福建柘榮不同品種太子參浸出物及多糖含量測定

,2 ,2*

1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122；2.福建省中醫(yī)藥研究院，福建 福州 350003

太子參為石竹科植物孩兒參Pseudostellariahaterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm.的干燥塊根，系福建道地藥材，福建柘榮縣譽(yù)為“中國太子參之鄉(xiāng)”。柘榮地區(qū)太子參常見品種為“柘參1號”和“柘參2號”，其中“柘參2號”的品質(zhì)較為穩(wěn)定、產(chǎn)量較高，當(dāng)?shù)胤N植面積達(dá)80%以上[1]。但由于太子參栽培過程長期采用塊根進(jìn)行無性繁殖、栽培品種較單一，致使太子參種質(zhì)退化、病害加劇，因此需要進(jìn)一步研究開發(fā)優(yōu)質(zhì)太子參品種。葉祖云等[2]應(yīng)用植物多倍體誘導(dǎo)技術(shù)，培育出新品種即“柘參3號”，通過了福建省農(nóng)作物品種認(rèn)定。多倍體通常能引起營養(yǎng)器官體積增大和次生代謝產(chǎn)物增多，且在培育過程中采用莖尖脫毒組培育苗技術(shù)，使得種苗更健康，因此“柘參3號”太子參在栽培過程中表現(xiàn)出塊根大、產(chǎn)量高、生長健壯等特點；但作為藥材，新品種“柘參3號”太子參的質(zhì)量，應(yīng)該從多方面進(jìn)行系統(tǒng)評價。本研究擬從多糖及浸出物含量兩個指標(biāo)，以“柘參2號”作對照，初步考察“柘參3號”太子參的質(zhì)量。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-3200紫外可見分光光度計 (配備UV-Vis Analyst 紫外可見分光光度計應(yīng)用系統(tǒng)，上海美譜達(dá)儀器有限公司)；AE240S電子分析天平(梅特勒-托利多有限公司)；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司)；DHG-9123A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)。

1.2 材料 “柘參2號”太子參，購自福建柘榮太子參種植基地；“柘參3號”太子參，由福建西岸生物科技有限公司和寧德市南嶺農(nóng)業(yè)有限公司提供，從中隨機(jī)各抽取15批次樣品測定其浸出物及多糖含量。

D-無水葡萄糖對照品(批號：110833-201506，中國食品藥品檢定研究院)；硫酸(分析純，批號：160123，西隴化工股份有限公司)；苯酚(批號：20161018)、無水乙醇(批號：20170424)購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 太子參水溶性浸出物測定 按照2015年版《中華人民共和國藥典》水溶性浸出物測定法項下的冷浸法進(jìn)行測定。準(zhǔn)確稱取太子參粉末4 g，每個批次平行3份，置于250 mL錐形瓶中，精密加水100 mL，密塞，冷浸，前6小時內(nèi)時時振搖，再靜置18小時，用干燥過濾器迅速濾過，精密量取續(xù)濾液20 mL，置于干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h；置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量，計算各批次太子參藥材中浸出物含量。

2.2 太子參中多糖含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取D-無水葡萄糖對照品0.01824 g，加蒸餾水溶解，定容至200 mL容量瓶中，配制成濃度為91.20 μg /mL的對照品溶液，作為母液。分別精密吸取母液1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，加水定容至5 mL，配制成濃度為18.24、27.36、36.48、54.72、72.96、91.20 μg /mL的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 稱取太子參(粉碎過3號篩)0.1000 g，精密稱定，置于索氏提取器中，加入85%乙醇100 mL，90 ℃水浴加熱1.5 h，棄去乙醇液，藥渣揮干乙醇。藥渣連同紙筒置于圓底燒瓶中，精確加入100 mL蒸餾水，稱重，水浴加熱回流提取2 h，放冷后加水補(bǔ)重，混勻，過濾。精確量取濾液20 mL置100 mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度線，即得供試品溶液。

2.2.3 線性關(guān)系考察 精密吸取各對照品溶液l mL，置10 mL具塞試管中，精密加入5%苯酚溶液1 mL，搖勻；再精密加硫酸5 mL，搖勻。置沸水浴中加熱20 min，取出，置冰浴中冷卻5 min。以1 mL水按同樣顯色操作為空白，分別在490 nm 波長處測定吸光度。以葡萄糖濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程，y=0.0089x+0.0195，r=0.9997，表明葡萄糖在18.24～91.20 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.4 精密度試驗 精密吸取供試品溶液1 mL，按“2.2.3項”下的方法操作，連續(xù)測定6次，吸光度RSD值為0.04% ，表明儀器精密度良好。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液1 mL，按“2.2.3項”下的方法操作，分別于0、30、60、90、120 min測定吸光度，吸光度RSD值為0.05%，表明在120 min內(nèi)樣品具有良好的穩(wěn)定性。

2.2.6 重復(fù)性試驗 稱取太子參(粉碎過3號篩)0.1 g，6份，精密稱定，按“2.2.3項”下方法制備樣品溶液，按“2.2.3項”下方法測定吸光度并計算多糖含量，結(jié)果太子參中多糖平均含量為34.39%，RSD為2.30%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.7 加樣回收試驗 精密稱取已知含量的太子參(粉碎過3號篩)0.0500 g，9份，精密稱定，分別加入葡萄糖對照品適量，使得高、中、低濃度對照品加入量與供試品中多糖含量之比約為0.5∶1、1∶1、1.5∶1各3份，按“2.2.2項”下方法制備樣品溶液，按“2.2.3項”下方法測定吸光度并計算回收率。多糖的平均加樣回收率為97.03%、101.13%、102.15%。

2.2.8 樣品多糖含量測定 分別稱取“柘參2號”與“柘參3號”太子參(粉碎過3號篩)0.1000 g，精密稱定，每個批次平行3份，按“2.2.2項”下方法制備樣品溶液，按“2.2.3項”下方法測定吸光度，計算各批次太子參藥材中多糖含量。

2.3 結(jié)果 “柘參2號”與“柘參3號”太子參水溶性浸出物及多糖含量測定結(jié)果由表1、表2可知，兩個品種太子參水溶性浸出物含量范圍在29.78%～45.83%之間，其中“柘參2號”太子參浸出物含量范圍主要在32%～36 %之間，“柘參3號”太子參浸出物含量范圍主要在38%～42%之間；兩個品種太子參多糖含量范圍在31.14%～41.48%之間，其中“柘參2號”太子參多糖含量范圍主要在31%～35 %之間，“柘參3號”太子參多糖含量范圍主要在35%～40%之間。

表1 “柘參2號”太子參水溶性浸出物及多糖含量統(tǒng)計表 (n=3)

續(xù)表1

表1 “柘參2號”太子參水溶性浸出物及多糖含量統(tǒng)計表 (n=3)

表2 “柘參3號” 太子參水溶性浸出物及多糖含量統(tǒng)計表 (n=3)

表3 “柘參2號”與“柘參3號”性浸出物、多糖含量比較

注：與“柘參2號”比較，*P<0.05,**P<0.01。

3 結(jié)論

浸出物可反映藥材中化學(xué)成分總體積累水平，2015年版《中華人民共和國藥典》要求太子參水溶性浸出物含量不得低于25%，其在太子參品質(zhì)檢測中作為一項重要的衡量標(biāo)準(zhǔn)[3]。本研究分別進(jìn)行“柘參2號”和“柘參3號”15批次太子參的水溶性浸出物測定，其含量均符合藥典要求?！拌蠀?號”太子參浸出物和多糖含量均顯著高于“柘參2號”，說明新品種“柘參3號”太子參在浸出物、多糖含量指標(biāo)方面優(yōu)于“柘參2號”。

多糖是太子參中一類重要的水溶性成分，也是太子參中重要的有效成分。國內(nèi)學(xué)者及本課題組研究表明，太子參多糖抗心肌缺血、增強(qiáng)人體免疫力，具有降低血糖、血脂、改善胰島素抵抗等作用[4-7]；已有較多學(xué)者研究太子參中多糖含量，以此作為太子參質(zhì)量評價的重要指標(biāo)之一[8-11]。研究通過對“柘參2號”與“柘參3號”太子參水溶性浸出物和多糖含量的測定，考察了“柘參2號”與“柘參3號”新品種太子參浸出物和多糖含量的差異性，“柘參3號”太子參在浸出物、多糖含量指標(biāo)方面優(yōu)于“柘參2號”。

綜上，本研究從多糖及浸出物含量兩個指標(biāo)，初步考察“柘參3號”太子參的質(zhì)量信息，為評價太子參新品種質(zhì)量提供一定的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)；為客觀反映新品種質(zhì)量，還應(yīng)從活性化學(xué)成分、藥效學(xué)等多方面進(jìn)行深入系統(tǒng)研究。