重組禽流感病毒H5+H7二價(jià)滅活疫苗免疫效果評(píng)估

李劍鋒 龍鳳 黃麗非

摘要：對(duì)崇左市2017年10月至2018年9月家禽實(shí)施免疫重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1亞型 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）的免疫效果進(jìn)行了評(píng)估，旨在為崇左市家禽禽流感防控決策提供參考。結(jié)果表明，H5亞型禽流感免疫抗體合格率為90.35%，H7亞型禽流感免疫抗體合格率為84.94%，禽流感病毒核酸均為陰性。H5+H7免疫抗體水平較高，抗體合格的血清中，H5平均效價(jià)為8.33log2，H7平均效價(jià)為7.41log2，疫苗安全穩(wěn)定，可有效抵抗當(dāng)前禽流感流行毒株的侵襲。

關(guān)鍵詞：重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗；免疫；抗體效價(jià)；效果評(píng)估

中圖分類號(hào)：S851.35 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007-273X（2019）02-0010-02

禽流感（Avian influenza，AI）是由A型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）引起禽類的一種從呼吸系統(tǒng)到嚴(yán)重全身敗血癥等多種癥狀的傳染性疾病。禽流感病毒屬于RNA病毒的正黏病毒科流感病毒屬，其最顯著的生物學(xué)特性是亞型眾多，變異頻繁[1]。2017年2月起，全國多地有發(fā)生人感染H7N9流感的病例，嚴(yán)重危害了公共衛(wèi)生安全和養(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展。為進(jìn)一步做好高致病性禽流感防控工作，保障養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)安全和公共衛(wèi)生安全，農(nóng)業(yè)部決定從2017年秋季開始，在家禽免疫H5亞型禽流感的基礎(chǔ)上，對(duì)全國家禽全面開展H7N9免疫[2]。本試驗(yàn)對(duì)崇左市2017年10月至2018年9月家禽實(shí)施免疫重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1亞型 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）的免疫效果進(jìn)行了評(píng)估，旨在為崇左市家禽禽流感防控決策提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及儀器

禽流感病毒H5、H7亞型抗原和陽性血清為哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司產(chǎn)品，所用試劑嚴(yán)格按照規(guī)定保存，試劑均在有效期內(nèi)；0.01 mol/L pH7.2的PBS液；1% SPF雞紅血球懸液；微量移液器；梯度PCR儀；電泳儀；凝膠成像系統(tǒng)。

1.2 方法

參照GB/T 18936-2003高致病性禽流感診斷技術(shù)-血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗(yàn)；NY/T 772-2013禽流感病毒RT-PCR檢測技術(shù)。

1.3 樣品采集

樣品均采集自重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗免疫后21 d以上的家禽養(yǎng)殖場（戶），從2017年10月至2018年9月，在崇左市7個(gè)縣（市、區(qū)）的家家禽養(yǎng)殖場（戶）隨機(jī)采集雞血清共計(jì)1 202份，用于檢測禽流感H5、H7亞型抗體，另外采集相對(duì)應(yīng)的家禽咽喉/泄殖腔棉拭子，用于檢測禽流感病毒。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn)

按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T 18936-2003），實(shí)施重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗免疫的家禽，HI抗體效價(jià)≥4 log2為免疫合格。按照NY/T 772-2013禽流感病毒RT-PCR檢測技術(shù)，電泳結(jié)果出現(xiàn)相應(yīng)擴(kuò)展條帶判為亞型禽流感病毒核酸陽性，否則判為亞型禽流感病毒核酸陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 家禽血清、病原檢測結(jié)果

共調(diào)查采集38個(gè)商品化規(guī)模場和52戶散養(yǎng)戶，家禽存欄共464 540羽，其中：商品化規(guī)模場存欄460 294羽，散養(yǎng)戶存欄4 246羽；樣品涵蓋崇左市7個(gè)縣（市、區(qū)）重點(diǎn)家禽養(yǎng)殖區(qū)域及邊境區(qū)域。共采集家禽血清及相對(duì)應(yīng)的咽喉/泄殖腔棉拭子各1 202份，結(jié)果見表1。由表1可見，禽流感病原學(xué)共檢測1 202份咽喉/泄殖腔棉拭子樣品，檢測結(jié)果全為禽流感病毒核酸陰性；檢測家禽血清共1 202份，H5亞型抗體合格數(shù)1 086份，免疫抗體合格率為90.35%；H7亞型抗體合格數(shù)1 021份，免疫抗體合格率為84.94%。

2.2 不同群體家禽H5+H7免疫抗體檢測結(jié)果

本次調(diào)查共采集38個(gè)商品化規(guī)模禽場和52戶散養(yǎng)戶，家禽血清分別為817份、385份。H5免疫抗體檢測結(jié)果：商品化規(guī)模場合格血清696份，合格率為85.19%，群體合格率為89.47%（34/38）；散養(yǎng)戶合格血清384份，合格率為99.74%，群體合格率為98.08%（51/52）。H7免疫抗體檢測結(jié)果：商品場合格血清640份，合格率為78.34%，群體合格率為84.21%（32/38）；散養(yǎng)戶合格血清381份，合格率為98.96%，群體合格率為98.08%（51/52）（表2）。結(jié)果表明，抽檢家禽血清抗體合格率均達(dá)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求（70%），其中H5亞型免疫效果較H7亞型要好。

2.3 血清抗體效價(jià)情況

分別統(tǒng)計(jì)商品化規(guī)模場和散養(yǎng)戶的家禽血清HI效價(jià) ，計(jì)算HI效價(jià)≥4 log2的血清樣品效價(jià)平均值，結(jié)果顯示，商品場H5抗體平均效價(jià)為8.24 log2，H7抗體平均效價(jià)為7.25 log2，H5抗體平均效價(jià)比H7抗體平均效價(jià)高近1 log2。散養(yǎng)戶H5抗體平均效價(jià)為8.64 log2，H7抗體平均效價(jià)為7.68 log2，H5抗體平均效價(jià)比H7抗體平均效價(jià)高0.96 log2（表3）。結(jié)果表明，重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗產(chǎn)生的免疫應(yīng)答較好，商品化規(guī)模場和散養(yǎng)戶家禽血清抗體平均滴度均高于7 log2，具有較好防御當(dāng)前流行禽流感H5、H7亞型毒株的能力。

3 小結(jié)與建議

崇左市2017年10月至2018年9月實(shí)施免疫重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1亞型 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）的免疫效果抽查結(jié)果表明，所檢家禽沒有受到高致病性禽流感野毒感染，重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗使用安全穩(wěn)定，抗體水平較高，免疫應(yīng)答效果較好，家禽的抗體平均效價(jià)高，說明崇左市內(nèi)家禽具有很好的抵御當(dāng)前禽流感流行毒株感染的能力。建議防疫部門繼續(xù)抓好禽流感疫苗免疫工作，同時(shí)做好抗體和禽流感病原監(jiān)測工作，及時(shí)了解家禽抗體基本情況和病原流行情況。

抽查發(fā)現(xiàn)有個(gè)別規(guī)模養(yǎng)殖場家禽血清抗體抽檢不合格，有個(gè)別養(yǎng)殖場抗體合格數(shù)為0，說明商品化規(guī)模場家禽禽流感免疫工作存在不規(guī)范的問題，工作存在漏打、假打現(xiàn)象，免疫責(zé)任落實(shí)不到位等。建議各地動(dòng)物疫病防控機(jī)構(gòu)定期開展動(dòng)物防疫人員學(xué)習(xí)培訓(xùn)，提高技能，樹立責(zé)任意識(shí)，認(rèn)真做好動(dòng)物免疫工作，尤其是每年的春、秋兩季重大動(dòng)物疫病免疫工作，同時(shí)要不定期開展免疫抗體監(jiān)測以及病原學(xué)監(jiān)測工作，查漏補(bǔ)缺，確切地使動(dòng)物防疫工作不留死角。

參考文獻(xiàn)：

[1] SAIF Y M.禽病學(xué)（第十二版）[M].蘇敬良，高 福，索 勛譯.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2012.

[2] 農(nóng)業(yè)部.農(nóng)業(yè)部關(guān)于切實(shí)做好全國高致病性禽流感秋季免疫工作的通知（農(nóng)醫(yī)發(fā)[2017]24號(hào)）[EB/OL].http：//www.moa.gov.cn/govpublic/SYJ/201707/t20170711_5744436.htm，2017-07-07.