4種殺菌劑對天津地區(qū)草莓鐮刀根腐病菌的室內(nèi)毒力測定

楊利娟，高 葦，張春祥，王 勇

（天津市植物保護研究所，天津 300381）

草莓根腐病是制約草莓產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一個關(guān)鍵因素。近年來隨著草莓產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展，栽培面積日益增長，連作導(dǎo)致草莓根腐病越來越嚴(yán)重。鐮刀菌 （Fusarium spp.） 是草莓根腐病的主要致病菌之一，發(fā)病植株根系從幼根前端或中部變成褐色或黑褐色，發(fā)病初期不定根的中間部位表皮壞死，病健交界明顯，被侵染的植株長勢弱，葉片變黃，分蘗減少，結(jié)果減少，嚴(yán)重時維管束褐變、壞死，整株植株萎蔫，最后枯死[1-2]。我國草莓主產(chǎn)區(qū)的發(fā)病率一般為20%，嚴(yán)重時達80%以上[3]。

目前，草莓鐮刀根腐病的防治以化學(xué)防治為主，單一化學(xué)藥劑的長期使用易使病原菌產(chǎn)生抗藥性。篩選對草莓鐮刀根腐病菌高活性的殺菌劑對草莓安全生產(chǎn)具有重要的意義?？┚?、氟啶胺、多菌靈和啶氧菌酯均為廣譜性殺菌劑，對鐮刀菌具有優(yōu)異的防治效果[4-9]，但尚未知天津地區(qū)草莓鐮刀根腐病菌對這4 種殺菌劑的敏感性。本研究從天津武清地區(qū)和靜海地區(qū)的草莓主產(chǎn)大棚中采集和分離草莓鐮刀根腐病菌，并測定其對4 種供試殺菌劑的敏感性，為天津地區(qū)科學(xué)、合理地防治草莓鐮刀根腐病菌提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 2018 年從天津市武清區(qū)和靜海區(qū)的主要草莓基地采集具有典型根腐癥狀的病株，經(jīng)分離和多次純化，經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定病原為尖孢鐮刀菌 （Fusarium oxysporum）。WQ1-7 為采集自武清地區(qū)的菌株，JH1-2 為采集自靜海地區(qū)的菌株。

1.2 草莓鐮刀根腐病菌對殺菌劑的敏感性檢測

1.2.1 供試藥劑 98%咯菌腈原藥；98%氟啶胺原藥；98%多菌靈原藥；98%啶氧菌酯原藥。

1.2.2 試劑 二甲基亞砜、葡萄糖、瓊脂條。

1.2.3 試驗方法 采用菌絲生長速率法測定菌株對殺菌劑的敏感性。使用二甲基亞砜溶解各藥劑配制為104μg/mL母液，將母液稀釋至7 個系列質(zhì)量濃度，并加入到馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA） 培養(yǎng)基中制成含藥 PDA培養(yǎng)基，咯菌腈、氟啶胺和多菌靈的終濃度為 0，0.01、0.05、0.1、0.5、1、5 和 10μg/mL，啶氧菌酯的終濃度為 0、1、5、10、50、100 和 200μg/mL，其中含啶氧菌酯的處理中均加入100μg/mL水楊基羥肟酸，以抑制旁路氧化。設(shè)置不含藥劑的處理為空白對照，每個處理重復(fù)3 次。將培養(yǎng)好的病原菌菌餅接種到上述含藥PDA上，置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3d，采用十字交叉法測定菌落直徑，各處理取平均值計算菌絲生長抑制率，根據(jù)各藥劑濃度的對數(shù)值及對應(yīng)的菌絲生長抑制率的機率值作回歸分析，計算各藥劑的抑制中濃度 （EC50值）。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 使用DPS 7.05 軟件計算EC50值，并使用DPS 7.05 軟件的多元分析功能對EC50值和地區(qū)進行離差平方和系統(tǒng)聚類分析，比較不同地理來源菌株對4 種殺菌劑的敏感性水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 4 種殺菌劑對天津地區(qū)草莓鐮刀根腐病菌的室內(nèi)毒力測定 毒力是指藥劑本身對不同生物發(fā)生直接作用的性質(zhì)和程度，常用EC50值表示，EC50值越小表明藥劑對菌株的毒力越強、或菌株對殺菌劑越敏感[10]。咯菌腈除對菌株WQ1的EC50值最大外，對其它菌株的活性均較高，EC50值在0.020 5 ～5.920 8 μg/mL之間，其中WQ3 為最敏感菌株，最不敏感菌株WQ1 的EC50值是WQ3 的288.8 倍 （表1）。與最不敏感菌株WQ1 相比，毒力倍數(shù)高于 150 倍的菌株占55.6%，分 別 為 WQ2、WQ3、WQ4、WQ5 和JH2，毒力倍數(shù) 24 ～71 倍的菌株占 33.3%，分別 WQ6、WQ7 和 JH1。表明除 WQ1 各供試菌株對咯菌腈較敏感。

氟啶胺對 9 個菌株的 EC50值在0.055 7 ～0.556 0μg/mL之間，最不敏感菌株和最敏感菌株分別菌株 WQ4 和 WQ3，與最不敏感菌株WQ4 相比，各供試菌株的毒力倍數(shù)均＜10 倍，表明各供試菌株對氟啶胺較敏感。

多菌靈對 9 個菌株的 EC50值在0.064 3 ～4.192 6μg/mL之間，其中 WQ6 的 EC50值最大，其EC50值是最敏感菌株 WQ5 的65.2 倍，與最不敏感菌株 WQ6 相比，除菌株 WQ1、WQ4、WQ6、WQ7 的毒力倍數(shù)低于 4 倍外，其它菌株的毒力倍數(shù)均高于24 倍。表明各供試菌株對多菌靈的敏感性存在較大差異。

啶氧菌酯對9 個菌株的EC50值在3.862 3 ～151.273 9μg/mL之間，對啶氧菌酯敏感性較低的菌株 WQ2、WQ5 和 WQ6 的 EC50值均高于110μg/mL，最 敏 感 菌 株 JH1 的 EC50值 為3.862 3 μg/mL，其 毒 力 為 最 不 敏 感 菌 株 的39.2 倍。表明各供試菌株對啶氧菌酯的敏感性相對較低。

2.2 4 種殺菌劑對不同地理來源菌株毒力水平的系統(tǒng)聚類分析 系統(tǒng)聚類分析是研究事物分類問題的數(shù)量方法，通過距離的遠近與相似程度判斷個體之間是否有聚集現(xiàn)象，從而將研究對象分成不同類別，參照文獻[3]中的方法進行系統(tǒng)聚類分析?？┚鎸? 個菌株的EC50值由高到低可分為3 個聚類組，第1 個聚類組僅包括 1 個菌株 （WQ1），且 EC50值最大，第 2 個聚類組包括 5 個菌株 （WQ2、WQ3、WQ4、WQ5 和 JH2），第 3 個菌類組包括 3 個菌株（JH1、WQ6 和 WQ7） （表1、圖1）。除第1 個聚類組外，其它聚類組均包括不同菌株系列，WQ系列的7 個菌株出現(xiàn)在3 個聚類組中，JH菌株出現(xiàn)在第2 和第3 個聚類組中。表明草莓鐮刀根腐病菌對咯菌腈敏感性的地區(qū)性差異不明顯，但同一地區(qū)不同菌株間的敏感性差異較大。

氟啶胺對9 個菌株的EC50值由高到低可分為3 個聚類組，第 1 個聚類包括 5 個菌株（WQ1、WQ2、WQ3、WQ5 和 JH2），第 2 個聚類組包括3 個菌株 （WQ6、WQ7 和 JH1），第 3個菌類組僅包括1 個菌株 （WQ4）。WQ系列的7 個菌株出現(xiàn)在3 個聚類組中，JH系列的2 個菌株僅出現(xiàn)在第1 和第2 個聚類組中。表明草莓鐮刀根腐病菌對氟啶胺敏感性的地區(qū)性差異不明顯，但同一地區(qū)不同菌株間的敏感性差異較大。

多菌靈對9 個菌株的EC50值由高到低可分為3 個聚類組，第 1 個聚類組包括 3 個菌株（WQ7、WQ1 和 WQ4），第 2 個聚類組包括 5 個菌株 （JH1、JH2、WQ2、WQ3 和 WQ5），第 3個菌類組僅包括1 個菌株 （WQ6）。除第3 個聚類組外，其它聚類組均包括不同菌株系列，WQ系列的7 個菌株出現(xiàn)在3 個聚類組中，JH系列的2 個菌株僅出現(xiàn)在第2 個聚類組中。表明草莓鐮刀根腐病菌對多菌靈敏感性的地區(qū)性差異不明顯，但同一地區(qū)不同菌株間的敏感性差異較大。

啶氧菌酯對9 個菌株的EC50值由高到低可分為3 個聚類組，第1 個聚類包括 3 個菌株（WQ1、WQ3 和 JH2），第 2 個聚類組包括 3 個菌株 （WQ4、WQ7 和 JH1），第 3 個聚類組包括3 個菌株 （WQ2、WQ5 和 WQ6）。WQ系列的 7個菌株出現(xiàn)在3 個聚類組中，JH系列的2 個菌株僅出現(xiàn)在第1 和第2 個聚類組中。表明草莓鐮刀根腐病菌對啶氧菌酯敏感性的地區(qū)性差異不明顯，但同一地區(qū)不同菌株間的敏感性差異較大。

表1 4 種殺菌劑對草莓鐮刀根腐病菌的室內(nèi)毒力測定結(jié)果及聚類組編號

圖1 4 種殺菌劑對天津地區(qū)草莓鐮刀根腐病菌EC50值的系統(tǒng)聚類分析

3 結(jié)論與討論

目前天津地區(qū)主要草莓產(chǎn)區(qū)大多采用大棚種植，因棚內(nèi)溫度高、濕度大、連年種植，使草莓根腐病發(fā)生較重，而單一殺菌劑的長期使用易誘發(fā)抗藥性的產(chǎn)生，因此篩選高活性殺菌劑對科學(xué)、合理地指導(dǎo)草莓根腐病的防治具有重要的意義。本研究表明4 種供試殺菌劑對草莓鐮刀根腐病菌均具有抑制活性，其中氟啶胺、咯菌腈和多菌靈具有較高的毒力水平，而啶氧菌酯對供試草莓根腐病菌的毒力較差，建議進行田間藥效試驗進一步驗證藥劑在實際生產(chǎn)中的防治效果。

本研究結(jié)果顯示，不同殺菌劑對不同地理來源的草莓鐮刀根腐病菌的毒力水平存在差異，咯菌腈和氟啶胺對菌株WQ3 的毒力水平最高，咯菌腈對菌株WQ3 的毒力水平是其最不敏感菌株WQ1 的288.8 倍，氟啶胺對菌株WQ3 的毒力水平是其最不敏感菌株WQ4 的10.0 倍；多菌靈對菌株WQ5 的毒力水平最高，是其最不敏感菌株WQ5 的65.2 倍；啶氧菌酯對菌株 JH1 的毒力水平最高，是其最不敏感菌株WQ2 的39.2倍。姚玉榮等[11]的研究結(jié)果表明苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯和福美雙對天津漢沽地區(qū)和薊州地區(qū)草莓鐮刀根腐病菌 （Fusarium oxysporum） 的毒力水平存在差異。林才華等[3]研究戊唑醇、烯唑醇、苯醚甲環(huán)唑和腈菌唑?qū)ι綎|省不同地理來源的草莓枯萎病菌 （Fusarium oxysporum f.sp.fragariae） 的毒力水平差異，出現(xiàn)相似的結(jié)果。表明殺菌劑對菌株毒力水平的差異與自然界病原菌的生理差異及不同地理來源用藥情況有關(guān)，不同產(chǎn)區(qū)使用藥劑的種類和頻率不同，從而導(dǎo)致不同地區(qū)草莓鐮刀根腐病菌對不同殺菌劑的敏感性不同。本研究中所用殺菌劑均為廣譜殺菌劑，廣泛用于草莓病害的防治[12-16]，單一殺菌劑或者相同作用機制的殺菌劑長期頻繁使用造成菌株產(chǎn)生抗性[17-18]。在殺菌劑毒力水平下降的地區(qū)需要合理搭配或更換使用其他不同抑菌機制的藥劑，以延緩抗性。在殺菌劑毒力水平較高的地區(qū)仍可繼續(xù)使用該殺菌劑。建議在推廣使用前應(yīng)對該地區(qū)進行菌株敏感性監(jiān)測。