosis admitted to our hospital from June 2014 to June 2017 were randomly divided into observation group 1 and observation group 2， 20 cases in each group. Twenty healthy subjects in our hospital were selected as the control group. Observation group 1 was treated with glucocorticoid combined with conventional nutritional nerve therapy， and observation group 2 was treated with simple nutrition nerve therapy. Flow cytometry was used to detect the expression levels of Nrf2， HO-1 and TNF-α in the three groups， and the ADL and neurological function scores were analyzed. Results At 6 months and 12 months of follow-up， the expression levels of Nrf2 and HO-1 and ADL scores in observation group 1 were higher than those in observation group 2， while the expression of TNF-α and neurological function scores were lower than those in observation group 2（P<0.05）. The expression levels of Nrf2 and HO-1 in the two groups were higher than those before treatment， while the expression levels of TNF-α and neurological function were lower than those before treatment（P<0.05）. The expression levels of Nrf2， HO-1 and TNF-α in observation group 1 and observation group 2 were higher than those in the control group （P<0.05）. At 6 months and 12 months of follow-up， the ADL scores of observation group 1 and observation group 2 were lower than those of the control group， and the neurological function score was higher than that of the control group（P<0.05）. Conclusion Glucocorticoid combined with conventional neurotrophic therapy can improve neurological impairment in patients with multiple sclerosis. The mechanism may be up-regulation of Nrf2 and HO-1 expression and down-regulation of TNF-α expression.

[Key words] Nrf2/ARE; Signaling pathway; Multiple sclerosis; Prognosis; Correlation

多發(fā)性硬化癥是臨床上較為常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一，其是指累及中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)的炎癥性自身免疫性脫髓鞘疾病[1-3]，臨床上多采用非特異性的免疫治療方法，如糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑等治療措施。相關(guān)病理研究顯示[4]，多發(fā)性硬化癥患者常伴有一定程度的少突膠質(zhì)細(xì)胞及軸突的損傷，而炎癥趨化因子等炎癥介質(zhì)參與疾病的發(fā)展。中樞神經(jīng)系統(tǒng)含有一系列抗氧化酶來調(diào)節(jié)受到氧化損傷的細(xì)胞，轉(zhuǎn)錄因子Nrf2調(diào)控這些保護(hù)細(xì)胞減輕損傷的抗氧化酶的表達(dá)[5]。本研究主要探討Nrf2/ARE信號(hào)通路與多發(fā)性硬化預(yù)后的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將我院2014年6月～2017年6月收治的40例多發(fā)性硬化癥患者作為研究對(duì)象，隨機(jī)分為觀察1組、觀察2組，各20例。選擇同期我院20例健康體檢者作為對(duì)照組。觀察1組，男12例，女8例;年齡42～76歲，平均（52.5±4.6）歲;觀察2組，男11例，女9例;年齡41～77歲，平均（52.6±4.5）歲;對(duì)照組，男10例，女10例;年齡40～75歲，平均（52.7±4.5）歲;患者均簽署研究知情同意書;本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn);三組在性別、年齡等方面比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

觀察1組采用甲基強(qiáng)的松（批準(zhǔn)文號(hào)：H20080284，廠家：Pfizer Manufacturing Belgium NV）500 mg溶于5%葡萄糖注射液500 mL中，靜脈輸液，每日1次，按2014版中國(guó)《多發(fā)性硬化診斷和治療的中國(guó)專家共識(shí)》，500 mg使用3 d，250 mg使用3 d，120 mg使用3 d，改成60 mg持續(xù)口服，后續(xù)緩慢減量。同時(shí)給予神經(jīng)節(jié)苷脂（國(guó)藥準(zhǔn)字H20066833，長(zhǎng)春翔通藥業(yè)有限公司）20 mg+維生素B族及常規(guī)治療靜脈輸液，每日1次，連續(xù)應(yīng)用14 d為1個(gè)療程。觀察2組則單純給予神經(jīng)節(jié)苷脂+維生素B族常規(guī)治療，劑量及療程同觀察1組。

1.3 觀察指標(biāo)

記錄三組入組患者血液中Nrf2、HO-1、TNF-α表達(dá)水平，并分析其日常生活能力水平（ADL）及神經(jīng)功能評(píng)分;采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Nrf2、HO-1、TNF-α表達(dá)水平，采用ADL評(píng)價(jià)其行為生活能力情況，其總評(píng)分為100分，得分越高，生活能力越高[6]，采用EDSS量表評(píng)價(jià)患者神經(jīng)功能缺損情況[7]，每一項(xiàng)分為5～6個(gè)等級(jí)，0～10分，得分越高，神經(jīng)功能缺失越嚴(yán)重。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示;多組間計(jì)量資料比較采用方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組Nrf2、HO-1、TNF-α的表達(dá)水平比較

治療前觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1表達(dá)水平低于對(duì)照組，而其TNF-α表達(dá)水平高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;治療前觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1、TNF-α表達(dá)水平比較，無明顯差異（P>0.05）;隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月，觀察1組Nrf2、HO-1表達(dá)水平高于觀察2組，而其TNF-α表達(dá)水平低于觀察2組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月，觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1表達(dá)水平高于治療前，而其TNF-α表達(dá)水平低于治療前，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月，觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1、TNF-α表達(dá)水平高于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;見表1。

2.2 三組ADL、神經(jīng)功能評(píng)分比較

治療前觀察1組、觀察2組ADL評(píng)分低于對(duì)照組，而其神經(jīng)功能評(píng)分高于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;治療前觀察1組、觀察2組ADL、神經(jīng)功能評(píng)分無明顯差異（P>0.05）;隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月，觀察1組、觀察2組ADL評(píng)分高于治療前，神經(jīng)功能評(píng)分低于治療前，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月，觀察1組ADL評(píng)分高于觀察2組，神經(jīng)功能評(píng)分低于觀察2組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月，觀察1組、觀察2組ADL評(píng)分低于對(duì)照組，神經(jīng)功能評(píng)分高于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;見表2。

3 討論

多發(fā)性硬化癥患者發(fā)病原因較為復(fù)雜，治療后易反復(fù)發(fā)作，相關(guān)研究顯示[8-9]，多發(fā)性硬化癥患者的致病因素多為自身免疫細(xì)胞的功能障礙，以往多采用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑及營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞等治療該疾病。甲基強(qiáng)的松龍可顯著抑制炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)免疫功能，抑制T淋巴細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞，而控制白質(zhì)炎癥脫髓鞘是當(dāng)今MS免疫治療的主要任務(wù)。

本研究主要觀察Nrf2/ARE信號(hào)通路與多發(fā)性硬化預(yù)后的相關(guān)性。其結(jié)果顯示：治療前觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1表達(dá)水平、ADL評(píng)分低于對(duì)照組，而其TNF-α表達(dá)水平、神經(jīng)功能評(píng)分高于對(duì)照組（P<0.05）;隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月，觀察1組Nrf2、HO-1表達(dá)水平、ADL評(píng)分高于觀察2組，而其TNF-α表達(dá)水平、神經(jīng)功能評(píng)分低于觀察2組（P<0.05）;隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月，觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1表達(dá)水平、ADL評(píng)分高于治療前，而其TNF-α表達(dá)水平、神經(jīng)功能評(píng)分低于治療前（P<0.05）;隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月，觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1、TNF-α表達(dá)水平高于對(duì)照組（P<0.05）;隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月，觀察1組、觀察2組ADL評(píng)分低于對(duì)照組，神經(jīng)功能評(píng)分高于對(duì)照組（P<0.05）;因此，糖皮質(zhì)激素聯(lián)合常規(guī)營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)改善多發(fā)性硬化癥患者神經(jīng)功能損傷，其可能通過上調(diào)Nrf2、HO-1表達(dá)，下調(diào)TNF-α表達(dá)而發(fā)揮作用。TNF-α是多發(fā)性硬化損傷的潛在發(fā)病機(jī)制，單核細(xì)胞與腦血管內(nèi)皮細(xì)胞相互作用產(chǎn)生活性氧[10-11]，細(xì)胞骨架重排，血腦屏障破壞，誘導(dǎo)了巨噬細(xì)胞吞噬髓鞘，導(dǎo)致少突膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元與軸突損傷。當(dāng)細(xì)胞存在氧化應(yīng)激時(shí)，Nrf2轉(zhuǎn)位入核，激活抗氧化反應(yīng)原件（ARE）所介導(dǎo)的抗氧化酶表達(dá)。迄今為止，Nrf2-ARE通路介導(dǎo)的解毒酶和抗氧化酶超過200個(gè)，其中包括超氧化物歧化酶1、超氧化物歧化酶2等[12]。Johnson DA等[13]通過Nrf2基因敲除小鼠研究證明：Nrf2的缺失可以使EAE病情惡化，表現(xiàn)為神經(jīng)功能評(píng)分增多與發(fā)病率的增加，提示激活Nrf2通路可以減輕自身免疫性疾病。Nrf2/HO-1途徑是調(diào)節(jié)機(jī)體抗氧化應(yīng)激反應(yīng)的重要信號(hào)通路。Nrf2屬于亮氨酸拉鏈家族中重要轉(zhuǎn)錄因子，多存在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，與Keap1相結(jié)合而處于失活狀態(tài)，抗氧化反應(yīng)元件調(diào)控的抗氧化基因 HO-1可激活并表達(dá)增加，促進(jìn)氧化還原反應(yīng)紊亂恢復(fù)至平衡狀態(tài)，減輕自由基損傷[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，Nrf2/HO-1高表達(dá)、TNF-α低表達(dá)，可有助于改善多發(fā)性硬化癥患者，中樞神經(jīng)細(xì)胞損傷后，糖皮質(zhì)激素及營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞治療后，使腦組織Nrf2基因表達(dá)上調(diào)、激活并轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核，激活 Nrf2、HO-1途徑，從而激動(dòng)下游抗氧化蛋白 HO-1的表達(dá)，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化應(yīng)激的損傷。

綜上所述，糖皮質(zhì)激素聯(lián)合常規(guī)營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)改善多發(fā)性硬化癥患者神經(jīng)功能損傷，可能通過上調(diào)Nrf2、HO-1表達(dá)、下調(diào)TNF-α表達(dá)而發(fā)揮作用。

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（收稿日期：2018-12-11）