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    特異性卵黃抗體應(yīng)用研究概述

    2019-03-08 02:50:48韓麗麗
    西部論叢 2019年4期
    關(guān)鍵詞:抑菌抗病毒

    韓麗麗

    摘 要:隨著抗菌藥物的大量使用,耐藥性問題目前已經(jīng)突顯,并且對人類的生產(chǎn)生活帶來潛在的隱患,尋求綠色的、有效的抗菌制劑是科學界急需解決的問題。卵黃抗體在這種大環(huán)境下特異性卵黃抗體凸顯出它的優(yōu)勢,無毒害作用,本文綜述了近年來特異性卵黃抗體在抗細菌、抗病毒、抗真菌方面的研究進展。

    關(guān)鍵詞:特異性卵黃抗體;抑菌;抗真菌;抗病毒

    卵黃抗體即卵黃免疫球蛋白(Yolk Immunoglobulin,IgY),是從禽類的蛋卵黃中分離純化的,可通過特定抗原免疫禽類后提取出針對特定抗原的抗體,類似于哺乳動物血液中的IgG,具有強大的免疫功能,因此又稱之為卵黃抗體。其制備過程是選定抗原對產(chǎn)蛋母雞進行多次免疫之后,抗體在蛋黃中聚集,收集蛋黃用鹽析等方法沉淀,分離純化冷凍干燥后就會得到純度較高的特異性抗體[1] 。因此,通過分離純化卵黃就可以得到純度較高的針對某種特定抗原的卵黃抗體,該抗體可以與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合,阻止抗原生物學活性的發(fā)揮。美國食品藥品監(jiān)管局已將IgY認定為“一般公認安全物質(zhì)”,并將其確定為抗菌素的首選替代品[2]。目前特異性卵黃抗體已經(jīng)在食源性病原微生物的防治工作中取得了良好應(yīng)用,有好多研究產(chǎn)品已經(jīng)投入市場。隨著研究的拓展,現(xiàn)在在功能食品和獸醫(yī)學開發(fā)上也初見規(guī)模。近年來在抗真菌方面也出現(xiàn)了不少研究,并且有些取得了可喜的成果。

    一、特異性卵黃抗體的性質(zhì)

    抗體是抗原刺激機體免疫系統(tǒng)后,能由B淋巴細胞或記憶細胞增殖分化成的漿細胞所產(chǎn)生的,可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白,主要分布在血液中,少量分布于外分泌液及組織液中。其作用是可結(jié)合病毒抑制病毒的感染,結(jié)合毒素中和毒素,結(jié)合細菌抑制細菌的吸附,可通過Fc受體的結(jié)合激活補體途徑、調(diào)理作用、細胞毒作用等殺傷靶細胞。外來抗原刺激雞體后法氏囊內(nèi)的B細胞分化成為漿細胞,漿細胞分泌特異性抗體進入血液循環(huán),當血液流經(jīng)雞卵巢時,由于受體作用,特異性抗體在卵細胞中逐漸大量蓄積,由此形成卵黃抗體[3]。卵黃抗體的性質(zhì)與哺乳動物的IgG相似。正常雞卵黃抗體的等電點約為5.2,分子量約為180KDa,由兩條重鏈(2H)和兩條輕鏈(2L)組成,相比一般哺乳動物血液中含量最多的抗體IgG,卵黃抗體具有較高的耐酸性、熱穩(wěn)定性、抗離子作用以及一定的抗酶分解的能力[4]。當pH在4-11區(qū)間內(nèi),卵黃抗體性質(zhì)比較穩(wěn)定,功能可以正常發(fā)揮,當pH<3.5時其空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變導致活性迅速下降,pH>11時其活性亦有所下降。卵黃抗體對胰蛋白酶十分敏感,但對胃蛋白酶有較高的抵抗力。將胃蛋白酶和卵黃抗體在pH4.0時1h后可保持91%的活性,甚至溫育10h后仍有63%活性。但是在pH2.0溫育1h后,幾乎所有活性喪失;但卵黃抗體分別與胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶溫育8h,依然具有活性。在低于75℃條件下,卵黃抗體具有良好的熱穩(wěn)定性。將卵黃抗體制劑溶解在含的1%NaN3的氯化鈉溶液中4℃貯存5年,活性沒有明顯下降。在室溫下放置個6個月,免疫擴散法進行檢測,結(jié)果表明抗體活性沒有下降。65℃時可保持24h以上,70℃時加熱90min后其活性才明顯下降。60℃,30min條件下巴氏消毒不影響卵黃抗體的活性,溫度高于80℃,大部分卵黃抗體失去活性[5]。

    二、特異性卵黃抗體抑菌應(yīng)用

    變形性鏈球菌免疫蛋雞可產(chǎn)生高效價的卵黃抗體,周智[6]在對人牙菌斑中變形鏈球菌的研究中發(fā)現(xiàn)應(yīng)用特異性卵黃抗體后,雖然無明顯改變其菌斑指數(shù),但是牙面菌斑的菌群微生態(tài)發(fā)生改變,卵黃抗體使用后明顯降低了變形鏈球菌群在牙菌斑的口腔鏈球菌群中的比例,并且在停藥5周后的時間內(nèi),菌斑中變形鏈球菌的水平依然保持在很低的水平,變形鏈球菌雞卵黃抗體可以有效抑制變形鏈球茵利用糖產(chǎn)酸的能力。并且李興玲[7]研究發(fā)現(xiàn)抗變形鏈球菌IgY作為被動免疫治療劑可有效抑制齲齒的發(fā)展。遲鈍愛德華氏菌是一種兼性厭氧菌,屬于腸桿菌科,其宿主范圍非常廣泛, 可侵染人、兩棲動物、爬行動物、魚類等,是常見的人畜共患病病原,危害極大。顧葉華[8]制備的抗遲鈍愛德華氏菌卵黃抗體體外相對抑菌率可以達到 86.6%;對克氏原螯蝦的平均保護率為 66.7%,并且能促進細胞吞噬遲鈍愛德華氏菌, 其相對吞噬率達到79.8%。豪豬是抗病能力很強的動物,很少發(fā)生疾病,但是仔豪豬腹瀉是引起豪豬死亡的主要病因,而腹瀉主要病原菌由大腸埃希菌引起,張保平[9]在體外抑菌性試驗中發(fā)現(xiàn),其制備的特異性卵黃抗體對大腸埃希菌具有明顯抑制其生長的作用,但是對沙門氏菌的抑制作用比較小。姚羽菲[10]在抗銅綠假單胞菌卵黃抗體的抑菌實驗中發(fā)現(xiàn)2.7mg的抗體能明顯抑制銅綠假單胞菌生長,與對照組(蒸餾水)相比,卵黃抗體試驗組菌落數(shù)減少了90%,并且明顯抑制了細菌綠色色素的產(chǎn)生。曾波[11]發(fā)現(xiàn)抗幽門螺桿菌黏附素A卵黃抗體在5 mg/ml劑量時可顯著抑制分離株的生長。對于妊娠期齦炎患者,在妊娠期期間通過正確的牙周治療會緩解牙齦炎癥,對于維護妊娠期婦女的健康,提高胎兒的出生率具有重要作用,王曉靜[12]的研究發(fā)現(xiàn)抗中間普氏菌卵黃抗體能夠減輕大鼠實驗性妊娠期齦炎的炎癥狀態(tài),可對大鼠實驗性妊娠期齦炎有一定的預防作用。

    三、卵黃抗體抗病毒的應(yīng)用

    病毒性腹瀉是引起豬腹瀉病的各種病因中危害最為嚴重的一種,病毒性腹瀉具有發(fā)病急、發(fā)病率高、傳播速度快、死亡率高等特點,給養(yǎng)殖業(yè)帶來了嚴重危害和經(jīng)濟損失。杜季梅[13]經(jīng)實驗室和臨床試驗證明抗豬流行性腹瀉病毒卵黃抗體對新生仔豬的預防保護率達 90%。鴨病毒性肝炎是由小 RNA 病毒科腸病毒屬的鴨肝炎病毒引起雛鴨的一種急性、高度致死性、烈性傳染病,危害巨大,李宇琴[14]將提取的卵黃抗體進行了易感鴨被動治療試驗,結(jié)果顯示卵黃抗體對同居感染鴨具有良好保護效果。禽腺病毒屬于雙鏈DNA病毒,可引起包涵體肝炎和心包積液肝炎綜合征等,一旦爆發(fā)對養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的損失。楊曉偉[15]發(fā)現(xiàn)特異性卵黃抗體對禽腺病毒I群血清4型感染具有較好的預防與治療作用。人類輪狀病毒是引起嬰幼兒腹瀉的主要原因,但是目前尚無特效藥物,周玲[16]研究發(fā)現(xiàn)用輪狀病毒免疫產(chǎn)蛋雞,從雞卵黃中獲得抗體治療嬰幼兒的腹瀉病取得了很好效果。Yang[17] 等制備了抗甲型流感的特異性卵黃抗體,對感染小鼠模型進行體內(nèi)活性檢測,發(fā)現(xiàn)其能中和病毒,使小鼠肺組織病毒載量和病毒滴度減小,降低了小鼠的死亡率。

    四、卵黃抗體抗真菌的應(yīng)用

    須癬毛癬菌是引起皮膚癬疾病的主要病原真菌之一,隨著市面上治療皮膚癬類疾病的藥物氟康唑、酮康唑等的應(yīng)用,真菌藥物耐藥性日趨嚴重,并且治療周期長,見效慢。胡青青[18]提取須癬毛癬菌的細胞壁蛋白作為免疫原制備特異性卵黃抗體,抗細胞壁蛋白的特異性 卵黃抗體低劑量組(5 mg/mL)、中劑量組(10 mg/mL)、高劑量組(20 mg/mL)、不同程度的緩解皮膚癬的病癥,并隨著劑量的增加,療效增強。但是而抗胞漿蛋白的卵黃抗體對于皮膚癬菌的生長幾乎沒有影響。Kamikawa [19]等人通過對比抗光滑假絲酵母菌的卵黃抗體和抗白色念珠菌的卵黃抗體的生物活性,發(fā)現(xiàn)兩者都能抑制對白色念珠菌和光滑假絲酵母菌對細胞的黏附作用,從而阻礙繁殖。但是在抗真菌研究中,低效價的抗體限制了治療的效果,全菌抗原和細胞壁抗原對抗體產(chǎn)生的影響沒有得到全面的闡述,因此如何得到高效價的抗真菌的卵黃抗體成為急需解決的問題。

    特異性卵黃抗體在抑菌、抗病毒、抗真菌領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。特異性卵黃抗體不僅在雞、豬等動物體相關(guān)疾病的防治中取得了顯著的療效,而且也在食品、牙膏等百貨領(lǐng)域進行了商品化的應(yīng)用。隨著研究的深入,已有學者在人體相關(guān)病原菌的抗感染的研究中取得了很好的實驗成效。但是特異性卵黃抗體抗真菌的研究依然處在瓶頸階段,這跟真菌的生物學特性有很大的關(guān)系,并且應(yīng)用的方式和成本也限制了特異性卵黃抗體的使用。如何在抗真菌感染的研究中取得高效價的抗體,采取何種有效途徑應(yīng)用高效價的抗體進行實驗干預,尚未得到解決。

    參考文獻:

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