雪櫻子粗多糖提取、純化工藝及抗氧化活性研究

姚宏亮，孔聰聰，顏玉華

(金陵科技學(xué)院 食品科學(xué)系， 江蘇 南京 210038)

雪櫻子(AmaranthuscaudatusL．)為莧科莧屬一年生草本植物，學(xué)名為尾穗莧，別名老槍谷、仙人谷，其作為藥食兩用的植物在我國(guó)一些地區(qū)的地方藥物志中已有記載[1]。近年來(lái)，因具有消腫止痛、抗腫瘤、抗?jié)僛2-4]等功效而常用作保健蔬菜，逐漸被人們認(rèn)識(shí)和青睞。

雪櫻子作為一種藥食價(jià)值較高的植物資源，國(guó)外相關(guān)學(xué)者已經(jīng)對(duì)其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、功能及活性開展了一定的研究。如Nascimento等[5]對(duì)阿根廷北部的雪櫻子進(jìn)行了微量元素的分析，Lamothe等[6]研究發(fā)現(xiàn)雪櫻子膳食纖維富含果膠和木糖，Jo等[7]研究了尾穗莧單寧提取物的自由基清除能力。Kumar等[8]研究了尾穗莧甲醇提取物對(duì)撲熱息痛致大鼠肝損傷有恢復(fù)作用。Plate等[9]研究發(fā)現(xiàn)雪櫻子有助于血膽固醇過(guò)多的兔子降低低密度脂蛋白及總膽固醇，Kabiri等[10]研究發(fā)現(xiàn)雪櫻子水醇提取物對(duì)高膽固醇血癥家兔有抗脂肪條紋形成的作用。

相比國(guó)外而言，國(guó)內(nèi)對(duì)雪櫻子功能成分及功效的研究還較少。近年來(lái)，植物多糖作為一種功能物質(zhì)因具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、降血脂、抗病毒等多種活性功能[11-12]而成為研究熱點(diǎn)。但國(guó)內(nèi)關(guān)于雪櫻子多糖的提取及功效方面的研究尚未見報(bào)道。文章以雪櫻子為原料，運(yùn)用水提醇沉法提取粗多糖，對(duì)提取和純化工藝進(jìn)行了優(yōu)化，并對(duì)粗多糖的體外抗氧化活性進(jìn)行研究。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

雪櫻子，南京繼紅農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限公司；HPD600型、D101型、AB- 8型大孔吸附樹脂，上海源葉生物科技有限公司；所用其他試劑均為市售分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

Alpha- 1106型可見光分光光度計(jì)，上海譜元儀器有限公司；DDL- 5M型低速冷凍離心機(jī)，上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司；TG16K- Ⅱ型高速離心機(jī)，長(zhǎng)沙東旺實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；EV351型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，萊伯泰科有限公司；MX- RL- Pro LCD型旋轉(zhuǎn)混勻儀，大龍興創(chuàng)(北京)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1雪櫻子粗多糖提取工藝優(yōu)化

1.3.1.1 原料處理

將新鮮雪櫻子清洗干凈，沸水漂燙30 s后用流水冷卻瀝干，在60 ℃恒溫干燥箱中干燥8 h，隨后粉碎，密封保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.1.2 粗多糖的測(cè)定方法及標(biāo)準(zhǔn)曲線建立

參照文獻(xiàn)[13-14]，采用苯酚- 硫酸法測(cè)定粗多糖，配制不同質(zhì)量濃度葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，吸光度(Y)與質(zhì)量濃度(X)的線性方程為：Y=15.998X-0.002(R2=0.998)，質(zhì)量濃度范圍：0.008～0.036 mg/mL。

1.3.1.3 雪櫻子粗多糖提取

參照文獻(xiàn)[15]并進(jìn)行適當(dāng)修改，采用水提醇沉法進(jìn)行粗多糖的提取。稱取一定量準(zhǔn)備好的原料加入純水于一定溫度條件下浸提，抽濾取濾液，隨后在濾液中加入乙醇進(jìn)行醇沉靜置處理12 h，將靜置液離心(4 000 r/min，4 ℃, 10 min)棄去上清液，得到雪櫻子粗多糖提取物固體。

1.3.1.4 雪櫻子粗多糖得率計(jì)算

將粗多糖提取物加純水定容至25 mL，測(cè)定吸光度，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算粗多糖得率，見式(1)。

ω(粗多糖)=ρ(粗多糖)×V/m(樣品)。

(1)

式(1)中，ω(粗多糖)為粗多糖得率，mg/g；ρ(粗多糖)，mg/mL；V，25 mL；m(樣品)，g。

1.3.1.5 提取工藝單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

分別研究了水提過(guò)程中料液比、提取溫度、提取時(shí)間以及醇沉過(guò)程中乙醇濃度對(duì)雪櫻子粗多糖提取率的影響。以料液比(g/mL)1∶25、水提溫度80 ℃、提取時(shí)間4 h作為水提工藝參數(shù)，比較不同濃度的乙醇對(duì)醇沉過(guò)程的影響；固定水提溫度為80 ℃、提取時(shí)間為4 h、分析不同料液比對(duì)提取率的影響；固定水提過(guò)程料液比(g/mL)為1∶25，提取時(shí)間為4 h，分析不同溫度對(duì)提取率的影響；固定水提過(guò)程料液比(g/mL)為1∶25，提取溫度為90 ℃，分析不同提取時(shí)間對(duì)提取率的影響。

1.3.1.6 提取工藝正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定醇沉過(guò)程乙醇的優(yōu)化濃度，在正交試驗(yàn)中只分析水提過(guò)程中料液比(A)、提取溫度(B)、提取時(shí)間(C)3種因素對(duì)雪櫻子粗多糖得率的影響，每個(gè)因素分為3個(gè)水平，建立三因素三水平正交試驗(yàn)，因素水平表見表1。

表1 粗多糖提取工藝正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.2雪櫻子粗多糖純化工藝優(yōu)化

1.3.2.1 大孔吸附樹脂的篩選

將AB- 8型樹脂浸泡在3～5 g/mL氫氧化鈉溶液中24 h，用3倍于樹脂體積的同質(zhì)量濃度的氫氧化鈉溶液沖洗抽濾，再將樹脂用純凈水沖洗至中性，用2～3倍樹脂體積的體積分?jǐn)?shù)95%乙醇洗柱，最后用純水洗去乙醇，備用。

將HPD600型及D101型樹脂在高于樹脂層10 cm的95%乙醇溶液中浸泡4 h，去除浸泡液，用純水沖洗樹脂直到?jīng)_洗液在試管中用水稀釋后不會(huì)變渾濁以及沖洗液紫外光譜掃描無(wú)吸收峰為止。再用水洗滌至無(wú)醇味，備用。

將1.3.1.3節(jié)得到的雪櫻子粗多糖固形物配制成0.1 mg/mL左右的雪櫻子多糖水溶液，取該溶液30 mL、處理好的大孔吸附樹脂2 g于50 mL離心管中，置于旋轉(zhuǎn)混勻儀上吸附12 h后進(jìn)行抽濾，將濾液定容測(cè)定多糖質(zhì)量濃度。將抽濾后的樹脂置于干燥的50 mL離心管中，加入25%乙醇溶液30 mL，放入旋轉(zhuǎn)混勻儀上解吸12 h, 抽濾后將濾液定容測(cè)定多糖質(zhì)量濃度。計(jì)算不同樹脂的吸附量、吸附率、解吸率、回收率[16]，篩選出效果最佳的大孔吸附樹脂，計(jì)算見式(2)～式(5)。

(2)

(3)

(4)

R=AD。

(5)

式(2)～式(5)中：Q，吸附量，mg/g；ρ0，上樣液質(zhì)量濃度，mg/mL；ρ1，吸附液質(zhì)量濃度，mg/mL；V，多糖樣液體積，mL；m，樹脂質(zhì)量，g；A，吸附率，%；D，解吸率，%；ρ2，解吸液質(zhì)量濃度，mg/mL；R，回收率，%。

1.3.2.2 純化工藝單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

固定上樣液pH值4，吸附速率2 BV/h，乙醇洗脫劑體積分?jǐn)?shù)25%，洗脫速率2 BV/h，進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附和解吸實(shí)驗(yàn)，分析上樣液質(zhì)量濃度對(duì)純化效果的影響；固定上樣液質(zhì)量濃度為0.9 mg/mL，吸附速率2 BV/h，乙醇洗脫劑體積分?jǐn)?shù)25%，洗脫速率2 BV/h，進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附和解吸實(shí)驗(yàn), 分析上樣液pH值對(duì)純化效果的影響；固定上樣液質(zhì)量濃度為0.9 mg/mL，上樣液pH值4，乙醇洗脫劑體積分?jǐn)?shù)25%，洗脫速率2 BV/h，進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附和解吸實(shí)驗(yàn), 分析吸附速率對(duì)純化效果的影響；固定上樣液質(zhì)量濃度為0.9 mg/mL，上樣液pH值4，吸附速率2 BV/h，洗脫速率2 BV/h，分析洗脫時(shí)乙醇濃度對(duì)純化效果的影響；固定上樣液質(zhì)量濃度為0.9 mg/mL，吸附液pH值4，吸附速率2 BV/h，乙醇洗脫劑體積分?jǐn)?shù)25%，分析洗脫速率對(duì)純化效果的影響。

1.3.2.3 純化工藝正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)單因素分析的結(jié)果，確定上樣液質(zhì)量濃度、上樣液pH值、乙醇洗脫劑體積分?jǐn)?shù)作為正交試驗(yàn)的3個(gè)因素，采用三因素三水平正交試驗(yàn)。因素水平表見表2。

表2 粗多糖純化工藝正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.3雪櫻子粗多糖體外抗氧化活性測(cè)定

1.3.3.1 羥自由基清除能力測(cè)定

采用Fenton體系·OH清除法，參照文獻(xiàn)[17]并適當(dāng)改動(dòng)：取0.2 mol/L pH值7.4磷酸鹽緩沖溶液1 mL、0.52 mg/mL番紅溶液0.2 mL，0.2 mol/L EDTA二鈉溶液0.5 mL, 0.2 mol/L FeSO4溶液0.5 mL，不同質(zhì)量濃度的樣品溶液(維生素C或粗多糖溶液)7 mL、超純水0.8 mL，混勻，然后在40 ℃水浴加熱30 min，測(cè)定520 nm處吸光度，記為A參比；用體積分?jǐn)?shù)0.3%雙氧水溶液代替上述操作中的超純水，重復(fù)操作，測(cè)定520 nm處吸光度，記為A樣液；用超純水代替A樣液操作中的樣品溶液，測(cè)定520 nm處吸光值，記為A羥基；用超純水代替A參比操作中的番紅溶液及樣品溶液，測(cè)定520 nm處吸光值，記為A空白。羥自由基清除率計(jì)算見式(6)。

(6)

1.3.3.2 超氧陰離子自由基清除能力測(cè)定

采用鄰苯三酚自氧化法，參照文獻(xiàn)[18]并適當(dāng)改動(dòng)：取4支試管，分別標(biāo)注為1、2、3、4號(hào)。在1、2號(hào)管里分別加入超純水1 mL，50 mmol/L pH值8.2 Tris- HCL緩沖液3 mL，在3號(hào)管里加入100 mmol/L HCl 1 mL，在4號(hào)管里加入5 mmol/L鄰苯三酚1 mL。將4支管放入25 ℃水浴鍋里保溫10 min，然后將3號(hào)管中溶液倒入1號(hào)管里，4號(hào)管中溶液倒入2號(hào)管里，迅速混勻，在325 nm處測(cè)5 min內(nèi)吸光度A0的變化。根據(jù)A0繪圖得到鄰苯三酚自氧化速率K0。按照上述步驟將1、2號(hào)管里的超純水替換成不同質(zhì)量濃度的樣品溶液(維生素C或粗多糖溶液)。放入25 ℃水浴鍋里保溫10 min后迅速混勻。測(cè)5 min內(nèi)吸光度A1的變化。根據(jù)A1繪圖得到分光光度值變化速率K1。超氧陰離子自由基清除率計(jì)算見式(7)。

(7)

1.3.3.3 DPPH自由基清除能力測(cè)定

參照文獻(xiàn)[19]并適當(dāng)改動(dòng)：取3支比色管分別標(biāo)為管1、管2、管3，管1中加入1 mL 0.2 mmol/L DPPH- 乙醇溶液及3 mL無(wú)水乙醇；管2中加入1 mL 0.2 mmol/L DPPH- 乙醇溶液及3 mL樣品溶液(維生素C或雪櫻子粗多糖溶液)；管3中加入1 mL無(wú)水乙醇溶液及3 mL樣品溶液(維生素C或雪櫻子粗多糖溶液)在暗處?kù)o置30 min，用分光光度計(jì)在517 nm 處測(cè)其吸光度，分別記為A0，AX，AX0。用4 mL無(wú)水乙醇作為空白對(duì)照。DPPH自由基清除率計(jì)算見式(8)。

(8)

1.3.4數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)采取3次平行，結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，采用IBM SPSS Statistics 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用Adobe Illustrator 軟件繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 雪櫻子粗多糖提取工藝優(yōu)化結(jié)果

2.1.1雪櫻子粗多糖提取工藝單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取時(shí)間、提取溫度對(duì)提取效果的影響見圖1。

由圖1(a)可以看出，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加，粗多糖得率上升，并在80%時(shí)達(dá)到最大，乙醇體積分?jǐn)?shù)繼續(xù)增加，粗多糖得率下降；這可能是由于乙醇濃度過(guò)高對(duì)粗多糖產(chǎn)生了一定的破壞作用。因此確定醇沉過(guò)程乙醇體積分?jǐn)?shù)為80%。

不同小寫字母代表差異顯著。圖1 提取條件對(duì)粗多糖得率的影響Fig.1 Effect of extraction condition on yield of crude polysaccharide

由圖1(b)可以看出, 粗多糖得率隨料液比下降而提高，當(dāng)液料比(g/mL)達(dá)到1∶25時(shí)，粗多糖得率達(dá)到最大值，繼續(xù)降低料液比則粗多糖得率降低；這可能是提取過(guò)程中增加提取液的比例可以在一定程度上促進(jìn)物料與提取液充分接觸，從而提高提取效率，當(dāng)溶劑達(dá)到一定的量后形成飽和，繼續(xù)增加提取劑的體積則可能會(huì)在加熱提取過(guò)程中造成多糖損失，同時(shí)增加能耗，加大后續(xù)多糖溶液濃縮的能耗和回收難度。因此選擇料液比(g/mL)為1∶20、1∶25、1∶30作為后續(xù)正交試驗(yàn)料液比水平。

由圖1(c)可以看出，隨著溫度的不斷升高，粗多糖得率逐漸升高，這可能是溫度的升高促進(jìn)分子運(yùn)動(dòng)，加速了多糖的浸出。當(dāng)溫度達(dá)到95 ℃時(shí)粗多糖得率最高，而且粗多糖得率呈現(xiàn)隨著溫度上升而繼續(xù)升高的趨勢(shì)，考慮到實(shí)驗(yàn)溫度條件如果繼續(xù)上升，將會(huì)造成提取體系的沸騰繼而引發(fā)提取劑的大量揮發(fā)，并對(duì)實(shí)驗(yàn)條件提出更高的要求。因此選擇80、90、95 ℃作為后續(xù)正交試驗(yàn)溫度水平。

由圖1(d)可以看出，當(dāng)提取時(shí)間不斷增加時(shí)，粗多糖得率也在逐步增大，當(dāng)提取時(shí)間達(dá)到5 h時(shí)，粗多糖得率達(dá)到最大值，如果再繼續(xù)增大提取時(shí)間則粗多糖得率趨于穩(wěn)定。即使延長(zhǎng)提取時(shí)間至24 h，粗多糖得率提高程度也不明顯。因此，選擇4、5、6 h作為提取時(shí)間的因素水平。

2.1.2雪櫻子粗多糖提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

水提過(guò)程是影響水提醇沉法粗多糖得率的主要步驟，以單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)，選擇料液比(A)、提取溫度(B)、提取時(shí)間(C)作為正交試驗(yàn)因素，以粗多糖得率為指標(biāo)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果見表3。

表3 雪櫻子粗多糖水提正交試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，各因素對(duì)粗多糖提取效果的影響由大到小依次為提取溫度、提取時(shí)間、料液比。利用IBM SPSS 方差分析表明提取溫度對(duì)雪櫻子粗多糖得率影響極顯著(P<0.01)，提取時(shí)間對(duì)雪櫻子粗多糖得率影響顯著(P<0.05)，提取料液比對(duì)雪櫻子粗多糖得率影響不顯著(P>0.05)。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)得出優(yōu)化工藝條件為：料液比(g/mL)1∶30、提取溫度95 ℃、提取時(shí)間6 h。按照上述步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，平行3次，所得結(jié)果與A1B3C3結(jié)果用SPSS 22.0進(jìn)行差異性分析。結(jié)果顯示差異不顯著(P>0.05)。考慮能源消耗、資源節(jié)約以及經(jīng)濟(jì)成本等影響因素，最終確定優(yōu)化工藝條件為A1B3C3，即料液比(g/mL)1∶20，提取溫度95 ℃，提取時(shí)間6 h，此條件下雪櫻子多糖得率為(1.421±0.081) mg/g。

2.2 雪櫻子粗多糖純化工藝優(yōu)化結(jié)果

2.2.1大孔吸附樹脂的確定

AB- 8型非極性樹脂的靜態(tài)吸附率達(dá)到40.52%±0.67%，高于HPD600型及D101型，AB- 8型的靜態(tài)解吸率達(dá)到80.94%±0.93%，高于D101型，雖低于HPD600型，但與之差異不顯著，AB- 8型回收率高于其他2種樹脂(見圖2)。因此選擇AB- 8型大孔吸附樹脂。

圖2 不同樹脂對(duì)雪櫻子粗多糖的純化效果Fig.2 Effect of different resin on purification of crude polysaccharide from Amaranthus caudatus L.

不同小寫字母代表差異顯著。圖3 純化條件對(duì)粗多糖純化效果的影響Fig.3 Effect of purification conditions on crude polysaccharide purification

2.2.2雪櫻子粗多糖純化工藝單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

雪櫻子粗多糖純化工藝單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3。由圖3(a)可以看出，吸附率隨著上樣液質(zhì)量濃度的增大而提高，當(dāng)上樣液質(zhì)量濃度達(dá)到0.89 mg/mL時(shí)，吸附率達(dá)到66%左右，此時(shí)吸附率最大，樹脂對(duì)多糖的吸附達(dá)到飽和狀態(tài)；若上樣液質(zhì)量濃度繼續(xù)增加，吸附率反而會(huì)降低。這很可能是因?yàn)闃渲侥芰τ邢蓿矣衅渌s質(zhì)對(duì)樹脂吸附多糖造成干擾。從圖3(b)中可以得出，隨著pH值的升高，吸附率增加，當(dāng)pH值為4時(shí)，吸附率最大，而繼續(xù)升高pH值，吸附率反而降低，這可能是因?yàn)槎嗵墙Y(jié)構(gòu)受到破壞。從圖3(c)中可以得出，隨著吸附流速的增大，吸附率逐漸降低。這可能是因?yàn)?，吸附時(shí)間越長(zhǎng)，大孔樹脂和上樣液接觸的時(shí)間越長(zhǎng)，吸附效果越好；反之，大孔樹脂和上樣液接觸的時(shí)間過(guò)短則導(dǎo)致多糖不能被充分吸附，但是若吸附速率過(guò)慢，則作業(yè)周期長(zhǎng)，且樹脂再生能力差[16]。因此綜合考慮，選擇適宜的吸附速率2 BV/h。從圖3(d)可以看出，解吸率隨著乙醇洗脫劑體積分?jǐn)?shù)的增加而增加；當(dāng)乙醇洗脫劑體積分?jǐn)?shù)為25%時(shí)，解吸率為65%左右，此時(shí)解吸率達(dá)到最大；后來(lái)解吸率隨著乙醇洗脫劑體積分?jǐn)?shù)的增加而減少，這可能是因?yàn)橐掖俭w積分?jǐn)?shù)過(guò)大，會(huì)破壞多糖結(jié)構(gòu)。從圖3(e)可以看出，解吸率隨著洗脫流速的增加而降低。這可能是因?yàn)?，流速過(guò)快使得乙醇與多糖不能充分接觸，不能有效地將多糖從樹脂上洗脫下來(lái)，流速慢則純化需要的作業(yè)周期長(zhǎng)，綜合考慮流速選擇2 BV/h。

根據(jù)上述結(jié)果，固定吸附流速、洗脫流速均為2 BV/h，確定以回收率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，以上樣液質(zhì)量濃度0.67、0.89、1.00 mg/mL，上樣液pH值3、4、5，乙醇洗脫劑體積分?jǐn)?shù)15%、25%、35%，作為下一步工藝優(yōu)化的正交試驗(yàn)水平。

2.2.3雪櫻子粗多糖純化工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：各因素對(duì)粗多糖純化回收率的影響由大到小依次為pH值、乙醇洗脫劑體積分?jǐn)?shù)、上樣液質(zhì)量濃度。利用IBM SPSS 22.0數(shù)據(jù)分析結(jié)果表明，pH值、乙醇洗脫劑濃度對(duì)雪櫻子粗多糖純化回收率影響極顯著(P<0.01)，上樣液質(zhì)量濃度對(duì)雪櫻子粗多糖純化回收率影響顯著(P<0.05)。正交試驗(yàn)得出優(yōu)化工藝條件為：吸附流速、洗脫流速均2 BV/h，上樣液質(zhì)量濃度1.00 mg/mL，上樣液pH值5，乙醇洗脫劑體積分?jǐn)?shù)25%，即A3B3C2。此條件下回收率為44.99%±1.23%。

表4 雪櫻子粗多糖純化正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖4 雪櫻子粗多糖體外抗氧化能力測(cè)定結(jié)果 Fig.4 Antioxidant properties detection in vitro of crude polysaccharide from Amaranthus caudatus L.

2.3雪櫻子粗多糖體外抗氧化活性測(cè)定結(jié)果

將得到的雪櫻子粗多糖按比例稀釋進(jìn)行體外抗氧化能力檢測(cè)，并與維生素C的抗氧化能力進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果如圖4。

由圖4(a)可知，隨著雪櫻子多糖質(zhì)量濃度的增加，其對(duì)羥自由基的清除率增大，達(dá)到0.16 mg/mL后清除率趨于平穩(wěn)， 0.02～0.20 mg/mL的雪櫻子多糖對(duì)羥自由基的清除率在49.58%～92.20%，經(jīng)過(guò)回歸分析計(jì)算，其IC50為0.019 mg/mL。相比之下，0.2 mg/mL的維生素C對(duì)·OH清除率只有22.86%，顯然，雪櫻子粗多糖對(duì)羥自由基的清除能力優(yōu)于維生素C。

由圖4(b)可知，隨著雪櫻子多糖質(zhì)量濃度逐漸增加，其對(duì)超氧陰離子自由基的清除率逐漸增大，達(dá)到0.08 mg/mL后清除率趨于穩(wěn)定，0.01～0.10mg/mL的多糖對(duì)超氧陰離子的清除率在48.74%～90.88%，經(jīng)過(guò)回歸分析計(jì)算，其IC50為0.014 mg/mL。相比之下，雪櫻子粗多糖對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力弱于維生素C。

由圖4(c)可知，隨著雪櫻子多糖質(zhì)量濃度逐漸增加，其對(duì)DPPH自由基的清除率逐漸增大， 達(dá)到0.04 mg/mL后清除率趨于穩(wěn)定， 0.005～0.08 mg/mL的多糖對(duì)DPPH· 的清除率在29.58%～80.28%，經(jīng)過(guò)回歸分析計(jì)算，其IC50為0.013 mg/mL。相比之下，雪櫻子粗多糖對(duì)DPPH·的清除能力明顯優(yōu)于維生素C。

通過(guò)上述比較可知，雪櫻子粗多糖具有較好的抗氧化活性，且隨著質(zhì)量濃度增大活性增強(qiáng)，對(duì)羥自由基、DPPH自由基的清除能力優(yōu)于維生素C。

3 結(jié) 論

對(duì)雪櫻子粗多糖的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，得到優(yōu)化工藝條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)80%、料液比(g/mL)1∶20、提取溫度95 ℃、提取時(shí)間6 h，此條件下粗多糖得率為(1.421±0.081) mg/g。分析了幾種樹脂對(duì)雪櫻子粗多糖的純化效果，對(duì)雪櫻子粗多糖純化工藝進(jìn)行了優(yōu)化，雪櫻子多糖優(yōu)化純化工藝條件為：采用AB- 8型吸附樹脂，上樣液質(zhì)量濃度1.00 mg/mL，上樣液pH值5，吸附速率2 BV/h，乙醇洗脫劑體積分?jǐn)?shù)25%，洗脫速率2 BV/h，此條件下回收率達(dá)到44.99%±1.23%。采用羥自由基清除率、超氧陰離子自由基清除率、DPPH自由基清除率為體外抗氧化活性檢測(cè)指標(biāo)，其IC50分別為0.019、0.014、0.013 mg/mL。并將其抗氧化能力與維生素C相比較，證實(shí)了雪櫻子粗多糖具有良好的自由基清除能力。