Toll樣受體2基因Arg753Gln和CD14啟動(dòng)子-159C/T多態(tài)性與肺炎鏈球菌病易感性的Meta分析

朱滿桂 馮艷 李夏西

[摘要]目的 評(píng)價(jià)Toll樣受體2基因Arg753Gln和CD14啟動(dòng)子-159C/T多態(tài)性與肺炎鏈球菌病易感性的相關(guān)性。方法 檢索PubMed、Cohrance、Embase、CNKI、維普、萬(wàn)方等數(shù)據(jù)平臺(tái)，檢索文獻(xiàn)時(shí)間限定為從建庫(kù)到2017年6月1日。搜尋符合納入和排除條件的隨機(jī)對(duì)照研究，RevMan 5.3軟件進(jìn)行Meta分析。結(jié)果 納入TLR2有關(guān)論文3篇，樣本量總計(jì)為951例;納入CD14相關(guān)研究2篇，樣本量總計(jì)為674例。Meta分析未見(jiàn)TLR2基因Arg753Gln多態(tài)性和CD14-159C/T多態(tài)性與肺炎鏈球菌病易感性相關(guān)（顯性等位基因vs.隱性等位基因：OR=0.76，95%CI=0.40～1.46，P=0.41;顯性基因型vs.隱性基因型時(shí)，OR=0.70，95%CI=0.34～1.44，P=0.33）。結(jié)論 未見(jiàn)TLR2基因Arg753Gln和CD14-159C/T多態(tài)性與肺炎鏈球菌病易感性相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] TLR2 Arg753Gln;CD14-159C/T;多態(tài)性;肺炎鏈球菌病;Meta分析

[中圖分類號(hào)] R446 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1674-4721（2019）1（b）-0008-04

[Abstract] Objective To investigate the association between TLR2 Arg753Gln and CD14-159C/T polymorphisms and Streptococcus pneumoniae disease. Methods Pubmed， embase， Cohrance， CNKI， VIP， Wanfang Data were searched to get related clinical controlled trials. The time limit for retrieving studies was until June 1， 2017. Meta-analysis was conducted by Revman 5.3 software. Results Three TLR2 related papers were included， with a total sample size of 951 cases. Two CD14 related studies were included， with a total sample size of 674 cases. Meta-analysis showed no correlation between Arg753Gln polymorphism of TLR2 gene and CD14-159C/T polymorphism and susceptibility to Streptococcus pneumoniae disease （dominant allele vs. recessive alleles： OR=0.76， 95%CI=0.40-1.46， P=0.41; dominant genotype vs. recessive genotype： OR=0.70， 95%CI=0.34-1.44， P=0.33）. Conclusion No significant differences between TLR2 Arg753Gln and CD14-159C/T polymorphisms and Streptococcus pneumoniae disease were found in the meta-analysis.

[Key words] TLR2 Arg753Gln; CD14-159C/T; Polymorphism; Streptococcus pneumoniae disease; Meta-analysis

Toll樣受體（TLR）家族以及CD14是兩種重要的模式識(shí)別受體，在清除病原體的過(guò)程中發(fā)揮作用，其基因多態(tài)性與感染相關(guān)[1]。TLR2本質(zhì)是細(xì)菌脂蛋白的受體，最初被當(dāng)作介導(dǎo)脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）的細(xì)胞信息轉(zhuǎn)導(dǎo)物質(zhì)[2]。CD14是LPS的受體，但因CD14缺少跨膜區(qū)域，不能經(jīng)過(guò)膜傳遞信息。在天然免疫中，CD14需要TLRs來(lái)協(xié)同發(fā)揮其功能[3]。肺炎鏈球菌可引起侵襲性或非侵襲性疾病[4]。研究顯示每年兒童發(fā)生侵襲性肺炎球菌疾病機(jī)率為0.63‰[5]。多項(xiàng)TLR2和CD14基因多態(tài)性與肺炎鏈球菌的相關(guān)性研究結(jié)果并不一致[6-8]，為提供TLR2和CD14基因多態(tài)性與肺炎鏈球菌病易感性關(guān)系的證據(jù)，現(xiàn)搜集文獻(xiàn)進(jìn)行Meta分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象

使用計(jì)算機(jī)檢索以下電子數(shù)據(jù)庫(kù)：PubMed、CNKI、萬(wàn)方、VIP等。檢索詞：Streptococcus pneumoniae、肺炎球菌、TLR、CD14。搜索的文章不需要限制語(yǔ)言的類型。檢索文獻(xiàn)時(shí)間限定為從建庫(kù)至2017年6月1日。

1.2文獻(xiàn)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①公開(kāi)發(fā)布的文獻(xiàn)全文;②文獻(xiàn)包括獨(dú)立病例對(duì)照試驗(yàn)設(shè)計(jì);③對(duì)照組的基因型頻率均與Hard-Weinberg平衡一致;④文獻(xiàn)中包含完整的基因型頻率數(shù)據(jù)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①重復(fù)出版文獻(xiàn)或者僅有摘要的會(huì)議論文;②研究不是獨(dú)立的病例控制;③受試者不是肺炎鏈球菌肺炎;④個(gè)案報(bào)道。

1.3質(zhì)量測(cè)評(píng)以及數(shù)據(jù)提取

質(zhì)量評(píng)估由2名評(píng)估者根據(jù)搜索條件進(jìn)行。2名評(píng)估者根據(jù)隊(duì)列研究評(píng)估文件的質(zhì)量。從每個(gè)研究人群中選擇NOS偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)。如果有爭(zhēng)議，予咨詢通訊作者討論并確定。閱讀全文后以下信息被提?。孩僖话阈畔?，包括主題，摘要，作者和出版時(shí)間;②受試者的基本特征，包括各基因多態(tài)性對(duì)應(yīng)的基因型頻率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用Review Manager 5.3軟件進(jìn)行Meta分析。P>0.1，I2<50%，采用固定效應(yīng)模型。反之，采用隨機(jī)效應(yīng)模型。漏斗圖用來(lái)評(píng)估潛在發(fā)表偏倚。

2結(jié)果

2.1文獻(xiàn)檢索結(jié)果

對(duì)照組全部均為健康人群，納入論文的對(duì)照組符合Hardy-Weinberg定律。最終納入TLR2與肺炎鏈球菌病相關(guān)的論文為3篇，樣本量總計(jì)為951例，其中研究組298例，對(duì)照組653例。R為顯性等位基因，Q為隱性等位基因，RR及RQ表示顯性基因型，QQ為隱性基因型（表1）。納入CD14與肺炎鏈球菌病相關(guān)的論文為2篇，樣本量總計(jì)為674例，其中研究組199例，對(duì)照組475例，C為顯性等位基因，T表示隱性等位基因，CC及CT表示顯性基因型，TT為隱性基因型（表2）。

2.2 Meta分析結(jié)果

顯性等位基因vs.隱性等位基因時(shí)，Q=24.67，P<0.0001，I2=84%，異質(zhì)性高，采用隨機(jī)效應(yīng)模型得到OR=0.76（95%CI=0.40～1.46），Z=0.82，P=0.41，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1），即未見(jiàn)TLR2 Arg753Gln+CD14-159C/T多態(tài)性與肺炎鏈球菌病易感性相關(guān)。

采用相同方法分析顯性基因型（RR/RQ+CC/CT）vs.隱性基因型時(shí)（QQ+TT），OR=0.70，95% CI=0.34～1.44，P=0.33，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖2），未見(jiàn)TLR2 Arg753Gln+CD14-159C/T多態(tài)性與肺炎鏈球菌病易感性相關(guān)。

漏斗圖評(píng)估潛在發(fā)表偏倚，結(jié)果提示，未發(fā)現(xiàn)顯著偏倚（圖3）。

3討論

肺炎鏈球菌可定植于正常人鼻咽部，嚴(yán)重感染時(shí)可經(jīng)血流播散導(dǎo)致膿毒癥、腹膜炎、腦膜炎等肺炎鏈球菌疾病[10]?；谀蟻唶?guó)家的研究表明侵襲性細(xì)菌性疾病中約12.8%是由肺炎鏈球菌引起，且大部分發(fā)生于5歲以下的兒童，病死率高[11]。個(gè)體對(duì)肺炎鏈球菌的易感性與細(xì)菌LPS相關(guān)的免疫反應(yīng)相關(guān)[12]。Tomlinson等[13]使用表面脂蛋白缺陷的肺炎球菌突變株驗(yàn)證得出：脂蛋白是TLR介導(dǎo)的肺炎鏈球菌免疫應(yīng)答的關(guān)鍵決定因素。CD14及Toll樣受體是兩種重要的模式識(shí)別受體，在介導(dǎo)免疫反應(yīng)并清除病原體上發(fā)揮一定作用[14]。目前研究證實(shí)，LPS介導(dǎo)的免疫體系激活過(guò)程中，LPS結(jié)合蛋白（LPS blinding protein，LBP）以及CD14是最重要環(huán)節(jié)。CD14是LPS以及LBP的受體，但由于CD14缺少跨膜區(qū)以及胞內(nèi)結(jié)構(gòu)區(qū)域，所以無(wú)法通過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)行信息傳遞。CD14功能需要TLRs來(lái)共同介導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[3]。TLR2可識(shí)別革蘭陽(yáng)性菌（如肺炎鏈球菌）的主要致病因素——細(xì)胞壁成分肽聚糖PGN與脂磷壁酸LTA[15]，從而激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制，CD14在這過(guò)程并未發(fā)揮作用，但由于在不借助外力的情況下TLR2識(shí)別抗原效率低下，在CD14的協(xié)助下效率能增加百倍以上[16]。TLR2和CD14的協(xié)同作用不僅存在于革蘭陽(yáng)性菌感染，其多態(tài)性與炎癥性腸病[17]、口腔腫瘤[18]和哮喘[19]等疾病的易感性亦相關(guān)。研究表明肺炎鏈球菌感染時(shí)，TLR2基因敲除小鼠較野生型小鼠更易發(fā)生敗血癥或腦膜炎[20]，提示TLR2和CD14基因態(tài)性可能與肺炎鏈球菌易感性相關(guān)。

Moens最早研究TLR多態(tài)性與侵襲性肺炎鏈球菌病相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)TLR2和TLR4基因多態(tài)性與侵襲性肺炎鏈球菌病不相關(guān)，但該研究未將TLR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上的多態(tài)性位點(diǎn)納入，故研究有其局限性。其后Yuan[7]和Tellería-Orriols[8]的研究更深入，研究對(duì)象增加為TLR2，TLR4和CD14的多態(tài)性，但仍未發(fā)現(xiàn)TLR2、CD14基因多態(tài)性與肺炎鏈球菌病的相關(guān)性。本Meta分析納入3篇文獻(xiàn)，最終得到結(jié)論：不論是等位基因還是各類基因型的OR值95% CI均經(jīng)過(guò)1，其P值均>0.05，表明TLR2基因Arg753Gln和CD14啟動(dòng)子-159C/T多態(tài)性與肺炎鏈球菌病易感性不相關(guān)。

本文不足之處：①納入對(duì)象少，總樣本量欠缺。②一種疾病的易感性與多種基因多態(tài)性位點(diǎn)相關(guān)。即使研究綜合了TLR2與CD14的多態(tài)性位點(diǎn)，但沒(méi)有考慮TLR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上的其他位點(diǎn)，如TNF-a、IL-6、IL-10等基因多態(tài)性位點(diǎn)。③疾病的發(fā)生是由于基因和環(huán)境的共同作用，研究缺乏基因-基因和基因-環(huán)境相互作用的數(shù)量。以上缺陷導(dǎo)致本Meta分析的可信度受到一定影響。期待今后更多設(shè)計(jì)良好的研究得出更切實(shí)的結(jié)論。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Zhou J，Zhang X，Liu S，et al.Genetic association of TLR4 Asp299Gly，TLR4 Thr399Ile，and CD14 C-159T polymorphisms with the risk of severe RSV infection：a meta-analysis[J].Influenza Other Resp，2016，10（3）：224-233.

[2]Nilsen NJ，Vladimer GI，Stenvik J.A role for the adaptor proteins TRAM and TRIF in toll-like receptor 2 signaling[J].J Biol Chem，2015，290（6）：3209-3222.

[3]Du B，Luo W，Li R，et al.Lgr4/Gpr48 negatively regulates TLR2/4-associated pattern recognition and innate immunity by targeting CD14 expression[J].J Biol Chem，2013，288（21）：15 131-15 141.

[4]王紅，杜娟，董亞瓊.成人重癥肺炎107例病原學(xué)分析[J].貴州醫(yī)藥，2015，39（4）：358-358.

[5]Iroh Tam PY，Thielen BK，Obaro SK，et al.Childhood pneumococcal disease in Africa-A systematic review and meta-analysis of incidence，serotype distribution，and antimicrobial susceptibility[J].Vaccine，2017，35（15）：1817-1827.

[6]Moens L，Verhaegen J，Pierik M，et al.Toll-like receptor 2 and Toll-like receptor 4 polymorphisms in invasive pneumococcal disease[J].Microbes Infect，2007，9（1）：15-20.

[7]Yuan FF，Marks K，Wong M，et al.Clinical relevance of TLR2，TLR4，CD14 and FcgammaRIIA gene polymorphisms in Streptococcus pneumoniae infection[J].Immunol Cell Biol，2008，86（3）：268-270.

[8]Tellería-Orriols JJ，García-Salido A，Varillas D，et al.TLR2-TLR4/CD14 polymorphisms and predisposition to severe invasive infections by Neisseria meningitidis and Streptococcus pneumoniae[J].Med Intensiva，2014，38（6）：356-362.

[9]Atkins D，Best D，Briss PA，et al.Grading quality of evidence and strength of recommendations[J].BMJ，2004，328（7454）：1490-1494.

[10]Corsini B，Aguinagalde L，Ruiz S，et al.Immunization with LytB protein of Streptococcus pneumoniae activates complement-mediated phagocytosis and induces protection against pneumonia and sepsis[J].Vaccine，2016，34（50）：6148-6157.

[11]Jaiswal N，Singh M，Thumburu KK，et al.Burden of invasive pneumococcal disease in children aged 1 month to 12 years living in South Asia：a systematic review[J].PLoS One，2014，9（5）：e96282.

[12]Musie E，Moore CC，Martin EN，et al.Toll-like receptor 4 stimulation before or after Streptococcus pneumoniae induced sepsis improves survival and is dependent on T-cells[J].PLoS One，2014，9（1）：e86015.

[13]Tomlinson G，Chimalapati S，Pollard T，et al.TLR-mediated inflammatory responses to Streptococcus pneumoniae are highly dependent on surface expression of bacterial lipoproteins[J].J Immunol，2014，193（7）：3736-3745.

[14]Du B，Luo W，Li R，et al.Lgr4/Gpr48 negatively regulates TLR2/4-associated pattern recognition and innate immunity by targeting CD14 expression[J].J Biol Chem，2013，288（21）：15 131-15 141.

[15]Guo T，Cai J，Peng Y，et al.Protective effect of an antibody against specific extracellular domain of TLR2 on agonists-driven inflammatory and allergic response[J].Biomed Res Int，2016，（2016）：1-8.

[16]Gao D，Li W.Structures and recognition modes of toll-like receptors[J].Proteins，2017，85（1）：3-9.

[17]王耀輝，高麗麗，劉春樣，等.潰瘍性結(jié)腸炎患者Toll樣受體2和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β水平變化及意義[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志，2017，31（1）：51-53.

[18]Zeljic K，Supic G，Jovic N，et al.Association of TLR2，TLR3，TLR4 and CD14 genes polymorphisms with oral cancer risk and survival[J].Oral Dis，2014，20（4）：416-424.

[19]Thorburn AN，Tseng HY，Donovan C，et al.TLR2，TLR4 and MyD88 mediate allergic airway disease （AAD） and Streptococcus pneumoniae-Induced suppression of AAD[J].PLoS One，2016，11（6）：e0156402.

[20]H Zhang，L Kang，H Yao，et al.Streptococcus pneumoniae Endopeptidase O （PepO） Elicits a Strong Innate Immune Response in Mice via TLR2 and TLR4 signaling pathways[J].Front Cell Infet Mi，2016，6：23.

（收稿日期：2018-06-08 ?本文編輯：孟慶卿）