柴競(jìng)艷 吳向斌 夏忠斌 鮑兵 陳志穎
[摘要] 目的 探討Nrf2/ARE信號(hào)通路與多發(fā)性硬化預(yù)后的相關(guān)性研究。 方法 將我院2014年6月~2017年6月收治的40例多發(fā)性硬化癥患者作為研究對(duì)象,隨機(jī)分為觀察1組、觀察2組,各20例。選擇同期我院20例健康體檢者作為對(duì)照組。觀察1組給予糖皮質(zhì)激素聯(lián)合常規(guī)營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)治療,觀察2組采用單純營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)治療。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)三組入組Nrf2、HO-1、TNF-α表達(dá)水平,分析ADL及神經(jīng)功能評(píng)分。 結(jié)果 隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月,觀察1組Nrf2、HO-1表達(dá)水平、ADL評(píng)分高于觀察2組,而其TNF-α表達(dá)水平、神經(jīng)功能評(píng)分低于觀察2組(P<0.05),觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1表達(dá)水平、ADL評(píng)分高于治療前,而其TNF-α表達(dá)水平、神經(jīng)功能評(píng)分低于治療前(P<0.05),觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1、TNF-α表達(dá)水平高于對(duì)照組(P<0.05);隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月,觀察1組、觀察2組ADL評(píng)分低于對(duì)照組,神經(jīng)功能評(píng)分高于對(duì)照組(P<0.05)。 結(jié)論 糖皮質(zhì)激素聯(lián)合常規(guī)營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)改善多發(fā)性硬化癥患者神經(jīng)功能損傷,其可能通過上調(diào)Nrf2、HO-1表達(dá),下調(diào)TNF-α表達(dá)而發(fā)揮作用。
[關(guān)鍵詞] Nrf2/ARE;信號(hào)通路;多發(fā)性硬化;預(yù)后;相關(guān)性
[中圖分類號(hào)] R744.5? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701(2019)07-0011-03
[Abstract] Objective To explore the correlation between Nrf2/ARE signaling pathway and prognosis of multiple sclerosis. Methods Forty patients with multiple sclerosis admitted to our hospital from June 2014 to June 2017 were randomly divided into observation group 1 and observation group 2, 20 cases in each group. Twenty healthy subjects in our hospital were selected as the control group. Observation group 1 was treated with glucocorticoid combined with conventional nutritional nerve therapy, and observation group 2 was treated with simple nutrition nerve therapy. Flow cytometry was used to detect the expression levels of Nrf2, HO-1 and TNF-α in the three groups, and the ADL and neurological function scores were analyzed. Results At 6 months and 12 months of follow-up, the expression levels of Nrf2 and HO-1 and ADL scores in observation group 1 were higher than those in observation group 2, while the expression of TNF-α and neurological function scores were lower than those in observation group 2(P<0.05). The expression levels of Nrf2 and HO-1 in the two groups were higher than those before treatment, while the expression levels of TNF-α and neurological function were lower than those before treatment(P<0.05). The expression levels of Nrf2, HO-1 and TNF-α in observation group 1 and observation group 2 were higher than those in the control group (P<0.05). At 6 months and 12 months of follow-up, the ADL scores of observation group 1 and observation group 2 were lower than those of the control group, and the neurological function score was higher than that of the control group(P<0.05). Conclusion Glucocorticoid combined with conventional neurotrophic therapy can improve neurological impairment in patients with multiple sclerosis. The mechanism may be up-regulation of Nrf2 and HO-1 expression and down-regulation of TNF-α expression.
[Key words] Nrf2/ARE; Signaling pathway; Multiple sclerosis; Prognosis; Correlation
多發(fā)性硬化癥是臨床上較為常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一,其是指累及中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)的炎癥性自身免疫性脫髓鞘疾病[1-3],臨床上多采用非特異性的免疫治療方法,如糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑等治療措施。相關(guān)病理研究顯示[4],多發(fā)性硬化癥患者常伴有一定程度的少突膠質(zhì)細(xì)胞及軸突的損傷,而炎癥趨化因子等炎癥介質(zhì)參與疾病的發(fā)展。中樞神經(jīng)系統(tǒng)含有一系列抗氧化酶來調(diào)節(jié)受到氧化損傷的細(xì)胞,轉(zhuǎn)錄因子Nrf2調(diào)控這些保護(hù)細(xì)胞減輕損傷的抗氧化酶的表達(dá)[5]。本研究主要探討Nrf2/ARE信號(hào)通路與多發(fā)性硬化預(yù)后的相關(guān)性,現(xiàn)報(bào)道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
將我院2014年6月~2017年6月收治的40例多發(fā)性硬化癥患者作為研究對(duì)象,隨機(jī)分為觀察1組、觀察2組,各20例。選擇同期我院20例健康體檢者作為對(duì)照組。觀察1組,男12例,女8例;年齡42~76歲,平均(52.5±4.6)歲;觀察2組,男11例,女9例;年齡41~77歲,平均(52.6±4.5)歲;對(duì)照組,男10例,女10例;年齡40~75歲,平均(52.7±4.5)歲;患者均簽署研究知情同意書;本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn);三組在性別、年齡等方面比較,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),具有可比性。
1.2 方法
觀察1組采用甲基強(qiáng)的松(批準(zhǔn)文號(hào):H20080284,廠家:Pfizer Manufacturing Belgium NV)500 mg溶于5%葡萄糖注射液500 mL中,靜脈輸液,每日1次,按2014版中國(guó)《多發(fā)性硬化診斷和治療的中國(guó)專家共識(shí)》,500 mg使用3 d,250 mg使用3 d,120 mg使用3 d,改成60 mg持續(xù)口服,后續(xù)緩慢減量。同時(shí)給予神經(jīng)節(jié)苷脂(國(guó)藥準(zhǔn)字H20066833,長(zhǎng)春翔通藥業(yè)有限公司)20 mg+維生素B族及常規(guī)治療靜脈輸液,每日1次,連續(xù)應(yīng)用14 d為1個(gè)療程。觀察2組則單純給予神經(jīng)節(jié)苷脂+維生素B族常規(guī)治療,劑量及療程同觀察1組。
1.3 觀察指標(biāo)
記錄三組入組患者血液中Nrf2、HO-1、TNF-α表達(dá)水平,并分析其日常生活能力水平(ADL)及神經(jīng)功能評(píng)分;采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Nrf2、HO-1、TNF-α表達(dá)水平,采用ADL評(píng)價(jià)其行為生活能力情況,其總評(píng)分為100分,得分越高,生活能力越高[6],采用EDSS量表評(píng)價(jià)患者神經(jīng)功能缺損情況[7],每一項(xiàng)分為5~6個(gè)等級(jí),0~10分,得分越高,神經(jīng)功能缺失越嚴(yán)重。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料用(x±s)表示;多組間計(jì)量資料比較采用方差分析,計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn),P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 三組Nrf2、HO-1、TNF-α的表達(dá)水平比較
治療前觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1表達(dá)水平低于對(duì)照組,而其TNF-α表達(dá)水平高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);治療前觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1、TNF-α表達(dá)水平比較,無明顯差異(P>0.05);隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月,觀察1組Nrf2、HO-1表達(dá)水平高于觀察2組,而其TNF-α表達(dá)水平低于觀察2組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月,觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1表達(dá)水平高于治療前,而其TNF-α表達(dá)水平低于治療前,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月,觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1、TNF-α表達(dá)水平高于對(duì)照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);見表1。
2.2 三組ADL、神經(jīng)功能評(píng)分比較
治療前觀察1組、觀察2組ADL評(píng)分低于對(duì)照組,而其神經(jīng)功能評(píng)分高于對(duì)照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);治療前觀察1組、觀察2組ADL、神經(jīng)功能評(píng)分無明顯差異(P>0.05);隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月,觀察1組、觀察2組ADL評(píng)分高于治療前,神經(jīng)功能評(píng)分低于治療前,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月,觀察1組ADL評(píng)分高于觀察2組,神經(jīng)功能評(píng)分低于觀察2組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月,觀察1組、觀察2組ADL評(píng)分低于對(duì)照組,神經(jīng)功能評(píng)分高于對(duì)照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);見表2。
3 討論
多發(fā)性硬化癥患者發(fā)病原因較為復(fù)雜,治療后易反復(fù)發(fā)作,相關(guān)研究顯示[8-9],多發(fā)性硬化癥患者的致病因素多為自身免疫細(xì)胞的功能障礙,以往多采用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑及營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞等治療該疾病。甲基強(qiáng)的松龍可顯著抑制炎癥反應(yīng),調(diào)節(jié)免疫功能,抑制T淋巴細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞,而控制白質(zhì)炎癥脫髓鞘是當(dāng)今MS免疫治療的主要任務(wù)。
本研究主要觀察Nrf2/ARE信號(hào)通路與多發(fā)性硬化預(yù)后的相關(guān)性。其結(jié)果顯示:治療前觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1表達(dá)水平、ADL評(píng)分低于對(duì)照組,而其TNF-α表達(dá)水平、神經(jīng)功能評(píng)分高于對(duì)照組(P<0.05);隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月,觀察1組Nrf2、HO-1表達(dá)水平、ADL評(píng)分高于觀察2組,而其TNF-α表達(dá)水平、神經(jīng)功能評(píng)分低于觀察2組(P<0.05);隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月,觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1表達(dá)水平、ADL評(píng)分高于治療前,而其TNF-α表達(dá)水平、神經(jīng)功能評(píng)分低于治療前(P<0.05);隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月,觀察1組、觀察2組Nrf2、HO-1、TNF-α表達(dá)水平高于對(duì)照組(P<0.05);隨訪6個(gè)月、隨訪12個(gè)月,觀察1組、觀察2組ADL評(píng)分低于對(duì)照組,神經(jīng)功能評(píng)分高于對(duì)照組(P<0.05);因此,糖皮質(zhì)激素聯(lián)合常規(guī)營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)改善多發(fā)性硬化癥患者神經(jīng)功能損傷,其可能通過上調(diào)Nrf2、HO-1表達(dá),下調(diào)TNF-α表達(dá)而發(fā)揮作用。TNF-α是多發(fā)性硬化損傷的潛在發(fā)病機(jī)制,單核細(xì)胞與腦血管內(nèi)皮細(xì)胞相互作用產(chǎn)生活性氧[10-11],細(xì)胞骨架重排,血腦屏障破壞,誘導(dǎo)了巨噬細(xì)胞吞噬髓鞘,導(dǎo)致少突膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元與軸突損傷。當(dāng)細(xì)胞存在氧化應(yīng)激時(shí),Nrf2轉(zhuǎn)位入核,激活抗氧化反應(yīng)原件(ARE)所介導(dǎo)的抗氧化酶表達(dá)。迄今為止,Nrf2-ARE通路介導(dǎo)的解毒酶和抗氧化酶超過200個(gè),其中包括超氧化物歧化酶1、超氧化物歧化酶2等[12]。Johnson DA等[13]通過Nrf2基因敲除小鼠研究證明:Nrf2的缺失可以使EAE病情惡化,表現(xiàn)為神經(jīng)功能評(píng)分增多與發(fā)病率的增加,提示激活Nrf2通路可以減輕自身免疫性疾病。Nrf2/HO-1途徑是調(diào)節(jié)機(jī)體抗氧化應(yīng)激反應(yīng)的重要信號(hào)通路。Nrf2屬于亮氨酸拉鏈家族中重要轉(zhuǎn)錄因子,多存在細(xì)胞質(zhì)內(nèi),與Keap1相結(jié)合而處于失活狀態(tài),抗氧化反應(yīng)元件調(diào)控的抗氧化基因 HO-1可激活并表達(dá)增加,促進(jìn)氧化還原反應(yīng)紊亂恢復(fù)至平衡狀態(tài),減輕自由基損傷[14]。本研究發(fā)現(xiàn),Nrf2/HO-1高表達(dá)、TNF-α低表達(dá),可有助于改善多發(fā)性硬化癥患者,中樞神經(jīng)細(xì)胞損傷后,糖皮質(zhì)激素及營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞治療后,使腦組織Nrf2基因表達(dá)上調(diào)、激活并轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核,激活 Nrf2、HO-1途徑,從而激動(dòng)下游抗氧化蛋白 HO-1的表達(dá),增強(qiáng)機(jī)體抗氧化應(yīng)激的損傷。
綜上所述,糖皮質(zhì)激素聯(lián)合常規(guī)營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)改善多發(fā)性硬化癥患者神經(jīng)功能損傷,可能通過上調(diào)Nrf2、HO-1表達(dá)、下調(diào)TNF-α表達(dá)而發(fā)揮作用。
[參考文獻(xiàn)]
[1] 李娜,李金亮,王仁喜,等. 富馬酸二甲酯在多發(fā)性硬化中的應(yīng)用及其機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 軍事醫(yī)學(xué),2015,39(11):881-883.
[2] 王寧,馬慧萍,漆欣筑,等. Nrf2-ARE信號(hào)通路在機(jī)體氧化應(yīng)激損傷防護(hù)中的研究進(jìn)展[J]. 解放軍醫(yī)藥雜志,2015,27(12):21-27.
[3] 胡流芳,王迎,任汝靜,等. Keap1-Nrf2/ARE信號(hào)通路的抗氧化應(yīng)激作用及其調(diào)控機(jī)制[J]. 國(guó)際藥學(xué)研究雜志,2016,43(1):146-152,166.
[4] 王玉敏,成龍,崔其福,等. 萊菔硫烷通過調(diào)控Nrf2/ARE通路的神經(jīng)保護(hù)作用研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志,2016,51(17):1445-1449.
[5] 周佳緯,黃琦. 人參皂苷通過Nrf2/ARE信號(hào)通路發(fā)揮抗氧化應(yīng)激作用的研究進(jìn)展[J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2016, 34(11):2745-2747.
[6] 歐廣利,朱翠明. Nrf2/ARE通路在抗病原生物感染中的作用研究進(jìn)展[J]. 微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展,2014,42(1):56-60.
[7] 楊苓,王孝文,張皓云,等. Nrf2/HO-1在肌萎縮側(cè)索硬化癥轉(zhuǎn)基因小鼠脊髓中的表達(dá)變化[J]. 神經(jīng)解剖學(xué)雜志,2016,32(6):763-768.
[8] 楊靜,吳鳳芝,李瑜霞,等. 銀杏葉提取物緩釋劑穴位埋藥線對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠腦組織損傷及Nrf2/HO-1信號(hào)通路的影響[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2017,29(1):27-33.
[9] 黃娟,廖君,彭熙煒,等. 腦泰方對(duì)腦缺血/再灌注大鼠海馬區(qū)Nrf2、HO-1和膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)輔助蛋白表達(dá)的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2017,33(10):1467-1472.
[10] 喬麗杰,王延讓,張明. Nrf2/HO-1通路在氧化損傷保護(hù)機(jī)制中研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)職業(yè)醫(yī)學(xué),2013,40(1):82-84.
[11] 奉姝,徐兆發(fā),劉巍,等. MK-801對(duì)甲基汞致大鼠腦皮質(zhì)Nrf2及HO-1、γ-GCS、GPx-1表達(dá)的影響[J]. 毒理學(xué)雜志,2013,27(4):248-252.
[12] 黃小平,鄧常清,邱詠園,等. 黃芪甲苷和三七的三種有效成分配伍對(duì)小鼠腦缺血/再灌注后氧化應(yīng)激和Nrf2/HO-1途徑的影響[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2013,29(11):1596-1601.
[13] Johnson DA,Amirahmadi S,Ward C,et al. The absence of the pro-antioxidant transcription factor nrf2 exacerbates experimental autoimmune encephalomyelitis[J]. Toxicol Sci,2010,114:237-246.
[14] 楊春彥,李艷花,辛延樂,等. 黃芪皂苷對(duì)多發(fā)性硬化作用的研究進(jìn)展[J]. 山西大同大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2016,32(1):48-50,53.
[15] 陳虎,丁國(guó)梁. 間充質(zhì)干細(xì)胞在多發(fā)性硬化癥治療中的應(yīng)用:全球研究探索與展望[J]. 解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2016, 41(2):87-93.
[16] 王利娟,李曉玲,謝沁芳,等. 多發(fā)性硬化患者IL-17、IL-27水平的動(dòng)態(tài)表達(dá)及意義[J]. 免疫學(xué)雜志,2016, 32(7):616-619.
[17] 張嘉祺,張鴻悅,唐芯,等. 認(rèn)知行為療法改善多發(fā)性硬化患者心理狀態(tài)及社會(huì)功能效果的Meta分析[J]. 中國(guó)循證醫(yī)學(xué)雜志,2016,16(8):953-961.
[18] 王永強(qiáng),王蕾. 基于數(shù)據(jù)挖掘的中醫(yī)藥治療多發(fā)性硬化組方用藥規(guī)律分析[J]. 中華中醫(yī)藥雜志,2016,31(8):3049-3052.
(收稿日期:2018-12-11)