聚苯乙烯磺酸鑭Beagle犬體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究

鄭曉霞，程艷玲，何小華，劉 純

（山東省藥學(xué)科學(xué)院，山東 濟(jì)南 250101）

慢性腎功能衰竭（chronic renal failure，CRF）時(shí)，機(jī)體磷代謝發(fā)生紊亂，伴隨血磷升高出現(xiàn)繼發(fā)性甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)，維生素D代謝障礙，腎性骨病及心血管系統(tǒng)鈣化等并發(fā)癥，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。高血磷作為一種獨(dú)立的危險(xiǎn)因素對機(jī)體的損害越來越受到人們的重視[1]。聚苯乙烯磺酸鑭是一種新型非鈣磷酸鹽結(jié)合劑，可用于控制慢性腎衰竭患者的高磷血癥[2]。目前國內(nèi)對其臨床前藥動(dòng)學(xué)方面的研究甚少，本實(shí)驗(yàn)采用電感耦合等離子質(zhì)譜儀（ICP-MS）測定犬血漿中鑭的含量，研究犬口服聚苯乙烯磺酸鑭后體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征，為臨床合理應(yīng)用提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

XSERIES2型等離子體質(zhì)譜儀（Thermo公司）；TDL-5臺式低速大容量離心機(jī)（江蘇金壇市醫(yī)療儀器廠）；YB502型電子天平（上海?？惦娮觾x器廠）。

1.2 試藥

聚苯乙烯磺酸鑭（微黃色粉末，批號：20080304，由遼寧諾康生物制藥有限責(zé)任公司提供，貯藏：密閉保存）；聚苯乙烯磺酸鑭原料（含量：本品按干燥品計(jì)算含La為17.7%，批號：20080215，由遼寧諾康生物制藥有限責(zé)任公司提供，貯藏：密閉保存）；銠（由國家鋼鐵材料測試中心鋼鐵研究總院提供，編號：GSB-G-620379-90，濃度1 mg/ml）；硝酸（分析純，蘇州晶瑞，批號：8032090）；鹽酸（分析純，蘇州晶瑞，批號：8031455）；高氯酸（分析純，上海金鹿，批號：20071206）。

2 方法與結(jié)果

2.1 試驗(yàn)方法

18只Beagle犬隨機(jī)分為高、中、低劑量組，每組6只，雌雄各半。于早晨分別口服給予聚苯乙烯磺酸鑭1.5，0.75，0.375 g/kg，各組動(dòng)物于藥前及給藥后0.5，1，1.5，2，3，4，6，8，10，12，24 h自犬后肢靜脈取血約3.0 ml，置肝素化離心管中，3500 r/min離心10 min，分離血漿，于-20 ℃冷凍貯存待測。

2.2 檢測條件

采用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測。ICP功率1250 W，反射功率2 W，取樣錐孔徑1.0 mm，截取錐孔徑0.7 mm，模擬電壓1800 V，計(jì)算機(jī)電壓3000 V，冷卻氣13.0 L/min，輔助氣0.7 L/min，霧化氣0.93 L/min，采樣深度141，水平78，垂直443，內(nèi)標(biāo)元素銠（濃度5 μg/L）。

2.3 血漿樣品處理

在干凈坩堝中準(zhǔn)確加入待測血漿0.5 ml，加硝酸8 ml，在電熱板上120 ℃加熱2 h，放置過夜，加高氯酸2 ml，電熱板160 ℃加熱4 h，溫度升至260 ℃，加熱至白煙冒盡，加1+1王水4 ml，溶解殘?jiān)?，冷卻后加蒸餾水定容至25 ml，搖勻，進(jìn)樣測試。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線及定量下限

取空白犬血漿，分別加入聚苯乙烯磺酸鑭標(biāo)準(zhǔn)液配制濃度為5，10，50，100，250，500 μg/L的血漿樣品，按2.3項(xiàng)方法操作，以待測物電感耦合等離子體質(zhì)譜強(qiáng)度值（ICPS）為縱坐標(biāo)Y，待測物濃度為橫坐標(biāo)X，求得聚苯乙烯磺酸鑭中鑭元素的線性回歸方程為Y=22 656.699X-10 882.973，r=0.999 93，線性范圍為5～500 μg/L。定量下限RSD為5.86%。

2.5 精密度與準(zhǔn)確度

取空白犬血漿，配制低、中、高3個(gè)濃度（血漿濃度分別為10，250，500 μg/L）的聚苯乙烯磺酸鑭樣品，按2.3項(xiàng)方法操作，每一濃度進(jìn)行5樣本分析，連續(xù)配制測定3天，采用當(dāng)日所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算鑭濃度，根據(jù)結(jié)果計(jì)算分析方法的精密度與準(zhǔn)確度。結(jié)果日內(nèi)精密度RSD分別為2.34%，0.52%，0.65%；日間精密度RSD分別為2.01%，0.34%，0.02%。3個(gè)血漿藥物濃度的準(zhǔn)確度分別為95.78%，100.00%，97.66%。結(jié)果符合生物樣本分析方法要求。

2.6 血漿樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別考察了低、中、高3個(gè)濃度（血漿濃度分別為10，250，500 μg/L）的聚苯乙烯磺酸鑭樣本預(yù)處理后室溫放置24 h、反復(fù)凍融2次及長期冷凍條件下放置30 d的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，樣本處理后室溫放置24 h后，含量測定結(jié)果的準(zhǔn)確度為99.6%～111.35%；反復(fù)凍融2次的結(jié)果準(zhǔn)確度為99.78%～108.80%；長期冷凍條件下放置30 d的結(jié)果準(zhǔn)確度為100.05%～109.50%，具體結(jié)果見表1。以上結(jié)果符合生物樣本分析方法指導(dǎo)原則的有關(guān)規(guī)定，可用于藥動(dòng)學(xué)研究。

表1 不同處理方式下血漿樣品濃度/μg·L-1

2.7 提取回收率考察

取空白血漿，按2.3項(xiàng)方法操作，殘?jiān)尤刖郾揭蚁┗撬徼|標(biāo)準(zhǔn)液配成濃度分別為10，250，500μg/L的應(yīng)用液，直接進(jìn)樣，得應(yīng)用液ICPS值A(chǔ)0。取空白血漿，加入聚苯乙烯磺酸鑭標(biāo)準(zhǔn)液配制低、中、高3個(gè)濃度（聚苯乙烯磺酸鑭鑭濃度分別為10，250，500 μg/L）的樣品，按2.3項(xiàng)方法操作，每一濃度進(jìn)行5樣本分析，得提取后ICPS值A(chǔ)t。以At/A0×100計(jì)算提取回收率。3個(gè)血漿藥物濃度的回收率分別為102.59%，99.62%，97.59%。

2.8 藥動(dòng)學(xué)研究結(jié)果

Beagle犬灌胃給予聚苯乙烯磺酸鑭高、中、低劑量組的平均血漿藥物濃度-時(shí)間曲線見圖1，主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表2。

圖1 平均血漿藥物濃度-時(shí)間曲線

表2 聚苯乙烯磺酸鑭的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

Beagle犬分別灌胃給予聚苯乙烯磺酸鑭低、中、高3個(gè)劑量后，結(jié)果顯示鑭的Beagle犬體內(nèi)過程符合線性動(dòng)力學(xué)特征，AUC、Cmax均呈劑量相關(guān)性。劑量相關(guān)性評價(jià)數(shù)據(jù)見表3。

表3 主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)劑量相關(guān)性評價(jià)數(shù)據(jù)

3 討論

80%的腎透析患者患有高磷血癥[3]，因此嚴(yán)格控制飲食中的磷及調(diào)節(jié)合理的血磷濃度是減少心血管并發(fā)癥、提高患者生活質(zhì)量、降低病殘率和死亡率的關(guān)鍵。鑭系自然界的稀有元素之一，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明其三價(jià)陽離子化合物與磷有很強(qiáng)的親和力[4]。

聚苯乙烯磺酸鑭口服后通過與胃腸道內(nèi)的鉀離子發(fā)生離子交換反應(yīng)而結(jié)合鉀離子，釋放鑭離子，然后鑭離子與胃腸道內(nèi)的磷結(jié)合，形成水溶性小、不易通過生物膜的磷酸鑭分子，隨糞便排出體外，從而達(dá)到降低血磷、有效控制高磷酸鹽血癥的目的[5]。研究聚苯乙烯磺酸鑭在動(dòng)物體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征，可了解鑭離子在生物體內(nèi)的過程及動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，為藥物的給藥劑量與間隔時(shí)間提供依據(jù)，還可為臨床藥動(dòng)學(xué)提供參考，通過分析測定藥物在血液中的濃度來評價(jià)療效和確定給藥方案，使給藥方案個(gè)體化，以提高藥物治療水平，達(dá)到臨床安全、有效、合理用藥的目的。

本試驗(yàn)建立了ICP-MS測定犬血漿中鑭濃度的方法，以銠為內(nèi)標(biāo)，硝酸硝化后，加入高氯酸，高溫加熱處理后，加王水溶解殘?jiān)?，加蒸餾水定容后進(jìn)行檢測，分析方法符合生物樣品測定的有關(guān)規(guī)定。本檢測方法特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、操作快速簡便，已成功應(yīng)用于聚苯乙烯磺酸鑭散藥動(dòng)學(xué)研究。