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    市售炮制輔料醋中5-羥甲基糠醛含量的比較

    2019-03-04 13:32:20孟輝袁芮蘇彤宋曉張超李艷蘋(píng)
    藥學(xué)研究 2019年1期
    關(guān)鍵詞:米醋白醋食醋

    孟輝,袁芮,蘇彤,宋曉,張超,李艷蘋(píng)

    (山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,山東 濟(jì)南 250355)

    醋是中藥炮制中重要的液體輔料,炮制用醋為釀造食醋,化學(xué)合成醋不可使用。釀造食醋分為固態(tài)發(fā)酵醋和液態(tài)發(fā)酵醋兩大類(lèi)[1],固態(tài)發(fā)酵醋以谷物糧食及其副產(chǎn)品為原料,采用固態(tài)醋醅發(fā)酵釀制而成;液態(tài)發(fā)酵醋以糧食、糖類(lèi)、果類(lèi)或酒精為原料,采用液態(tài)醋醪發(fā)酵釀制而成。關(guān)于炮制輔料用醋歷代本草如《本草拾遺》《食療本草》等均記載使用米醋,《中國(guó)藥典》2015年版炮制通則中也規(guī)定使用米醋。此外,《本草綱目》載“惟米醋二三年者入藥”,《中藥炮制學(xué)》教材[2]中亦有米醋陳久者炮制效果佳的論述。

    目前,炮制輔料用醋缺少法定藥用標(biāo)準(zhǔn),現(xiàn)行的食醋國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)不能滿足炮制輔料質(zhì)量監(jiān)管的需要。有學(xué)者[3-4]通過(guò)比較不同廠家食醋中乳酸、總酸的含量為其質(zhì)量控制提供依據(jù),還有學(xué)者[5]通過(guò)對(duì)不同品牌米醋指紋圖譜的研究,提出不僅要控制總酸含量,還要控制醋中氨基酸等有機(jī)酸的含量。還有研究[6]測(cè)定了鎮(zhèn)江陳醋中5-羥甲基糠醛(5-HMF)的含量,認(rèn)為5-HMF是葡萄糖或果糖等單糖化合物在熱處理或發(fā)酵過(guò)程中,脫水產(chǎn)生的一種醛類(lèi)化合物,是美拉德反應(yīng)的產(chǎn)物[7]。但是,5-HMF能否作為米醋的質(zhì)量控制指標(biāo)還未見(jiàn)報(bào)道。所以,利用高效液相色譜 (HPLC) 法測(cè)定14批市售食醋中5-HMF的含量,結(jié)合釀造原料和工藝對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析,為炮制輔料用醋品種的選擇和藥用標(biāo)準(zhǔn)的建立提供依據(jù)。

    1 儀器與材料

    島津 LC-10A 高效液相色譜儀(日本島津公司);KQ-250E型醫(yī)用超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司);十萬(wàn)分之一電子分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)。

    5-HMF對(duì)照品(成都曼思特生物科技有限公司,批號(hào):MUST-17021202,純度≥98%);甲醇為色譜純,水為高純水;市售醋購(gòu)于濟(jì)南華聯(lián)超市,具體信息見(jiàn)表1。

    表1 14批市售醋的來(lái)源信息

    2 方法與結(jié)果

    2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取5-HMF對(duì)照品3.23 mg,置50 mL棕色量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得。

    2.2 供試品溶液的制備 精密量取醋樣品1 mL置5 mL棕色量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。

    2.3 色譜條件 色譜柱:Inertsil ODS-3 ( 4.6 mm ×250 mm,5 μm);流動(dòng)相為甲醇-0.05%磷酸(8∶92);檢測(cè)波長(zhǎng)284 nm;流速1.0 mL·min-1;進(jìn)樣量20 μL。在上述色譜條件下,5-HMF色譜峰圖形較好,見(jiàn)圖1。

    A.對(duì)照品;B.供試品 1.5-HMF圖1 HPLC色譜圖

    2.4 線性關(guān)系考察 分別精密量取5-HMF對(duì)照品溶液(64.6 μg·mL-1)0.05、0.1、0.4、0.8、1.6 mL置5 mL棕色容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻。分別吸取以上稀釋溶液各20 μL進(jìn)樣測(cè)定,以濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果5-HMF在0.64620.672 μg·mL-1有良好的線性關(guān)系(Y=152 672.38X+314.00,r=0.999 8)。

    2.5 精密度試驗(yàn) 吸取對(duì)照品溶液(10.336 μg·mL-1)連續(xù)測(cè)定6次,每次進(jìn)樣20 μL。結(jié)果峰面積RSD為1.95%,表明該測(cè)定方法的精密度較高,符合含量測(cè)定的要求。

    2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取批次為20171209的天立老醋1 mL,精密量取,按“2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液,室溫放置,在0、2、4、8、16、24 h后分別按“2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,記錄峰面積,計(jì)算5-HMF含量。結(jié)果RSD為1.68%,表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

    2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取批次為20171209的天立老醋1 mL,精密量取,共6份,按“2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液,按2.3項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,記錄峰面積,計(jì)算5-HMF含量,結(jié)果5-HMF平均含量為51.33 μg·mL-1,RSD為1.32%,表明本法測(cè)定的重復(fù)性好,符合含量測(cè)定的要求。

    2.8 加樣回收試驗(yàn) 取已測(cè)定含量(51.33 μg·mL-1)的批次為20171209的天立老醋約0.5 mL,共6份,分別加入濃度為64.6 μg·mL-15-羥甲基糠醛的對(duì)照品溶液0.4 mL,按“2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液,按“2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,計(jì)算回收率,結(jié)果見(jiàn)表2。

    表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

    結(jié)果表明測(cè)定方法的回收率高,符合含量測(cè)定的要求。

    2.9 樣品測(cè)定 取“2.1”“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液及供試品溶液,按“2.3”項(xiàng) 下 色 譜 條 件,依 法 測(cè) 定。 計(jì)算各樣品中5-HMF含量, 結(jié)果見(jiàn)表3。

    表3 14批市售米醋中5-HMF的含量及外觀性狀(n=3)

    3 討論

    試驗(yàn)收集了14批市售食醋,其中白醋3批,結(jié)果發(fā)現(xiàn)這3批白醋中均不含有5-HMF。這與白醋生產(chǎn)工藝后期的脫色處理有關(guān)[8],脫色時(shí)一般選擇活性炭為吸附劑,活性炭對(duì)極性基團(tuán)的吸附能力較強(qiáng),凡是分子中含有極性基團(tuán)的物質(zhì)都容易被活性炭吸附,5-HMF可能在脫色過(guò)程中被活性炭吸附除去。該結(jié)果與白醋指紋圖譜研究結(jié)果(白醋成分單一,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)較少,幾乎只有一個(gè)醋酸峰)[5]一致。所以,白醋不適合作為中藥炮制的輔料。

    研究發(fā)現(xiàn)11批非白醋因發(fā)酵原料、發(fā)酵方式、釀造工藝不同,其5-HMF的含量和米醋外觀性狀存在很大差異。同一廠家的巧媳婦精制米醋與巧媳婦小米醋的發(fā)酵方式均為固態(tài)發(fā)酵,僅是發(fā)酵原料由小麥粉變成小米,所釀造食醋中的5-HMF含量由14.96 μg·mL-1升高至72.03 μg·mL-1,而且小米醋的香氣更加濃郁。魯花黑糯米醋的5-HMF含量最高,外觀性狀也優(yōu)于其他品牌米醋??梢?jiàn),食醋的釀造原料會(huì)直接影響到米醋的質(zhì)量,米醋的釀造如同炮制應(yīng)遵循“品味雖貴必不敢減物力”的古訓(xùn)。

    米醋的發(fā)酵方式主要有固態(tài)發(fā)酵和液態(tài)發(fā)酵兩種,固態(tài)發(fā)酵法生產(chǎn)周期比較長(zhǎng)(大約30 d),而液態(tài)發(fā)酵法周期較短(大約7 d),所以,固態(tài)發(fā)酵更利于多種微生物及酶的參與,所發(fā)酵醋的風(fēng)味口感更好[1]。天立老醋、水塔老陳醋和恒順鎮(zhèn)江陳醋顏色較深,香氣濃郁而且5-HMF含量均較高,其外觀性狀好,與固態(tài)發(fā)酵中經(jīng)過(guò)陳釀增加了其色、香、味有關(guān)[1],其5-HMF含量較高與陳釀工藝中發(fā)生的美拉德反應(yīng)有關(guān)[6],經(jīng)歷陳釀工藝釀造的米醋更適宜作為中藥炮制的輔料[5]??煽紤]將5-HMF作為米醋的質(zhì)量控制指標(biāo),下一步可進(jìn)行同一品牌品種不同批次米醋間5-HMF含量的穩(wěn)定性試驗(yàn)。

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