益腎化痰法對(duì)乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者血液PTHrP、FGF-β、BSP水平的影響及作用機(jī)制分析

王俊濤，尹怡，李曉婷，馬征，馬金玉，郅中怡，楊明明，楊冠森，王祥麒

(河南中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院 腫瘤科一病區(qū)，河南 鄭州 450000)

乳腺癌成為威脅女性生命健康的惡性腫瘤之一，乳腺癌細(xì)胞喪失正常細(xì)胞的特征，細(xì)胞間的連接較為松散，極易脫落而借助淋巴液或血液轉(zhuǎn)移，形成轉(zhuǎn)移灶，對(duì)患者生命威脅較大[1]。骨轉(zhuǎn)移為乳腺癌常見(jiàn)的轉(zhuǎn)移類型，中醫(yī)認(rèn)為乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的發(fā)生與患者患病日久，正氣不足，腎經(jīng)耗損，骨髓空虛，邪毒借此侵入骨體而發(fā)病，故臨床治療應(yīng)以補(bǔ)腎益氣散結(jié)為主。益腎化痰法以補(bǔ)助正氣，充養(yǎng)腎精，散結(jié)，化痰，消瘀為主要功效，與乳腺癌骨轉(zhuǎn)移之病因病機(jī)相對(duì)應(yīng)[2]。筆者在我院乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者中應(yīng)用益腎化痰方，發(fā)現(xiàn)該方法應(yīng)用后患者的血液PTHrP、FGF-β、BSP水平得到改善，現(xiàn)將本次研究報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

以河南中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院收治的乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者90例為研究對(duì)象，年齡范圍(36～65)歲，平均年齡(48.31±10.14)歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)：依照中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌專業(yè)委員會(huì)制定的[3]《中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范(2017年版)》中乳腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)為標(biāo)準(zhǔn)，行X平片、CT、MRI、PET或骨穿刺活檢等手段診斷骨轉(zhuǎn)移。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者符合乳腺癌骨轉(zhuǎn)移診斷標(biāo)準(zhǔn)；患者未使用研究治療方案外藥物；患者無(wú)過(guò)敏與嚴(yán)重不良反應(yīng)；患者不存在心功能衰竭、腎功能衰竭、肝功能不全等情況。剔除標(biāo)準(zhǔn)：患者隨意使用藥物；患者出現(xiàn)嚴(yán)重過(guò)敏與不良反應(yīng)被迫終止干預(yù)。

1.2 分組與干預(yù)方法

1.2.1 分組方法

將2014年12月—2017年12月收治的乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者90例為研究對(duì)象，采取數(shù)字表隨機(jī)分組法分為觀察組與對(duì)照組各45例，對(duì)照組實(shí)施常規(guī)乳腺癌骨轉(zhuǎn)移治療方法，觀察組以對(duì)照組為基礎(chǔ)使用益腎化痰方。其中觀察組年齡范圍(36～64)歲，平均年齡(50.07±11.01)歲;疾病分期：III期18例，IV期25例;手術(shù)類型：全乳房切除術(shù)34例,保乳手術(shù)11例。觀察組年齡范圍(36～64)歲，平均年齡(50.13±10.99)歲;疾病分期：III期19例，IV期24例;手術(shù)類型：全乳房切除術(shù)33例，保乳手術(shù)12例。兩組一般資料無(wú)明顯差異，P>0.05，具有對(duì)比價(jià)值。

1.2.2 治療方法

兩組均在影像學(xué)檢查結(jié)果引導(dǎo)下行乳腺癌手術(shù)，對(duì)照組采取常規(guī)乳腺癌術(shù)后治療方法：放射性療法、化學(xué)療法、內(nèi)分泌療法、生物靶向治療聯(lián)合或單獨(dú)療法，骨轉(zhuǎn)移使用唑來(lái)膦酸、雙膦酸鹽等骨轉(zhuǎn)移對(duì)抗藥物，癌痛嚴(yán)重者依據(jù)情況選擇輔佐劑、非麻醉性止痛藥與麻醉性止痛藥[4]。放化療期間出現(xiàn)胃腸道不良反應(yīng)者使用奧美拉唑、碳酸氫鈉、六君子湯等胃動(dòng)力與胃黏膜保護(hù)類藥物。

觀察組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上使用益腎化痰法，自擬益腎化痰方進(jìn)行治療：益腎化痰方：熟地黃30 g,杜仲15 g,懷牛膝15 g,桑寄生9 g,白芍15 g,山慈菇12 g,白芥子15 g,生牡蠣30 g,浙貝母15 g,皂角刺12 g,片姜黃15 g,蘇木12 g。將生藥用5倍體積量水浸泡2 h,煮沸30 min,過(guò)濾分離藥液及藥渣,藥渣再加入3倍體積量水煎煮20 min,過(guò)濾后留藥液，合并兩次藥液共500 mL左右。250 mL/次，2次/d，于早上9點(diǎn)與晚上9點(diǎn)按時(shí)服用。

兩組均以2周為1療程，干預(yù)4療程后進(jìn)行治療效果評(píng)估。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

1.3.1 甲狀旁腺相關(guān)肽(PTHrP)表達(dá)檢測(cè)

采用常規(guī)ABC法進(jìn)行PTHrP的免疫組織化學(xué)染色[5]。PTHrP的陽(yáng)性細(xì)胞染色為棕黃或棕褐色,定位于胞質(zhì),連續(xù)計(jì)數(shù)>10個(gè)高倍視野,每個(gè)高倍視野計(jì)數(shù)100個(gè)腺上皮細(xì)胞,計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞的平均百分率，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<25%為陰性,25%～80%為弱陽(yáng)性(+),>80%為強(qiáng)陽(yáng)性(++)。

1.3.2 纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF-β)檢測(cè)

FGF-β染色[6]陽(yáng)性者在細(xì)胞漿有棕黃色顆粒沉著, 部分細(xì)胞同時(shí)存在核染色。為精確判斷蛋白的表達(dá)程度及減少假陽(yáng)性率, 制定免疫組化半定量標(biāo)準(zhǔn): 每張切片隨機(jī)觀察10個(gè)高倍視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)癌細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞漿的著色程度及著色細(xì)胞的百分率進(jìn)行評(píng)分并計(jì)算陽(yáng)性系數(shù):基本不著色者為0分,著色淡者為1分,著色適中者為2分,著色深者為3分。著色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞百分率≤5%為0分,6%～25%為1分,26%～50%為2分,≥51%為3分。將每張切片著色程度得分與著色細(xì)胞百分率得分各自相乘,即為陽(yáng)性系數(shù)。陽(yáng)性系數(shù)0、1分為陰性(-),2、3分為弱陽(yáng)性(+),4～6分為陽(yáng)性(++)，7～9分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

1.3.3 骨唾液酸蛋白(BSP)檢測(cè)

參照文獻(xiàn)[7],采用免疫組織化學(xué)染色對(duì)組織標(biāo)本處理: 固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片。在光學(xué)顯微鏡下觀察，根據(jù)棕色反應(yīng)的陽(yáng)性強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)判斷結(jié)果。BSP每張切片觀察5個(gè)高倍視野，陽(yáng)性細(xì)胞染色為胞漿棕黃或棕褐色，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞比例。陽(yáng)性細(xì)胞比例=陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)/總細(xì)胞個(gè)數(shù)×100.00%。

1.3.4 不良反應(yīng)

觀察兩組惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、皮疹、感染、放射性皮炎等不良反應(yīng)發(fā)生情況，記錄例數(shù)，計(jì)算發(fā)生率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS19.0版本統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行研究數(shù)據(jù)分析，以t值檢驗(yàn)各組計(jì)量資料，χ2檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料以，a=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)方面意義。

2 結(jié)果

2.1 干預(yù)前后兩組患者PTHrP細(xì)胞陽(yáng)性率對(duì)比

結(jié)果顯示，干預(yù)前兩組的PTHrP細(xì)胞陽(yáng)性率無(wú)明顯差異，P>0.05，干預(yù)后兩組患者陽(yáng)性率均降低，但觀察組陽(yáng)性率(69.42±3.12)%低于對(duì)照組(77.53±4.01)%，兩組相比P<0.05，詳見(jiàn)表1。

表1 干預(yù)前后兩組患者PTHrP細(xì)胞陽(yáng)性率對(duì)比(%)

2.2 干預(yù)前后兩組患者FGF-β細(xì)胞陽(yáng)性指數(shù)對(duì)比

結(jié)果顯示，干預(yù)前兩組患者的FGF-β細(xì)胞陽(yáng)性指數(shù)無(wú)明顯差異，P>0.05，干預(yù)后兩組的細(xì)胞陽(yáng)性指數(shù)均下降，但觀察組的陽(yáng)性指數(shù)(5.02±0.94)分低于對(duì)照組(6.80±0.82)分，兩組相比P<0.05，詳見(jiàn)表2。

表2 干預(yù)前后兩組患者FGF-β細(xì)胞陽(yáng)性指數(shù)對(duì)比(分)

2.3 兩組干預(yù)前后BSP細(xì)胞陽(yáng)性率對(duì)比

結(jié)果顯示，干預(yù)前兩組的BSP細(xì)胞陽(yáng)性率無(wú)明顯差異，P>0.05，干預(yù)后兩組患者陽(yáng)性率均降低，但觀察組陽(yáng)性率(61.31±6.45)%低于對(duì)照組(70.40±6.10)%，兩組相比P<0.05，詳見(jiàn)表3。

表3 兩組干預(yù)前后BSP細(xì)胞陽(yáng)性率對(duì)比(%)

2.4 兩組不良反應(yīng)情況對(duì)比

結(jié)果顯示，觀察組患者的治療不良反應(yīng)發(fā)生率低于對(duì)照組(28.98% VS 53.33%)，兩組相比P<0.05，詳見(jiàn)表4。

表4 兩組不良反應(yīng)情況對(duì)比

3 討論

乳腺癌骨轉(zhuǎn)移為常見(jiàn)乳腺癌轉(zhuǎn)移類型，當(dāng)骨轉(zhuǎn)移發(fā)生時(shí)患者須承受巨大疼痛，臨床一般使用唑來(lái)膦酸、骨硬化蛋白抗體等骨轉(zhuǎn)移對(duì)抗藥物聯(lián)合常規(guī)乳腺癌療法方式治療[8-10]，近些年有學(xué)者提出中藥在骨轉(zhuǎn)移中的治療價(jià)值，方穎等在其研究[11]中提出補(bǔ)腎活血湯聯(lián)合唑來(lái)膦酸可促進(jìn)乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者骨質(zhì)恢復(fù)并降低骨性疼痛。筆者在我院乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者常規(guī)治療基礎(chǔ)上使用益腎化痰方，效果滿意。

中醫(yī)理論中認(rèn)為腎主骨生髓，當(dāng)骨骼出現(xiàn)改變時(shí)多為患者腎臟功能異常，而乳腺癌患者發(fā)病日久損耗正氣，進(jìn)而腎臟功能受到影響，腎氣不足則骨髓空虛，為骨轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件。而益腎化痰方以熟地黃與杜仲為君藥，起到滋陰補(bǔ)血、填精益髓、補(bǔ)肝腎強(qiáng)筋骨的功效，桑寄生、懷牛膝與白芍為臣藥輔助君藥發(fā)揮強(qiáng)肝腎止痛之功，山慈菇、白芥子散結(jié)化痰，生牡蠣軟堅(jiān)聯(lián)合浙貝母、皂角刺兩味佐藥共奏化痰消積之功，片姜黃活血止痛，蘇木引經(jīng)為使藥。各藥合用可奏補(bǔ)益腎精、充盈骨髓、驅(qū)邪外出之效。西醫(yī)認(rèn)為骨轉(zhuǎn)移與血液PTHrP、FGF-β、BSP水平密切相關(guān)，方藥中熟地黃可促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖與分化；杜仲總黃酮可優(yōu)化骨細(xì)胞增殖能力，優(yōu)化細(xì)胞抗氧化能力；懷牛膝甾體與皂苷成分可優(yōu)化血清堿性磷酸酶、血清骨鈣素及Ca2+水平,降低血清P水平，優(yōu)化血液黏度并對(duì)抗炎癥反應(yīng)；白芍總苷可起到鎮(zhèn)痛作用；浙貝母中有效成分如貝母甲素、貝母乙素、貝母辛具有逆轉(zhuǎn)錄腫瘤細(xì)胞作用；皂角刺提取物可改善人體IL-2、IL-6、IL-12、TNF-α的表達(dá)水平，強(qiáng)化機(jī)體免疫力。

結(jié)果顯示，干預(yù)前兩組的PTHrP細(xì)胞陽(yáng)性率無(wú)明顯差異，P>0.05，干預(yù)后兩組患者陽(yáng)性率均降低，但觀察組陽(yáng)性率(69.42±3.12)%低于對(duì)照組(77.53±4.01)%，兩組相比P<0.05；干預(yù)前兩組患者的FGF-β細(xì)胞陽(yáng)性指數(shù)無(wú)明顯差異，P>0.05，干預(yù)后兩組的細(xì)胞陽(yáng)性指數(shù)均下降，但觀察組的陽(yáng)性指數(shù)(5.02±0.94)分低于對(duì)照組(6.80±0.82)分，兩組相比P<0.05；干預(yù)前兩組的BSP細(xì)胞陽(yáng)性率無(wú)明顯差異，P>0.05，干預(yù)后兩組患者陽(yáng)性率均降低，但觀察組陽(yáng)性率(61.31±6.45)%低于對(duì)照組(70.40±6.10)%，兩組相比P<0.05；觀察組患者的治療不良反應(yīng)發(fā)生率低于對(duì)照組(28.98% VS 53.33%)，兩組相比P<0.05。

綜上所述，乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用益腎化痰方能夠有效改善患者的血液PTHrP、FGF-β、BSP水平，對(duì)抗骨轉(zhuǎn)移癥狀，并降低不良反應(yīng)發(fā)生率，其機(jī)制與益腎化痰方改善腎虛骨髓空虛及藥物有效成份可抑制骨破壞增加骨形成、對(duì)抗腫瘤細(xì)胞增殖并改善免疫功能有關(guān)。