γ干擾素釋放試驗(yàn)對結(jié)核病診斷的應(yīng)用價值

(太原鋼鐵(集團(tuán))有限公司總醫(yī)院，山西 太原 030008)

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的慢性傳染性疾病，其嚴(yán)重危害人類健康。目前，中國結(jié)核病年發(fā)病人數(shù)約130萬，占全世界發(fā)病人口的14.3%，居世界第二位[1]。結(jié)核分枝桿菌的感染率很高。但是，當(dāng)人體免疫系統(tǒng)降低時，結(jié)核分枝桿菌會繁殖并引起臨床疾病。盡快檢測到結(jié)核分枝桿菌是預(yù)防和控制結(jié)核病傳播的重要方法。結(jié)核菌培養(yǎng)是實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)核分枝桿菌的金標(biāo)準(zhǔn)，但需數(shù)周時間；雖然TST( PPD) 可以較快地檢出，但常會發(fā)生假陽性和假陰性，這很難診斷和治療結(jié)核感染。已經(jīng)表明，基于T 細(xì)胞免疫的體外γ干擾素釋放測定法(TB-IGRA)在檢測結(jié)核分枝桿菌( MTB) 感染方面具有更好的特異性和敏感性[2，3]，在歐洲和美國已成為結(jié)核病常規(guī)臨床檢測方法[4]。本研究用國產(chǎn) TB- IGRA試劑盒用于臨床檢測結(jié)核分枝桿菌感染，與國外同類試劑( QFT- GIT)和結(jié)核菌素皮試( PPD)相比較，評價其臨床診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該研究的受試者為太原鋼鐵(集團(tuán))有限公司總醫(yī)院診斷為結(jié)核的住院患者272例，男196人，女76人，平均年齡55歲。肺結(jié)核253例，肺外結(jié)核19例。所有受試者都被排除在原發(fā)性免疫缺陷病，接受放化療和免疫抑制藥物治療的患者和糖尿病患者身上，避免免疫損傷導(dǎo)致的 IGRA假陰性。

1.2 儀器設(shè)備

BD(美國BD公司)肝素鋰5mL負(fù)壓采血管、移液器、37℃保溫箱、普通離心機(jī)、生物安全柜、洗板機(jī)、酶標(biāo)儀等。

1.3 試劑

TB-IGRA試劑盒購自北京萬泰生物科技有限公司;QFT-GIT檢測試劑盒購自澳大利亞Cellestis公司；PPD試劑購自成都生物制品研究所。

1.4 方法

TB-IGRA和QFT-GIT檢測均需采集研究對象的靜脈血，肝素鋰抗凝，然后嚴(yán)格按照兩種試劑的說明書進(jìn)行操作。

PPD皮膚試驗(yàn)采集血液后，所有受試者皮內(nèi)注射PPD 0.1 mL(5 IU)，由結(jié)核分枝桿菌檢測專業(yè)人員進(jìn)行。72 h后，測量反應(yīng)結(jié)果并用尺子測量硬化平均直徑并記錄。那些直徑≥5mm的紅腫樣腫塊或水皰的患者通過PPD皮膚試驗(yàn)判斷為陽性，而不符合上述條件則判斷為陰性。

比較3種方法的陽性檢出率。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料組間用%表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3種方法檢測結(jié)核病陽性檢出率比較

TB-IGRA和QFT-GIT結(jié)核病的檢測陽性檢出率相當(dāng)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.97，P>0.05)，兩種方法均優(yōu)于PPD皮試，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=29.47，P<0.05)。見表1。

表1 3種方法檢測結(jié)核病結(jié)果的陽性檢出率比較 例

2.2 3種方法檢測肺結(jié)核與肺外結(jié)核陽性檢出率比較

TB-IGRA、QFT-GIT和PPD 皮試對253例肺結(jié)核患者,陽性檢出率分別為91.70%(232/253)、88.93%(225/253)和75.89%(192/253)， TB-IGRA和QFT-GIT兩種方法對結(jié)核病診斷效果相同，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.95，P>0.05)，兩種方法優(yōu)于PPD皮試，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=29.11，P<0.05)；對19例肺外結(jié)核患者的陽性檢出率分別為84.21%(16/19)、84.21%(16/19)和73.68%(14/19)，3種方法比較對肺外結(jié)核的診斷效果相同，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.90，P>0.05)。

3 討論

常用的結(jié)核病診斷依賴于臨床癥狀、影像學(xué)特征和病原學(xué)診斷。迄今為止還沒有準(zhǔn)確、快速和可靠的結(jié)核分枝桿菌檢測方法[5,6]。被人體內(nèi)MTB抗原刺激時致敏的T細(xì)胞當(dāng)它們再次被同類抗原刺激時可產(chǎn)生特異性干擾素γ( IFN-γ) 。特異性升高的INF-γ的量可反映體內(nèi)結(jié)核特異性T 細(xì)胞應(yīng)答的強(qiáng)度，并間接判斷MTB 感染情況。結(jié)核分枝桿菌相關(guān)γ干擾素體外釋放試驗(yàn)是體外特異性T細(xì)胞免疫應(yīng)答檢測技術(shù)，與TST相比，無需回訪且結(jié)果判讀更為客觀。γ干擾素釋放試驗(yàn)的原理(IGRA)為：身體第一次感染結(jié)核菌后體內(nèi)會出現(xiàn)致敏的淋巴細(xì)胞，當(dāng)人體再次接觸結(jié)核桿菌抗原時，致敏的淋巴細(xì)胞迅速活化為效應(yīng)性淋巴細(xì)胞，高水平的細(xì)胞因子被釋放，其中最重要的為γ干擾素。因此γ干擾素的水平可以用作肺結(jié)核感染(包括肺外結(jié)核、潛伏性結(jié)核)的診斷指標(biāo)。目前，該方法的實(shí)驗(yàn)方式有兩種[7]：一個是酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法(ELISPOT)，另一種為酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。而ELISA法對設(shè)施條件要求較低，所以國內(nèi)ELISPOT使用較少。本次測試中使用的國產(chǎn)萬泰TB-IGRA試劑盒的測試原理與QFT-GIT 試劑盒(澳大利亞Cellestis)類似，對于新鮮外周血直接刺激培養(yǎng)，對實(shí)驗(yàn)室設(shè)備沒有特殊要求。另外，選擇用于兩種試劑ESAT-6、CFP-10 的抗原對于致病性MTB而言是獨(dú)特的，而卡介苗沒有的片段[8]，它可以更好地區(qū)分真正的結(jié)核感染并排除由卡介苗接種等方法引起的干擾。

本研究結(jié)果顯示TB-IGRA和QFT—GIT的結(jié)核和肺外結(jié)核的檢出率無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，表現(xiàn)出的高敏感性，不僅對肺結(jié)核敏感性高91.70%，對肺外結(jié)核的敏感性也有84.21%。另外，TB-IGRA試劑成本更低，操作簡單、快速，可在26 h內(nèi)出檢測結(jié)果，為早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療提供重要幫助，以降低結(jié)核病的風(fēng)險，是各級醫(yī)院非常有效的輔助診斷方法。