三氯吡氧乙酸原藥高效液相色譜分析方法的研究

李 婷，唐麗霖，徐茂業(yè)，許艷秋，吳春先

(四川省農(nóng)藥檢定所，四川 成都 610041)

三氯吡氧乙酸ISO通用名稱為triclopyr，CAS號為55335-06-3，分子式為C7H4Cl3NO3，化學名稱為(3,5,6-三氯-2-吡啶基氧乙酸)，其結(jié)構式見圖1。三氯吡氧乙酸屬內(nèi)吸傳導型選擇性除草劑，由植物的葉面和根系吸收，并在植物體內(nèi)傳導到全株，造成其根、莖、葉畸形，儲藏物質(zhì)耗盡，維管束被栓塞或破裂，植株逐漸死亡。禾本科作物對它具有耐藥性。適用于森林造林前除草滅灌，維護防火線，扶育松樹及林分改造，用于非耕地防除闊葉雜草和木本植物，還可用于禾本科作物如小麥、玉米、燕麥、高粱等田地防除闊葉雜草[1]。

圖1 三氯吡氧乙酸的分子結(jié)構圖

經(jīng)文獻檢索，國內(nèi)還沒有關于三氯吡氧乙酸分析方法研究的相關報道，只有固相萃取-高效液相色譜法測定地表水中三氯吡氧乙酸殘留量的研究[2]。本文建立了一種高效液相色譜法對三氯吡氧乙酸原藥進行定量分析，實驗結(jié)果表明該方法操作簡便、快速、準確，可以為企業(yè)生產(chǎn)過程質(zhì)量控制和質(zhì)檢機構質(zhì)量檢測提供參考。

1 試驗部分

1.1 試劑和溶液

乙腈：色譜純；水：蒸餾水；磷酸：分析純；三氯吡氧乙酸標樣：已知質(zhì)量分數(shù)≥99.0%；三氯吡氧乙酸原藥，由利爾化學股份有限公司提供。

1.2 儀器

高效液相色譜儀：Waters 2695，具有二極管陣列檢測器(2996)和自動進樣器；Empower I色譜工作站；C8液相色譜柱：250mm×4.6mm(i.d.)不銹鋼柱，內(nèi)裝ZORBAXSB-C8、5μm填充物；過濾器：濾膜孔徑約0.45μm。

1.3 液相色譜操作條件

流動相：乙腈：水(0.2%磷酸)=60∶40(V/V)；流速：0.8mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：290nm；進樣體積：5μL；保留時間：三氯吡氧乙酸約6.06min。

上述液相色譜操作條件，系典型操作參數(shù)，可根據(jù)不同儀器特點，對給定的操作參數(shù)作適當調(diào)整，以期獲得最佳效果。典型的三氯吡氧乙酸標樣和原藥的高效液相色譜圖分別見圖2和圖3。

圖2 三氯吡氧乙酸標樣高效液相色譜圖

圖3 三氯吡氧乙酸原藥高效液相色譜圖

1.4 測定步驟

1.4.1 標樣溶液的配制 稱取三氯吡氧乙酸標樣0.05g(精確至0.0002g)，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，超聲10min，冷卻至室溫，待用。

1.4.2 試樣溶液的配制 稱取含三氯吡氧乙酸0.05g左右的試樣(精確至0.0002g)，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，超聲10min，冷卻至室溫，過濾后待測。

1.4.3 測定 在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，直至相鄰2針標樣溶液的響應值相對變化<1.5%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.4.4 計算 將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標樣溶液中三氯吡氧乙酸峰面積分別進行平均。試樣中三氯吡氧乙酸的質(zhì)量分數(shù)ω(%)，按式(1)計算：

式中：A標-標樣溶液中三氯吡氧乙酸峰面積的平均值；

A樣-試樣溶液中三氯吡氧乙酸峰面積的平均值；

m標-標樣的質(zhì)量，g；

m樣-試樣的質(zhì)量，g；

P標-標樣中三氯吡氧乙酸的質(zhì)量分數(shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

通過Waters二極管陣列檢測器2996的光譜數(shù)據(jù)采集功能,獲得三氯吡氧乙酸在190～400nm的紫外波長掃描圖(圖4)。從圖中可以看到三氯吡氧乙酸的最大吸收波長在232.4nm附近，次吸收波長為295.1nm，但232.4nm波長下干擾比較明顯，而三氯吡氧乙酸在295.1nm處左右也有較大吸收，在290nm下幾乎無干擾，因此將檢測波長定為290nm。

圖4 三氯吡氧乙酸紫外吸收光譜圖

2.2 流動相的選擇

色譜柱選擇常用的反相填料ZORBAX SB-C8不銹鋼柱。依據(jù)三氯吡氧乙酸的理化性質(zhì),選擇乙腈體系作為溶劑溶解樣品。流動相的選擇則根據(jù)三氯吡氧乙酸的特點，對乙腈和水按不同比例，在色譜柱上進行選擇比較。為了得到更好的分離效果，更好的峰型，同時考慮到三氯吡氧乙酸在弱酸性條件下的穩(wěn)定性，選擇使用磷酸調(diào)節(jié)水的pH值。經(jīng)測定，選擇乙腈：水(0.2%磷酸)=60∶40(V/V)為流動相，當流速為0.8mL/min時，有效成分與雜質(zhì)能得到很好的分離，峰形對稱，基線平穩(wěn)，并且分析時間適中。

2.3 線性相關性試驗

分析方法的線性相關性試驗將2.4.1中配制的標樣溶液在上述色譜操作條件下進行分析,進樣量分別為1、2、5、8、10和12μL，以三氯吡氧乙酸質(zhì)量(μg)為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線(見圖5)，得線性方程為y=2E+06x+413823，其線性相關系數(shù)R2為0.9992。

圖5 三氯吡氧乙酸高效液相色譜標準曲線

2.4 精密度試驗

從同一原藥產(chǎn)品中準確稱取6份試樣，在上述色譜操作條件下進行分析，測得三氯吡氧乙酸的標準偏差為0.50，變異系數(shù)為0.51%(表1)。

表1 三氯吡氧乙酸精密度試驗結(jié)果

2.5 準確度試驗

稱取5份一定量的試樣，分別準確加入一定體積的2.4.1中配制的標樣溶液，在上述色譜操作條件下進行分析，測得三氯吡氧乙酸的平均回收率為99.86%(表2)。

3 結(jié)論

本文通過對高效液相色譜分析條件的選擇與優(yōu)化，建立了三氯吡氧乙酸原藥的高效液相色譜分析方法。試驗結(jié)果表明，本方法的準確度和精密度較高，線性關系良好，具有簡便、快速、準確及分離效果好的優(yōu)點，是三氯吡氧乙酸原藥的一種可行的分析方法。

表2 三氯吡氧乙酸準確度試驗結(jié)果