DNA及RNA甲基化檢測(cè)在腫瘤診斷中的研究進(jìn)展

趙 琦，相綠竹，彭 瑞，王 曄 綜述,牟曉峰△ 審校

(1.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)部，山東青島 266021；2.青島市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東青島 266042)

基因甲基化是表觀遺傳學(xué)中的一個(gè)重要組成部分，是在不改變基因組核苷酸序列的情況下，將有活性的甲基化合物在相關(guān)轉(zhuǎn)移酶的催化下結(jié)合到其他化合物上的過(guò)程。目前已發(fā)現(xiàn)的基因甲基化形式主要有DNA甲基化、RNA甲基化以及組蛋白甲基化，在多種生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，包括基因的表達(dá)、干細(xì)胞的自我更新和分化、組織發(fā)育、RNA的穩(wěn)定性等等。本文將從基因甲基化的概念、在腫瘤中的作用機(jī)制、檢測(cè)方法等方面做一綜述，為后續(xù)研究提供理論基礎(chǔ)。

1 甲基化的概念

1.1DNA甲基化 DNA甲基化是DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT)介導(dǎo)的一種化學(xué)修飾過(guò)程，在DNMT催化下，通過(guò)S-腺苷甲硫氨酸(SAM)提供甲基，將甲基轉(zhuǎn)移到相應(yīng)堿基上。在哺乳動(dòng)物中，DNA甲基化主要發(fā)生在CpG島5′端胞嘧啶上，生成為5′甲基胞嘧啶[1]。CpG島為富含G、C堿基的DNA區(qū)域，主要位于基因的啟動(dòng)子。人類(lèi)的CpG以2種形式存在，一種分散于DNA中，另一種是CpG結(jié)構(gòu)高度聚集的CpG島。在正常組織中，前者多被甲基化修飾，而后者常以非甲基化狀態(tài)存在于啟動(dòng)子區(qū)[2]，大約有60%的人類(lèi)基因存在于啟動(dòng)子區(qū)的CpG島。在高等真核生物中已發(fā)現(xiàn)的DNMTs有：DNMT1、DNMT2、DNMT3a、DNMT3b、DNMT3L[3]。DNMT1是一種維持甲基化的甲基化轉(zhuǎn)移酶，它能識(shí)別DNA復(fù)制時(shí)生成的“半甲基化DNA”，即其親代鏈已經(jīng)甲基化，進(jìn)一步促進(jìn)子鏈形成新的甲基化CpG二核苷酸；DNMT3a和DNMT3b則主要在胚胎形成時(shí)期促進(jìn)新的甲基化形成[4]。

1.2RNA甲基化 RNA甲基化一般是指m6A基因的甲基化。即堿基A第6位N原子上增加一個(gè)甲基。m6A主要存在于mRNA的CDS區(qū)(蛋白質(zhì)編碼區(qū))和3′UTR區(qū)，影響信使RNA(mRNA)的穩(wěn)定性、翻譯效率、可變剪接和定位等，在后轉(zhuǎn)錄層面參與真核基因的表達(dá)調(diào)控[2]。

RNA甲基化在體內(nèi)受到3種效應(yīng)蛋白的調(diào)控，“書(shū)寫(xiě)器”、“消除器”和“閱讀器”[2]?！皶?shū)寫(xiě)器”是指m6A甲基化轉(zhuǎn)移酶，介導(dǎo)RNA的甲基化修飾過(guò)程，主要指METTL3-METTL14復(fù)合物[5-6]，兩者可在體外和體內(nèi)催化mRNA(和其他細(xì)胞核RNA)的m6A甲基化；另一種常見(jiàn)轉(zhuǎn)移酶是腎母細(xì)胞瘤1結(jié)合蛋白(WTAP)[7]；“消除器”是指去甲基化酶，介導(dǎo)RNA的去甲基化修飾過(guò)程，主要包括FTO[8]和ALKBH5[9]。“閱讀器”主要包括YTHDF1、YTHDF2、YTHDF3[10]，可識(shí)別RNA甲基化修飾的信息，并參與下游RNA的翻譯、降解等過(guò)程。比如，YTHDC1可與mRNA上的m6A結(jié)合，將mRNA轉(zhuǎn)運(yùn)出核。YTHDF1/YTHDF3識(shí)別m6A后可促進(jìn)mRNA的翻譯，而YTHDF2與m6A的結(jié)合則會(huì)促進(jìn)mRNA的降解。

2 甲基化與腫瘤

2.1異常DNA甲基化與腫瘤發(fā)生的關(guān)系 在腫瘤細(xì)胞中，常常有正常DNA甲基化模式異常改變，常表現(xiàn)為全基因組廣泛低甲基化及抑癌基因CpG島區(qū)域高甲基化；除此之外，基因錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)的失活、微小RNA(miRNA)表達(dá)缺失等均和DNA甲基化有著千絲萬(wàn)縷的聯(lián)系。

2.1.1抑癌基因CpG島區(qū)域高甲基化 正常情況下，抑癌基因的CpG島為非甲基化狀態(tài)；而在某些腫瘤中抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島區(qū)域發(fā)生高甲基化，抑制了其轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，使抑癌基因失活，導(dǎo)致腫瘤的產(chǎn)生。吳亮等[11]發(fā)現(xiàn)抑癌基因DACH1啟動(dòng)子甲基化程度與食管鱗癌分化程度成反比，提示DACH1啟動(dòng)子甲基化有很大可能促進(jìn)食管癌的發(fā)生、發(fā)展。

2.1.2癌基因組的廣泛低甲基化 腫瘤細(xì)胞中常見(jiàn)全基因組的低甲基化會(huì)導(dǎo)致基因的突變率增加，特異基因尤其是啟動(dòng)子區(qū)域的低甲基化則會(huì)激活癌基因，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移[12]。

2.1.3基因錯(cuò)配修復(fù)與DNA甲基化 DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)(MMR)能夠修復(fù)幾乎所有堿基的錯(cuò)配，最大程度避免基因突變。而有研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)MMR缺陷時(shí)，CpG島會(huì)出現(xiàn)較強(qiáng)的甲基化[13]，堿基錯(cuò)配將不能被修復(fù)，因此造成的基因突變也是腫瘤發(fā)生的機(jī)制之一。

2.1.4CpG甲基化促進(jìn)腫瘤相關(guān)基因突變 研究證明，甲基化的CpG島基因突變的頻率遠(yuǎn)高于正常水平。比如在結(jié)腸癌患者的p53基因中，55%左右的突變發(fā)生在CpG位點(diǎn)上，其中94%是C→T的突變，甲基化的CpG突變?yōu)門(mén)pG，經(jīng)過(guò)DNA復(fù)制，最終從C∶G轉(zhuǎn)換為T(mén)∶A，導(dǎo)致遺傳信息的改變，最終可導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[14]。

2.1.5DNMT與腫瘤 作為DNA甲基化的催化酶，DNMT基因在異常甲基化中起著不可替代的作用。腫瘤細(xì)胞中某些部位基因的高甲基化往往預(yù)示著DNMT表達(dá)的增加，相反，DNMT表達(dá)的異常增加也可能導(dǎo)致部分基因尤其是抑癌基因的異常高甲基化，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的產(chǎn)生。RAJNEESH等[15]發(fā)現(xiàn)，與乳腺干細(xì)胞相比，DNMT1在腫瘤干細(xì)胞中表達(dá)增加，而DNMT1基因的功能缺失則通過(guò)阻斷腫瘤干細(xì)胞的形成來(lái)保護(hù)小鼠免受乳腺腫瘤的影響。方欽亮等[16]采用免疫組織學(xué)技術(shù)檢測(cè)了89例手術(shù)切除肝癌組織與癌旁組織中DNMT1和DNMT3b的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)肝癌組織中DNMT1和DNMT3b普遍存在過(guò)表達(dá)，且顯著高于癌旁組織，提示了這2種甲基化轉(zhuǎn)移酶與肝癌的發(fā)生和進(jìn)展可能存在密切的關(guān)系。KIM等[17]對(duì)102例非小細(xì)胞肺癌進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DNMT1和DNMT3b mRNA表達(dá)提高，同時(shí)檢出相關(guān)抑癌基因高甲基化。

2.1.6微小RNA(miRNA)編碼DNA甲基化與腫瘤 miRNA通過(guò)降解目標(biāo)mRNA或抑制其翻譯從而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞生物學(xué)功能的調(diào)節(jié)。某些miRNA在癌旁組織和腫瘤組織中出現(xiàn)表達(dá)差異[18]，表現(xiàn)為表達(dá)增加或表達(dá)下降，羅順容等[19]采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對(duì)27份非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織及其癌旁正常組織標(biāo)本的miRNA-205進(jìn)行相對(duì)定量分析，發(fā)現(xiàn)肺鱗癌的miRNA-205表達(dá)水平升高，這可能與其編碼基因啟動(dòng)子低甲基化有關(guān)；某些具有抑癌基因功能的miRNA的編碼基因啟動(dòng)子區(qū)在癌癥中呈現(xiàn)出高甲基化狀態(tài)，而使其表達(dá)受到抑制[20]。

2.2RNA甲基化與腫瘤 近年來(lái)很多研究表明RNA甲基化與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密不可分，包括“書(shū)寫(xiě)器”、“消除器”及“閱讀器”的異常都可導(dǎo)致腫瘤的產(chǎn)生與進(jìn)展。有研究表明，包括METTL-3和METTL14復(fù)合體、RNA結(jié)合蛋白15等甲基化轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物在髓系白血病中高度表達(dá)，它們的改變往往預(yù)示著預(yù)后不良，如m6A水平的升高可能預(yù)示著髓系白血病的發(fā)生[21]。除此之外，METTL-3和METTL14復(fù)合體還可影響某些信號(hào)因子活性來(lái)發(fā)揮其對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用。研究表明mRNA甲基化可以通過(guò)調(diào)節(jié)蛋白激酶B(AKT)的活性促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖和致癌性，其機(jī)制之一就是METTL14熱點(diǎn)R298P的突變和METTL-3表達(dá)減少，導(dǎo)致AKT負(fù)調(diào)節(jié)器PHLPP2表達(dá)降低以及正向調(diào)節(jié)器mTORC2表達(dá)增高，導(dǎo)致AKT表達(dá)增加，而AKT又可促進(jìn)細(xì)胞的存活和生長(zhǎng)，進(jìn)一步證實(shí)mRNA甲基化的降低可以增加子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖和致癌性[22]。

去甲基化酶的表達(dá)也與腫瘤關(guān)系密切，例如：低氧促進(jìn)乳腺癌的表達(dá)，部分是通過(guò)增加去甲基化酶ALKBH5的表達(dá)，進(jìn)而減少m6A表達(dá)水平來(lái)實(shí)現(xiàn)的[23]；有研究者也發(fā)現(xiàn)，在某些急性粒細(xì)胞白血病亞型中出現(xiàn)FTO的高表達(dá)，具體機(jī)制為：FTO基因促進(jìn)細(xì)胞增殖或轉(zhuǎn)化和體外抑制細(xì)胞凋亡，而某些白血病相關(guān)致癌基因會(huì)使FTO的表達(dá)水平上調(diào)；使用MeRIP-seq測(cè)序法證實(shí)FTO過(guò)表達(dá)和敲除會(huì)分別降低和提升靶基因ASB2和RARA的m6A水平，進(jìn)一步證實(shí)FTO可促進(jìn)AML的發(fā)展，在AML中發(fā)揮著“原癌基因”的作用[24]。除此之外，免疫組化分析表明閱讀器YTHDF1表達(dá)與多種惡性腫瘤的行為有關(guān)，如腫瘤侵犯深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、惡性腫瘤的分期，NISHIZAWA等[25]對(duì)結(jié)直腸癌患者生存期的研究表明，高YTHDF1表達(dá)的患者有顯著較差的總生存期，YTHDF1表達(dá)是影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，體外研究表明，敲除YTHDF1基因后，使用抗癌藥物氟尿嘧啶和奧沙利鉑等可抑制腫瘤的生長(zhǎng)。

3 分子甲基化的檢測(cè)

3.1DNA甲基化的檢測(cè) 檢測(cè)基因組DNA甲基化水平的方法有很多，總體分為2大類(lèi)：一類(lèi)是檢測(cè)基因組總體甲基化水平，包括變性高效液相色譜法、基于抗5mC的免疫化學(xué)法、SssI甲基轉(zhuǎn)移酶法等，另一類(lèi)方法則可檢測(cè)到具體的甲基化位點(diǎn)，例如甲基化敏感限制性?xún)?nèi)切酶-Southern印記雜交技術(shù)、重亞硫酸氫鈉修飾后測(cè)序法、甲基化特異性PCR、亞硫酸氫鈉聯(lián)合限制性?xún)?nèi)切酶分析法等。

3.1.1變性高液相色譜法(DHPLC) DHPLC技術(shù)可對(duì)DNA甲基化進(jìn)行定量檢測(cè)，由于異源雙鏈DNA和同源雙鏈DNA被色譜柱保留的時(shí)間不同，導(dǎo)致了DNA片段的洗脫特性差異。DNA片段的保留時(shí)間由DNA序列的G/C含量和存在的DNA失配來(lái)確定。序列中CpG位點(diǎn)的甲基化導(dǎo)致PCR產(chǎn)物的G/C含量比未甲基化基因組的含量增加，導(dǎo)致更高的熔融溫度，進(jìn)一步增加了保留時(shí)間。在部分變性條件下，通過(guò)監(jiān)測(cè)由硫酸氫鹽處理的DNA擴(kuò)增子保留時(shí)間，可以揭示DNA甲基化的差異[26]。

3.1.2基于抗5mC抗體免疫化學(xué)法 利用5mC抗體能夠與5mC發(fā)生特異性反應(yīng)：應(yīng)用熒光素標(biāo)記該抗體使之與預(yù)先已固定在DEAE膜上的樣品DNA特異性結(jié)合，對(duì)DEAE膜上的熒光素進(jìn)行測(cè)量即可得到5mC的水平，熒光素強(qiáng)度與5mC水平成正比?？贵w的設(shè)計(jì)決定了該方法的靈敏度和特異度。

3.1.3CpG甲基轉(zhuǎn)移酶(M.SssI)法 CpG甲基轉(zhuǎn)移酶(M.SssI)能識(shí)別雙鏈DNA上的CpG二核苷酸序列，并甲基化其中的胞嘧啶殘基。由3H-S-腺苷甲硫氨酸(3H-SAM)提供甲基，在M.SssI甲基轉(zhuǎn)移酶催化下轉(zhuǎn)移到基因組DNA的CpG胞嘧啶使其發(fā)生甲基化[27]。剩余腺苷甲硫氨酸(SAM)放射性強(qiáng)度與所測(cè)DNA甲基化水平成反比。但因M.SssI甲基轉(zhuǎn)移酶不穩(wěn)定，導(dǎo)致結(jié)果不夠精確，可以用設(shè)置M.SssI甲基轉(zhuǎn)移酶自身對(duì)照組這一辦法解決。

3.1.4甲基化敏感的限制性?xún)?nèi)切酶-Southern印記雜交技術(shù) 甲基化敏感限制性?xún)?nèi)切酶只切割非甲基化DNA片段；而甲基化不敏感的限制性?xún)?nèi)切酶無(wú)論DNA片段是否甲基化都會(huì)切割。根據(jù)這一特性，將DNA分別用兩種內(nèi)切酶切割，用放射性標(biāo)記32P的探針對(duì)目的片段作Southern雜交。比較兩組條帶的差異即可得到目的位點(diǎn)的甲基化狀態(tài)。該法簡(jiǎn)便、快捷，可定位具體甲基化位點(diǎn)。

3.1.5重亞硫酸氫鈉修飾后測(cè)序法[28]待測(cè)DNA片段中非甲基化的胞嘧啶經(jīng)重亞硫酸鹽修飾后，轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏?，而甲基化的胞嘧啶不變，進(jìn)一步通過(guò)高通量測(cè)序比較就可間接判斷樣品中的胞嘧啶甲基化與否。該方法分辨率高，可檢測(cè)出DNA序列上的全部甲基化信息，但費(fèi)用較高。

3.1.6甲基化特異性PCR(MSP) 首先將DNA經(jīng)亞硫酸氫鈉處理，其次進(jìn)行PCR反應(yīng)，針對(duì)經(jīng)亞硫酸氫鈉處理后的甲基化或非甲基化DNA鏈設(shè)計(jì)出兩種引物對(duì)，若用前者能擴(kuò)增出片段，說(shuō)明該檢測(cè)位點(diǎn)發(fā)生了甲基化；若用后者能擴(kuò)增出片段，說(shuō)明該檢測(cè)位點(diǎn)沒(méi)有甲基化。王春華[29]通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(RT-PCR)和測(cè)序法檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液中SHOX2和RASSF1A基因甲基化情況，發(fā)現(xiàn)RT-PCR與測(cè)序法檢測(cè)SHOX2和RASSF1A甲基化的一致率達(dá)到了99%和100%。該法具有較高的特異度、靈敏度，但待測(cè)序列需已知，引物設(shè)計(jì)不足或亞硫酸氫鈉對(duì)DNA處理不完全易致假陽(yáng)性。

3.1.7重亞硫酸氫鈉聯(lián)合限制性?xún)?nèi)切酶分析法(COBRA)[30]將亞硫酸氫鈉處理后的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，用限制性?xún)?nèi)切酶酶切PCR產(chǎn)物，后根據(jù)電泳條帶的不同位置及亮度即可檢測(cè)出DNA 的甲基化狀態(tài)及甲基化程度。JACOB等[31]應(yīng)用COBRA與測(cè)序相結(jié)合(COBRA-Seq)檢測(cè)出在卵巢癌中GBGT1基因啟動(dòng)子區(qū)出現(xiàn)高甲基化。該法簡(jiǎn)便、可定量，避免了由甲基化敏感性酶產(chǎn)生的假陽(yáng)性，但檢測(cè)位點(diǎn)受限，不能除外假陰性檢測(cè)的可能性。

3.1.8PCR熒光法 早在2000年，EADS等[32]就報(bào)道了采用熒光實(shí)時(shí)PCR的定量檢測(cè)DNA甲基化的技術(shù)，該方法基于Taqman?探針實(shí)時(shí)定量檢測(cè)。其中探針的設(shè)計(jì)是關(guān)鍵。首先由重亞硫酸鹽聯(lián)合限制性?xún)?nèi)切酶分析法檢測(cè)DNA甲基化狀態(tài)，其次設(shè)計(jì)與待測(cè)甲基化DNA位點(diǎn)互補(bǔ)的探針，探針的5′端連接上一個(gè)熒光報(bào)告寡核苷酸基團(tuán)(6FAM)，3′端連接熒光淬滅寡核苷酸基團(tuán)(TAMRA)，當(dāng)探針與待測(cè)DNA雜交時(shí)，在PCR引物延伸至探針時(shí)，TaqDNA 聚合酶5′至3′外切酶活性會(huì)將探針5′端的熒光報(bào)告基團(tuán)切下，3′熒光猝滅基團(tuán)則不能再將其抑制，熒光報(bào)告基團(tuán)釋放熒光即可被檢測(cè)，熒光強(qiáng)度和甲基化水平成正比。但該方法前提是待測(cè)DNA序列已知。

3.2RNA甲基化檢測(cè)方法 同DNA甲基化檢測(cè)方法相類(lèi)似，RNA甲基化檢測(cè)同樣分為整體水平和精確到特異位點(diǎn)的檢測(cè)方法。整體甲基化檢測(cè)方法主要有LC-MS/MS(液相二級(jí)質(zhì)譜法)；而MeRIP-seq、miCLIP以及SCARLET等方法則可明確甲基化位點(diǎn)，稍有不同的是MeRIP-seq法分辨率較低，為100堿基左右，而miCLIP和SCARLET法可精確到單堿基的程度。

3.2.1LC-MS/MS 在液相質(zhì)譜的基礎(chǔ)上采用串聯(lián)質(zhì)譜，能夠獲得分子離子峰和碎片離子峰，可對(duì)堿基同時(shí)進(jìn)行定性和定量分析。將消化為單堿基的RNA樣本注入液相色譜儀，根據(jù)出峰的保留時(shí)間面積可計(jì)算各個(gè)堿基的含量；而后進(jìn)入質(zhì)譜串聯(lián)分析，將單個(gè)核糖核苷酸打斷成五碳糖和嘧啶或嘌呤，根據(jù)出峰的保留時(shí)間計(jì)算m6A的面積。最后根據(jù)m6A和總腺嘌呤的比例計(jì)算出m6A在mRNA上整體的甲基化程度。該方法可定量，且簡(jiǎn)便、成本低，但不能對(duì)甲基化位點(diǎn)準(zhǔn)確定位。

3.2.2MeRIP-seq/m6A-seq 該方法結(jié)合了免疫共沉淀和高通量測(cè)序的方法，用m6A特異性抗體篩選帶有m6A的mRNA片段并將其沉淀，構(gòu)建相應(yīng)的cDNA測(cè)序文庫(kù)，后進(jìn)行高通量測(cè)序，對(duì)m6A甲基化程度較高的區(qū)域進(jìn)行定位。該法可以以較高的精確度對(duì)全基因組進(jìn)行測(cè)序，并得到較為精確的甲基化位點(diǎn)[33]。由于該方法的分辨率為100堿基左右，所以只能對(duì)大致的區(qū)域進(jìn)行分析。

3.2.3miCLIP miCLIP是一種結(jié)合免疫共沉淀、共價(jià)交聯(lián)及高通量測(cè)序的技術(shù)[34]，它的基本檢測(cè)原理為：用紫外光誘導(dǎo)m6A抗體與含有m6A的RNA交聯(lián)，交聯(lián)后該RNA反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA會(huì)出現(xiàn)C-T突變或者就此截?cái)?，因此可以指示m6A的存在。

3.2.4SCARLET SCARLET法是一種結(jié)合了特定位點(diǎn)切割、放射性標(biāo)記、“夾板”輔助提取以及薄層色譜法等多種技術(shù)的RNA測(cè)序法[35]。首先根據(jù)靶mRNA序列設(shè)計(jì)嵌合寡核苷酸，對(duì)目標(biāo)核苷酸進(jìn)行放射性標(biāo)記；其次利用“夾板”輔助將嵌合寡核苷酸同待測(cè)RNA“結(jié)扎”在一起，后用RNA酶消化，待測(cè)序列因受“夾板”固定保護(hù)免受酶解，從而可被檢測(cè)。最后利用薄層色譜法分析具體修飾位點(diǎn)。該法分辨率高，但由于有放射性以及成本較高，使其開(kāi)展受限。

4 展 望

DNA及RNA的甲基化修飾在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的重要作用已被大量專(zhuān)家學(xué)者研究所證實(shí)，其中DNA甲基化調(diào)控腫瘤的機(jī)制研究在近十幾年已日趨完善，某些研究較為成熟的基因已有商品化試劑盒流通，各種DNA甲基化抑制藥物推陳出新，為癌癥患者帶來(lái)了福音。相比之下，近幾年火熱的以m6A修飾為主的mRNA甲基化對(duì)腫瘤的調(diào)控機(jī)制研究還處于初期階段，因此各種mRNA m6A檢測(cè)技術(shù)成為推動(dòng)其發(fā)展的重要手段，也為癌癥患者的早診、早治提供了新的方法。本文簡(jiǎn)要介紹了兩種表觀遺傳學(xué)修飾與腫瘤的相互作用，以及相關(guān)檢測(cè)方法，希望能對(duì)甲基化領(lǐng)域初級(jí)研究者提供幫助。同時(shí)期待更方便、準(zhǔn)確、快速以及經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)手段的出現(xiàn)，進(jìn)一步提高檢測(cè)的特異度和靈敏度，從而更好地服務(wù)于臨床，推動(dòng)表觀遺傳學(xué)在腫瘤早期診斷以及分期、預(yù)后和治療中的發(fā)展，為腫瘤患者帶來(lái)新的希望。