流式細胞術(shù)檢測多發(fā)性骨髓瘤中骨髓細胞表面免疫表型的價值

蘇密龍

多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是單克隆惡性漿細胞在骨髓中無節(jié)制增生，最終造成骨髓造血功能異常的一種疾病，臨床表現(xiàn)為貧血、骨痛、腎功能受損等[1]。骨髓瘤細胞分布呈灶性分布，與正常細胞的形態(tài)區(qū)別甚微，臨床診斷時，往往會因此瘤細胞和正常細胞比值尚未達到診斷標準而無法確診疑似患者，但表面免疫表型差異巨大。臨床研究顯示[2]，CD38和CD138在漿細胞上表達強烈，其中CD138僅在漿細胞表達，陽性率為100%，而CD38則更強。CD45在患者中多數(shù)為陽性表達，CD56則在正常漿細胞中幾乎沒有表達，卻在骨髓瘤細胞中高表達。CD19在骨髓瘤細胞中卻幾乎不表達，目前，臨床已經(jīng)開始使用流式細胞儀鑒別骨瘤細胞核正常細胞[3]。本次研究選取2017年1月—2018年9月我院收治的49例多發(fā)性骨髓瘤患者，試檢查腫瘤細胞表面的CD19、CD38、CD45、CD56、CD138的具體表達情況，以檢測多發(fā)性骨髓細胞表面免疫表型，以與正常細胞進行鑒定和區(qū)別，具體報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2017年1月—2018年9月我院收治的49例多發(fā)性骨髓瘤患者作為研究組，并同期選取25例繼發(fā)性單克隆免疫球蛋白血癥患者作為對照組。研究組中男性25例，女性24例，年齡36～88歲，平均年齡（51.8±5.9）歲；腫瘤分期：ⅠA期2例、ⅠB 期3例、ⅡA期7例、ⅡB期9例、ⅢA期11例、ⅢB期17例。對照組患者中男性14例、女性11例，年齡42～76歲，平均年齡（50.8±4.2）歲，原發(fā)疾病：肝硬化6例、系統(tǒng)性紅斑狼瘡3例、腎炎7例、白血病7例、肺癌2例。兩組患者的性別、年齡對比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 研究方法

抽取兩組患者0.5 mL骨髓標本，進行抗凝處理。使用磷酸鹽緩沖液重懸細胞，使得細胞數(shù)調(diào)整至1×106/L，取上樣管，加入骨髓血樣本50 μL、熒光標記抗體20μL、磷酸鹽緩沖液25μL，混合均勻后，避光培育15 min，再加入200μL紅細胞裂解液，混合均勻后，在室溫下培育15 min，加入磷酸鹽緩沖液2mL，以1 000 rpm的速度離心10 Min，棄去上清液后加入多聚甲醛固定液500 μL。設置流式細胞儀進行熒光校準和熒光補償，用SSC和FSC設門，再以CD45和SSC設門，檢測細胞表達情況。

1.3 儀器和試劑

CD19、CD38、CD45、CD56、CD138單克隆抗體、磷酸鹽緩沖液、流式細胞儀、紅細胞裂解液、多聚甲醛固定液。

1.4 診斷標準

熒光強度FI：≥500為強陽性，200～499為陽性，100～199為弱陽性，＜100為陰性。 患者免疫表型結(jié)果表達：CD抗原陽性率90%～100%為強表達；60%～89%為高表達；20%～59%為弱表達。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0進行數(shù)據(jù)處理，計量資料用（均數(shù)±標準差）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用例（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者骨髓瘤細胞免疫表型熒光強度對比

研究組CD38和CD138熒光強度高于對照組，CD19熒光強度低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

2.2 骨髓瘤患者的流式細胞分析結(jié)果

CD19陽性率為6.1%（3/49），為弱表達，CD38 陽性率為100.0%（49/49），為強表達；CD45陽性率為38.8%（19/49），為弱表達；CD56陽性率為81.6%（40/49），為高表達；CD138陽性率為100.0%（49/49），為強表達。

3 討論

多發(fā)性骨髓瘤在血液腫瘤疾病中較為常見，傳統(tǒng)篩查常用骨髓細胞涂片形態(tài)學檢測，但瘤細胞之間的增殖范圍差異較大，容易造成醫(yī)師誤診[4-7]。近年來，流式細胞術(shù)開始被頻繁使用，其具有多種優(yōu)點，檢測迅速靈敏，可定性或定量檢測細胞膜上多種抗體的表達。

表1 兩組患者骨髓瘤細胞免疫表型熒光強度對比（ ±s）

表1 兩組患者骨髓瘤細胞免疫表型熒光強度對比（ ±s）

組別 CD38 CD138 CD19 CD45 CD56研究組（49 例） 781．3±147．3 987．2±227．1 59．2±22．1 153．3±46．2 218．2±65．3對照組（25 例） 556．1±103．4 612．4±126．4 367．2±123．6 179．5±22．7 306．9±145．8 t值 6．824 7．653 17．025 2．669 3．623 P值 0．000 0．000 0．000 0．000 0．000

正常漿細胞表面沒有特異性表面標志物，但通過分析免疫表型可區(qū)分正常細胞和瘤細胞，CD38、CD138均可在正常漿細胞和骨髓瘤細胞表達，CD38在多數(shù)惡性漿細胞表面也均可表達，CD19在正常漿細胞中表達，在骨髓瘤細胞中幾乎不表達，CD56則相反，其可在骨髓瘤細胞中表達，但不在正常漿細胞中表達[8-9]。

本次研究結(jié)果顯示，CD19陽性率為6.1%（3/49），CD38 陽性率為100.0%（49/49），為強表達；CD45陽性率為38.8%（19/49），為弱表達；CD56陽性率為81.6%（40/49），為高表達；CD138陽性率為100.0%（49/49），為強表達。正常細胞和惡性細胞均表達了CD38，但僅有骨髓瘤細胞的CD38表達率為100%，而CD138僅在骨髓瘤細胞和漿細胞中表達，可以作為鑒別多發(fā)性骨髓瘤細胞的特異性標志物。本次研究中，CD19陽性率為6.1%（3/49），與既往研究結(jié)果也一致[10-11]。分析原因為CD138是影響骨髓瘤的重要因素之一，若細胞發(fā)生凋亡，則CD138的表達也隨之減少，所以可以根據(jù)CD138的表達情況來判斷腫瘤細胞的數(shù)量變化。CD56屬于免疫球蛋白，主要作用是介導造血細胞粘附，在預測骨髓瘤患者病情變化中有一定的作用[12-13]。本次研究中CD56陽性率為81.6%（40/49）也證實了這一點。在患者患病初期CD56的表達會增多，若CD56表達降低時，則可能提示有好轉(zhuǎn)。

綜上所述，使用流式細胞儀檢測骨髓瘤細胞免疫表型可鑒別骨瘤細胞和正常細胞，具有重要診斷價值。