DNA倍體分析和尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查在尿路上皮癌的臨床應(yīng)用價(jià)值

陳婷 陳金劍

【摘要】 目的：分析DNA倍體分析和尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查在尿路上皮癌診斷中的應(yīng)用。方法：選擇筆者所在醫(yī)院2014年3月-2018年12月收治的52例尿路上皮癌患者納入觀察組，另取52例血尿患者納入對照組，兩組均接受DNA倍體分析和尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查。結(jié)果：觀察組尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查陽性率為94.23%，高于對照組的11.54%;觀察組DNA倍體分析陽性率為98.08%，高于對照組的7.69%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。DNA倍體分析診斷膀胱癌準(zhǔn)確率為97.67%，診斷上尿路上皮癌準(zhǔn)確率為100%;尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查診斷膀胱癌準(zhǔn)確率為95.35%，診斷上尿路上皮癌準(zhǔn)確率為88.89%。兩種診斷方法診斷準(zhǔn)確率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：DNA倍體分析、尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查均可為尿路上皮癌的診斷提供支持。

【關(guān)鍵詞】 DNA倍體分析; 尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查; 尿路上皮癌

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.27.032 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2019）27-00-03

Clinical Value of DNA Ploidy Analysis and Urinary Exfoliative Cytology in Urothelial Carcinoma/CHEN Ting，CHEN Jinjian.//Chinese and Foreign Medical Research，2019，17（27）：74-76

【Abstract】 Objective：To analyze the application of DNA ploidy analysis and urinary exfoliation cytology in the diagnosis of urothelial carcinoma.Method：A total of 52 patients with urothelial cancer admitted to our hospital from March 2014 to December 2018 were enrolled in the observation group，and 52 patients with hematuria were enrolled in the control group.Both groups received DNA ploidy analysis and cytological examination of urinary exfoliation.Result：The positive rate of urine exfoliative cytology in the observation group was 94.23%，which was higher than 11.54% in the control group，and the positive rate of DNA ploidy analysis in the observation group was 98.08%，which was significantly higher than 7.69% in the control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.The accuracy of DNA ploidy in the diagnosis of bladder cancer was 97.67%，and the accuracy of the diagnosis of upper urothelial carcinoma was 100%，the accuracy of urine exfoliative cytology in the diagnosis of bladder cancer and epithelial carcinoma was 95.35% and 88.89% respectively，There was no significant difference in diagnostic accuracy between the two methods（P>0.05）.Conclusion：DNA ploidy analysis and cytological examination of urinary exfoliation can provide support for the diagnosis of urothelial carcinoma.

【Key words】 DNA ploidy analysis; Cytological examination of urinary exfoliation; Urothelial carcinoma

First-authors address：Second Hospital of Longyan City，Longyan 364000，China

作為一類較為常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，尿路上皮癌的發(fā)生會對患者的日常生活產(chǎn)生極大影響[1]。早期診斷已經(jīng)成為臨床干預(yù)尿路上皮癌的主要方向[2]。從人們對尿路上皮癌診斷的要求來看，無創(chuàng)性、準(zhǔn)確性是兩項(xiàng)關(guān)鍵要求。DNA倍體分析以流式細(xì)胞術(shù)為核心，其可通過尿液脫落細(xì)胞中DNA倍體的變化規(guī)律，判斷其合并惡性腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)[3]。尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查則通過光鏡下鑒別細(xì)胞類型的形式，為腫瘤的識別提供支持。為驗(yàn)證上述兩組診斷方法的價(jià)值，本研究主要針對104例受檢者進(jìn)行分析，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇筆者所在醫(yī)院2014年3月-2018年12月收治的52例經(jīng)術(shù)后病理確診的尿路上皮癌患者納入觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合尿路上皮癌診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）不配合者;（2）伴精神疾病者。另取同期于筆者所在醫(yī)院接受治療的52例血尿患者納入對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合血尿診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）由尿路上皮癌引發(fā)的血尿;（2）伴精神疾病或不配合。觀察組男47例，女5例;平均年齡（47.6±10.2）歲。對照組男45例，女7例;平均年齡（47.3±10.1）歲。兩組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。兩組患者均對本研究知情同意，且簽署知情同意書。

1.2 方法

所有受檢者均接受DNA倍體分析、尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查：（1）DNA倍體分析。取樣：留取受檢者清晨第二次小便作為樣本。以3 000 r/min轉(zhuǎn)速，對受檢者的尿液樣本進(jìn)行持續(xù)離心處理，離心10 min，取沉淀物用于后續(xù)檢測。染色：將受檢者的尿液沉淀樣本制成薄層細(xì)胞片，以改良Feulgen染色法對受檢者的涂片進(jìn)行染色處理。經(jīng)染色固定處理后，將涂片浸潤于5 mmol/L鹽酸水中，持續(xù)水解0.5 h。再次以Schiff試劑進(jìn)行染色（染色時(shí)長為1 h）。DNA倍體分析：開機(jī)校準(zhǔn)DNA-Prep Kit設(shè)備。結(jié)合DNA倍體分析檢查的要求，設(shè)置參數(shù)。以正常人淋巴細(xì)胞DNA為外參，測定受檢者的尿脫落細(xì)胞。常規(guī)去除細(xì)胞團(tuán)塊。以Multicycle軟件針對獲得的DNA含量分布直方圖開展DNA增殖周期分析。（2）尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查。將所獲取受檢者的沉淀制成圖片，并以巴氏染色法染色。邀請兩名擁有豐富閱片經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師共同判讀受檢者的脫落細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)與評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

DNA倍體分析診斷尿路上皮癌的標(biāo)準(zhǔn)：（1）惡性?？梢娕c正常二倍體明顯分離的異倍體峰，G0/G1峰CV水平高于10%，未見明顯異倍體峰，有1個(gè)突出的四倍體細(xì)胞峰，超二倍體細(xì)胞峰比值高于15%。（2）良性。未見明顯異倍體峰，超二倍體細(xì)胞峰比值不足10%。（3）可疑惡性。無明顯異倍體峰出現(xiàn)，可見1個(gè)突出四倍體細(xì)胞峰，超二倍體細(xì)胞峰比值處于10%～15%水平上，且伴G0/G1細(xì)胞峰CV升高。其中，陽性包含惡性與可疑惡性;陰性則為良性。

尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查診斷尿路上皮癌的標(biāo)準(zhǔn)：（1）陽性。光鏡下可見腫瘤細(xì)胞、核異質(zhì)細(xì)胞。（2）陰性。光鏡下可見炎性細(xì)胞。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

以SPSS 22.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組診斷結(jié)果比較

觀察組尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查陽性率為94.23%，高于對照組的11.54%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;觀察組DNA倍體分析陽性率為98.08%，高于對照組的7.69%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 兩種診斷方法對52例觀察組患者診斷準(zhǔn)確性比較

術(shù)后病理診斷證實(shí)，52例觀察組患者中，膀胱癌43例，上尿路上皮癌9例。DNA倍體分析診斷膀胱癌準(zhǔn)確率為97.67%，診斷上尿路上皮癌準(zhǔn)確率為100%;尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查診斷膀胱癌準(zhǔn)確率為95.35%，診斷上尿路上皮癌準(zhǔn)確率為88.89%。兩種診斷方法診斷準(zhǔn)確率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表2。

3 討論

尿路上皮癌診斷工作面臨的困難主要體現(xiàn)為：早期階段患者的癥狀缺乏典型性，而隨著腫瘤細(xì)胞的持續(xù)增殖與分化，惡性腫瘤病情的進(jìn)展會增加患者的不良預(yù)后形成風(fēng)險(xiǎn)[4]。因此，早期診斷已經(jīng)成為尿路上皮癌管理面臨的必然要求。

術(shù)后病理診斷是尿路上皮癌診斷的金標(biāo)準(zhǔn)[5]。結(jié)合當(dāng)前尿路上皮癌的診斷現(xiàn)狀來看，這種診斷方法雖然可保障受檢者診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性[6]。但由于其屬于一種有創(chuàng)技術(shù)，且患者對其接受度有限，因此，在尿路上皮癌患者的早期診斷中推行術(shù)后病理診斷方法并不現(xiàn)實(shí)[6-7]。

DNA倍體分析診斷惡性腫瘤的原理：與正常細(xì)胞相比，腫瘤細(xì)胞DNA具有一定特殊性，其DNA伴非整倍性特征[8]。以流式細(xì)胞術(shù)針對惡性腫瘤患者標(biāo)本中的DNA進(jìn)行倍增處理時(shí)，腫瘤細(xì)胞DNA倍體的含量變化規(guī)律與正常細(xì)胞產(chǎn)生明顯差異，進(jìn)而為突變細(xì)胞的判斷提供支持。將其用于尿路上皮癌患者，其可經(jīng)DNA倍增技術(shù)呈現(xiàn)出受檢者的DNA含量水平變化，便于醫(yī)師及時(shí)發(fā)現(xiàn)伴惡性腫瘤細(xì)胞的樣本，實(shí)現(xiàn)早期診斷目的。

尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查作為一類經(jīng)典無創(chuàng)診斷技術(shù)，其在尿路上皮癌中的應(yīng)用原理為：尿路上皮癌患者的腫瘤細(xì)胞中容易脫落，導(dǎo)致尿液中含有大量腫瘤細(xì)胞[9]。研究指出，尿路上皮癌患者的尿液細(xì)胞中，約95%為腫瘤細(xì)胞[10]。經(jīng)染色處理后，將尿路上皮癌患者的尿液細(xì)胞置于光鏡下檢查，可較為輕便地發(fā)現(xiàn)標(biāo)本中的腫瘤細(xì)胞。

尿路上皮癌診斷中，DNA倍體分析、尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查方法的應(yīng)用優(yōu)勢為：（1）精確鑒別陽性樣本。DNA倍體分析將離心后的尿液沉淀作為樣本，經(jīng)DNA倍增、含量分析流程，識別出標(biāo)本中的異常細(xì)胞（腫瘤細(xì)胞DNA伴非整倍性）;而尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查則可于光鏡下，準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)染色后的異常細(xì)胞[11-12]。觀察組尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查陽性率為94.23%，高于對照組的11.54%;觀察組DNA倍體分析陽性率為98.08%，高于對照組的7.69%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（2）滿足患者的無創(chuàng)診斷、重復(fù)檢測要求。惡性腫瘤診斷中，無創(chuàng)性是患者的關(guān)鍵性要求之一。與術(shù)后病理相比，DNA倍體分析、尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查均屬于無創(chuàng)診斷技術(shù)，這兩種診斷方法的無創(chuàng)性特征均決定著：患者對這類診斷方法的接受度較高。此外，由于惡性腫瘤的控制難度較高，耗時(shí)較長，因此，當(dāng)確診為尿路上皮癌后，多需經(jīng)重復(fù)檢驗(yàn)，以判斷患者的病情控制效果。術(shù)后病理診斷的實(shí)施會為尿路上皮癌患者帶來一定的創(chuàng)傷。采用這種技術(shù)監(jiān)控尿路上皮癌患者的病情變化并不現(xiàn)實(shí);相比之下，DNA倍體分析、尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查均可經(jīng)受檢者的尿液樣本完成診斷，其具有良好的可重復(fù)性優(yōu)勢。

此外，本研究在對比DNA倍體分析、尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查的價(jià)值時(shí)，確定如下結(jié)果，DNA倍體分析診斷膀胱癌準(zhǔn)確率為97.67%，診斷上尿路上皮癌準(zhǔn)確率為100%;尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查診斷膀胱癌準(zhǔn)確率為95.35%，診斷上尿路上皮癌準(zhǔn)確率為88.89%。兩種診斷方法診斷準(zhǔn)確率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。出現(xiàn)上述現(xiàn)象的原因?yàn)椋洪_展尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查時(shí)，尿液標(biāo)本的完整性、檢驗(yàn)者經(jīng)驗(yàn)等因素，可能出現(xiàn)漏診或誤診問題。

綜上所述，宜于尿路上皮癌患者的診斷中，推行DNA倍體分析與尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查，以滿足患者對診斷工作的無創(chuàng)性要求。

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（收稿日期：2019-08-14） （本文編輯：馬竹君）