慶大霉素聯(lián)合阿奇霉素抗淋球菌的體外研究

董森林,吳 丹,王艷青

(山西醫(yī)科大學第二醫(yī)院皮膚科,太原 030001;*通訊作者,E-mail:shuxin0352@126.com)

為了延緩淋球菌對頭孢曲松的耐藥,2012年美國及歐洲一些國家開始推薦頭孢曲松聯(lián)合阿奇霉素作為治療淋病的一線方案[1,2]。近年來,一些指南也提出把慶大霉素聯(lián)合阿奇霉素作為一種替代方案[3],用于不適合使用頭孢曲松的人群。慶大霉素在我國已很少使用,為了了解慶大霉素聯(lián)合阿奇霉素體外抗淋球菌的特點,以我院皮膚性病門診收集的27株淋球菌為研究對象進行研究,了解慶大霉素聯(lián)合阿奇霉素體外抗淋球菌的特點。

1 材料與方法

1.1 標本采集

研究對象為2017-08～2018-01山西醫(yī)科大學第二醫(yī)院皮膚性病門診就診的淋病患者,臨床表現(xiàn)尿頻、尿急、尿痛,膿性分泌物。用無菌試子采集分泌物后接種至巧克力瓊脂板,于36 ℃的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48 h,分泌物培養(yǎng)陽性的共有27例,其中26例為男性患者,1株為女性患者,年齡分布為21-52歲,平均年齡36.0歲。通過革蘭染色、氧化酶實驗、糖發(fā)酵實驗鑒定后傳代1次,洗脫于脫脂牛奶中,置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 主要試劑

GC瓊脂粉來自北京蘭博利德商貿(mào)有限公司,脫脂牛奶來自英國OXOID公司,革蘭染液來自珠海貝索生物技術有限公司,慶大霉素來自北京索萊寶科技有限公司,阿奇霉素來自北京泰澤嘉業(yè)科技發(fā)展有限公司,無菌脫纖維新鮮羊血來自北京瑞茂宏達科技有限公司。配制抗生素培養(yǎng)基時需用GC瓊脂粉及10%的無菌脫纖維新鮮羊血。

1.3 抗生素敏感性檢測

1.3.1 瓊脂稀釋法[4]測定慶大霉素、阿奇霉素單獨作用的MIC 培養(yǎng)皿中抗生素的濃度范圍:慶大霉素1.00-32.00 mg/L,阿奇霉素0.03-1.00 mg/L,將分離純化后的淋球菌配成107cfu/ml的菌懸液,用多頭接種儀接種至含有抗生素的瓊脂培養(yǎng)皿上,置于36 ℃含有5%濃度CO2的培養(yǎng)箱中,24 h后觀察結果,以沒有淋球菌生長的最低藥物濃度為MIC。

1.3.2 瓊脂棋盤稀釋法測定聯(lián)合用藥MIC ①根據(jù)單獨用藥抗淋球菌得到的最小抑菌濃度(MIC)采用倍比稀釋法制備抗生素工作液,即2×MIC、1×MIC、0.5×MIC、0.25×MIC、0.125×MIC、0.06×MIC濃度的慶大霉素工作液及2×MIC、1×MIC、0.5×MIC、0.25×MIC、0.125×MIC、0.062×MIC濃度的阿奇霉素工作液。②聯(lián)合用藥工作液制備:在96孔板上采用棋盤法制備慶大霉素工作液與阿奇霉素聯(lián)合作用工作液。③含有抗生素的瓊脂培養(yǎng)皿制備:96孔板中每個含有藥液的孔對應1個培養(yǎng)皿,標記好后制備慶大霉素和阿奇霉素聯(lián)合用藥瓊脂培養(yǎng)皿。④將分離純化后的淋球菌配成107cfu/ml的菌懸液,用多頭接種儀接種至含有抗生素的瓊脂培養(yǎng)皿上,置于36 ℃含有5%濃度CO2的培養(yǎng)箱中,24 h后觀察結果。⑤以淋球菌不能生長的最低濃度為MIC,獲得聯(lián)合用藥時MIC慶大(聯(lián)合)、MIC阿奇(聯(lián)合)。⑥計算部分抑菌濃度指數(shù)FICI:FICI=MIC慶大(聯(lián)合)/MIC慶大(單獨)+MIC阿奇(聯(lián)合)/MIC阿奇(單獨)。

1.3.3 結果判定 ①根據(jù)文獻[5,6]的研究,慶大霉素MIC≥32 mg/L為耐藥,8-16 mg/L為中度敏感,≤4 mg/L為敏感;參照歐洲抗菌藥物敏感性檢測委員會(EUCAST)標準[7],阿奇霉素MIC≥1 mg/L為耐藥,=0.5 mg/L為中度敏感,≤0.25 mg/L為敏感。②FICI≤0.5表現(xiàn)為協(xié)同作用,0.54表現(xiàn)為拮抗作用[8,9]。

2 結果

2.1 淋球菌對慶大霉素、阿奇霉素的敏感性

慶大霉素的MIC均值為4.444 mg/L,范圍為4.000-8.000 mg/L,27株淋球菌臨床株中88.9%(24/27)對慶大霉素表現(xiàn)敏感,11.1%(3/27)的菌株對慶大霉素中度敏感,未檢測到對慶大霉素耐藥的菌株(見表1)。阿奇霉素的MIC均值為0.147 mg/L,范圍為0.060-0.500 mg/L,92.5%(25/27)的淋球菌對阿奇霉素表現(xiàn)敏感,7.5%(2/27)的淋球菌對阿奇霉素中度敏感,未檢測到對阿奇霉素耐藥的菌株(見表1)。

表1 淋球菌對慶大霉素、阿奇霉素的敏感性結果

2.2 慶大霉素與阿奇霉素體外抗淋球菌的聯(lián)合作用

聯(lián)合用藥時FICI均值為2.35,FICI范圍為0.75-4.00,實驗中慶大霉素與阿奇霉素聯(lián)合使用在體外抗淋球菌均表現(xiàn)為相加作用,未發(fā)現(xiàn)協(xié)同作用,也無拮抗作用(見表2)。

表2 27株淋球菌部分抑菌濃度指數(shù)結果

3 討論

在馬拉維等國家,慶大霉素被認為在治療淋病方面既經(jīng)濟又高效,并且在臨床上有95%的治愈率[5]。國外的一項Meta分析發(fā)現(xiàn),慶大霉素治療淋病的有效率達91.5%[5],另外,關于慶大霉素療效及安全性的Ⅲ期臨床試驗也在進行[5]。可見,在選擇治療淋病的替代藥物時,一些研究者開始關注慶大霉素在治療淋病方面的特點。在我們的實驗中,發(fā)現(xiàn)88.9%(24/27)的淋球菌對慶大霉素敏感,還有11.1%(3/27)的淋球菌對慶大霉素表現(xiàn)出中度敏感,未發(fā)現(xiàn)對慶大霉素耐藥的菌株。

近年來,研究發(fā)現(xiàn)淋球菌對阿奇霉素的耐藥逐漸增加[10,11],但是我們的實驗中未發(fā)現(xiàn)對阿奇霉素耐藥的菌株,可能因為不同地區(qū)淋球菌對抗生素的敏感性會不同,另外,我們實驗的樣本較小對實驗結果也會有影響。我們還需要繼續(xù)監(jiān)測淋球菌對阿奇霉素的敏感性并進行進一步的研究。

與Singh等[12]的結果相同,淋球菌對慶大霉素比較敏感,當慶大霉素與阿奇霉素聯(lián)合時,主要表現(xiàn)為相加作用,沒有發(fā)現(xiàn)拮抗作用、協(xié)同作用的出現(xiàn)。由于慶大霉素的耳毒性及腎毒性作用,限制了其在抗菌方面的應用。但是慶大霉素的毒性作用多與血藥濃度超過毒性閾值的持續(xù)時間有關[13],而目前慶大霉素在治療淋病時多采用240 mg肌肉注射。一些研究發(fā)現(xiàn),慶大霉素聯(lián)合阿奇霉素最常見的副作用是腹脹等消化道癥狀[14]。為了更詳細地了解慶大霉素聯(lián)合阿奇霉素在抗淋球菌方面的作用,還需要進行動物體內(nèi)實驗等研究。當然,加強淋球菌的耐藥監(jiān)測,并控制耐藥淋球菌的傳播也十分重要。