27-羥基膽固醇激活LXR信號(hào)通路調(diào)節(jié)肺癌細(xì)胞的增殖*

傅由蕓， 陳 婷， 藺曉菁， 高 靜， 練雪梅△

(重慶醫(yī)科大學(xué) 1脂糖代謝性疾病重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 感染性疾病分子生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 2公共衛(wèi)生與管理學(xué)院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)教研室, 醫(yī)學(xué)與社會(huì)發(fā)展研究中心, 健康領(lǐng)域社會(huì)風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)治理協(xié)同創(chuàng)新中心， 重慶 400016)

肺癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤，也位列腫瘤死因的第一位[1]。近年來，諸多研究表明能量代謝的改變是腫瘤發(fā)病的新標(biāo)志，其中脂質(zhì)代謝與腫瘤發(fā)展之間的相關(guān)性亦得到深入研究[2]。膽固醇代謝紊亂與多種癌癥發(fā)病率和死亡率有關(guān)，但膽固醇代謝與肺癌發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)聯(lián)仍不清楚[3]。細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平在促進(jìn)腫瘤發(fā)展中起重要作用，然而流行病學(xué)研究表明血清膽固醇水平與肺癌的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)[4]，提示肺組織膽固醇代謝存在一定的特殊性。膽固醇氧化中間產(chǎn)物在膽固醇代謝中發(fā)揮了重要的作用，經(jīng)甾醇27-羥化酶(sterol 27-hydroxylase, CYP27A1)酶促生成的27-羥基膽固醇(27-hydroxycholesterol, 27-OHC)作為循環(huán)中含量豐富的氧化固醇之一。近年來，其在腫瘤發(fā)展中的作用已有研究，但結(jié)果存在較大爭議。27-OHC被證實(shí)是一種選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(selective estrogen receptor modulator, SERM)和肝X受體(liver X receptor, LXR)配體[5-6]。Nelson等[7]檢測(cè)到27-OHC可以促進(jìn)雌激素受體(estrogen receptor, ER)依賴性小鼠乳腺癌的生長;然而，在前列腺癌中，CYP27A1表達(dá)水平的降低及后續(xù)對(duì)27-OHC的合成的影響與患者無病生存期的縮短和更高的腫瘤分級(jí)有關(guān);同時(shí)，27-OHC可通過抑制甾醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2(sterol-regulatory element binding protein 2，SREBP2)的激活和下調(diào)低密度脂蛋白受體(low-density lipoprotein receptor, LDLR)的表達(dá)來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡[8]，這表明27-OHC對(duì)腫瘤發(fā)展的影響具有組織特異性。

LXR是配體激活轉(zhuǎn)錄因子之一，它在維持細(xì)胞內(nèi)膽固醇穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮作用，同時(shí)通過調(diào)節(jié)細(xì)胞膽固醇攝取、外排和從頭合成途徑影響著腫瘤的發(fā)展[9]，近年來LXR的活化對(duì)肺癌的保護(hù)性作用也得到了證實(shí)[10-12]。在前期研究中，我們觀察到高膽固醇飲食對(duì)經(jīng)烏拉坦誘導(dǎo)的C57BL/6J小鼠肺癌發(fā)展具有抑制作用；進(jìn)一步機(jī)制研究顯示，高膽固醇飲食誘發(fā)肺組織LXR的激活，繼而抑制了肺腫瘤細(xì)胞的增殖，以及小鼠誘發(fā)性肺癌的發(fā)生發(fā)展；同時(shí)發(fā)現(xiàn)介導(dǎo)27-OHC產(chǎn)生的CYP27A1在高膽固醇飲食肺癌組肺組織高表達(dá)[13]。結(jié)合文獻(xiàn)查閱，我們推測(cè)高膽固醇飲食可能促進(jìn)了小鼠體內(nèi)27-OHC的產(chǎn)生，通過激活LXR途徑，導(dǎo)致肺癌細(xì)胞中的膽固醇水平降低，增殖受到抑制。為了驗(yàn)證這一設(shè)想，本項(xiàng)工作擬探討27-OHC對(duì)肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞增殖的特異性作用及可能的機(jī)制。

材 料 和 方 法

1 細(xì)胞系和試劑

人肺癌細(xì)胞株A549購自美國菌種保藏庫(American Type Culture Collection, ATCC)，并得到北京閱微基因技術(shù)有限公司成功鑒定。RPMI-1640培養(yǎng)液及青鏈酶素雙抗溶液購自HyClone;胎牛血清購自BI；27-OHC(ENZ-CHM102)購自Enzo;LXR抑制劑GSK2033(1221277)購自TOCRIS Bioscience；CCK-8試劑盒(CK04)購自上海東仁化學(xué)科技有限公司; RIPA裂解緩沖液(P0013B)及BeyoClickTMEdU-488細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(C0071S)購自上海碧云天公司;BCA蛋白定量試劑盒(CW0014S)購自北京康為世紀(jì)公司;Western blot所需Ⅰ抗[β-actin(TA-09)]購自北京中杉金橋公司;抗ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1(ATP-binding cassette transporter A1, ABCA1)抗體(C58219)購自Santa Cruz; 3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase, HMG-CR)抗體(ab174830)購自Abcam; LDLR抗體(ET1606-47)購自杭州華安生物技術(shù)公司;化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑購自上海默克化工技術(shù)有限公司;TRIzol、SYBR Green及逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自TaKaRa;組織總膽固醇(total cholesterol, TC)測(cè)定試劑盒(E1015)購自北京普利萊公司。所用引物由深圳華大基因技術(shù)有限公司根據(jù)設(shè)計(jì)合成，見表1。

表1 Real-time PCR 引物序列

2 方法

2.1A549細(xì)胞培養(yǎng) 將A549細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清和1%青霉素-鏈霉素雙抗溶液的RPMI-1640培養(yǎng)液中，孵育在37 ℃、相對(duì)濕度95%、CO25% 恒溫箱中。細(xì)胞呈貼壁生長，3～4 d傳代，取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

思蓉和思遠(yuǎn)走后，楚墨重新扎進(jìn)廚房。這次他要為念蓉榨一杯西瓜汁，他說天太熱，喝杯西瓜汁去暑。念蓉不理他，去浴室洗好澡，出來，楚墨已經(jīng)將兩杯西瓜汁榨好。

注意盤飾與菜肴的比例，起到畫龍點(diǎn)睛的作用，大房間（14人臺(tái)以上）用46 cm以上盤子，采用大盤套小盤，放大型雕刻點(diǎn)綴；中房間（10～14人）用40 cm以上盤子加雕刻點(diǎn)綴。

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD) 表示。本研究應(yīng)用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，兩組間差異采用 Student’st檢驗(yàn)，多組間差異采用單因素方差分析。以P<0.05 被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

為測(cè)試GSK2033對(duì)LXR通路的抑制效應(yīng)，將A549細(xì)胞用不含血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，含5 μmol/L GSK2033的培養(yǎng)液，含5 μmol/L 27-OHC的培養(yǎng)液，以及含有5 μmol/L GSK2033和5 μmol/L 27-OHC的培養(yǎng)液分別培養(yǎng)在96孔板中36 h，并用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔在450 nm波長下的A值。

CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,27-OHC處理以劑量和時(shí)間依賴性方式降低A549細(xì)胞活力,與對(duì)照組相比，不同濃度的27-OHC處理肺癌細(xì)胞24/48 h后細(xì)胞存活率顯著降低(P<0.01)，見圖1。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度的27-OHC對(duì)細(xì)胞周期停滯的影響，與空白對(duì)照組相比， G1期細(xì)胞在5 μmol/L 27-OHC處理后顯著增加(P<0.05)，S期細(xì)胞減少，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見圖2。同時(shí)，在27-OHC處理組中，Hoechst/EdU合并陽性細(xì)胞率顯著低于空白對(duì)照組(P<0.05),見圖3。

2.4BeyoClickTMEdU-488檢測(cè)細(xì)胞增殖 細(xì)胞爬片在含有不同濃度(0、2.5和5 μmol/L)的27-OHC的培養(yǎng)液中培養(yǎng)36 h后，采用37 ℃預(yù)熱的10 μmol/L EdU(5-ethynyl-2’-deoxyuridine, 5-乙炔基-2’-脫氧尿苷)工作液繼續(xù)孵育細(xì)胞2 h，去除培養(yǎng)液，4%多聚甲醛室溫固定15 min，含3%BSA的PBS洗滌細(xì)胞3次，含0.3% Triton X-100的PBS室溫通透10～15 min，每孔爬片加入0.5 mL點(diǎn)擊(Click)反應(yīng)液，室溫避光孵育30 min，1×Hoechst 33342對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色，染色完畢后采用抗熒光猝滅劑封片并置于倒置熒光顯微鏡下觀察與拍照。

所有患者均取仰臥位，采用美國Med-Tec 250型乳腺托架進(jìn)行體位固定。同時(shí)患側(cè)上臂外展90°，前臂垂直，雙手上舉放于頭后。充分暴露患側(cè)乳腺，并在前正中線、腋中線、第一前肋水平以及乳腺皺折下2 cm等處放置參考小鉛點(diǎn)。在西門子SOMATOM Definition AS20排大孔徑螺旋CT模擬機(jī)下行自由平靜呼吸CT掃描定位，掃描范圍為鎖骨頭上至乳腺皺折下5 cm，以完整包括全部鄰近正常組織器官如肺、心臟、肝臟、對(duì)側(cè)乳腺等，掃描層厚取5 mm。獲得CT圖像后將其傳輸至ADAC Pinnacle3 9.6三維治療計(jì)劃系統(tǒng)工作站。

2.6Western blot 采用RIPA裂解緩沖液提取細(xì)胞全蛋白，BCA蛋白質(zhì)測(cè)定試劑盒檢測(cè)蛋白質(zhì)濃度。將適量的蛋白質(zhì)樣品(30～50 μg)行10%或12%SDS-PAGE，以80V的恒定電壓分離30 min，然后轉(zhuǎn)移至120V，持續(xù)約1.5 h；濕轉(zhuǎn)至PVDF 膜，5%脫脂奶粉在37℃搖床中封閉膜1 h。用相應(yīng)Ⅰ抗和Ⅱ抗孵育該膜，洗滌后，化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑A∶B按 1∶1 比例配制，立即將其均勻加在膜表面，放入Fusion Fx5化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀(Vilber)顯色得到條帶，再以ImageJ軟件定量分析。

2.2細(xì)胞活性檢測(cè) 用CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活力。將對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞以5×107/L(每孔100 μL)接種在96孔板中，在培養(yǎng)液中培養(yǎng)24 h，并且用無菌PBS填充板的邊緣孔。隨后用無血清RPMI-1640替換培養(yǎng)液，使細(xì)胞饑餓12 h。結(jié)合所查文獻(xiàn)[7-8, 14-15]，以及預(yù)實(shí)驗(yàn)中對(duì)27-OHC濃度不斷優(yōu)化，故采用不同濃度(0、0.3125、 0.625、1.25、 2.5、 5和10 μmol/L)的27-OHC處理A549細(xì)胞,每組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔，24/48 h后，向各孔中加入10 μL CCK-8溶液，在孵箱中孵育2 h，用酶標(biāo)儀(HIMFD，Gene Company Limited)測(cè)定各孔在450 nm波長下的吸光度(A)。

3.不斷樹立巡視干部良好形象。教育巡視干部始終堅(jiān)持正確的政治立場和政治方向，始終做到政治上清醒堅(jiān)定、在重大問題的把握上旗幟鮮明，始終在思想上、行動(dòng)上與黨委保持高度一致。保持公道正派、嚴(yán)謹(jǐn)敬業(yè)的作風(fēng)，講黨性、講原則，講真話、講實(shí)情，全面、真實(shí)、客觀、準(zhǔn)確地向黨委反映被巡視單位的情況。深入基層，調(diào)查研究，謙虛謹(jǐn)慎，謹(jǐn)言慎行。恪守廉潔自律準(zhǔn)則，嚴(yán)肅巡視工作紀(jì)律，認(rèn)真執(zhí)行巡視工作《條例》《辦法》和《工作人員守則》，從嚴(yán)遵守巡視工作政治紀(jì)律、組織紀(jì)律、工作紀(jì)律和保密紀(jì)律，切實(shí)維護(hù)巡視工作的威信和尊嚴(yán)。

2.7細(xì)胞總膽固醇檢測(cè) 根據(jù)組織總膽固醇測(cè)定試劑盒的方案檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)總膽固醇水平。簡言之，A549細(xì)胞在含有不同濃度的27-OHC的培養(yǎng)液中培養(yǎng)36 h后，用裂解緩沖液處理細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到離心管中，于室溫下2 000×g離心5 min。吸出上清液酶法測(cè)定(550 nm)膽固醇濃度，同時(shí)將剩余的沉淀物干燥約3 min，經(jīng)500 μL 0.1 mol/L NaOH溶解以測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。以每mg蛋白濃度校正膽固醇含量。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

(2)當(dāng)m=1時(shí),G ～=S3或G為2n(2n-1)階Frobenius群,其中Sylow 2-子群正規(guī),2n-1為素?cái)?shù).

2.5Real-time PCR檢測(cè) 采用TRIzol提取細(xì)胞總RNA，并使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒獲得cDNA。Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)ABCA1、LDLR和HMG-CR的表達(dá)。用核酸擴(kuò)增實(shí)時(shí)定量檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)達(dá)到一定熒光值所需要的循環(huán)次數(shù)(Ct值)。循環(huán)次數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)值用肌動(dòng)蛋白基因標(biāo)準(zhǔn)化，用2-ΔΔCt方法計(jì)算比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組基因變化。

結(jié) 果

1 27-OHC對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響

2.3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期 將A549細(xì)胞以2×108/L(每孔1 mL)接種在6孔板中，在孵箱中培養(yǎng)24 h。采用無血清RPMI-1640替換培養(yǎng)液，使細(xì)胞饑餓12 h。將細(xì)胞在含有不同濃度(0、2.5和5 μmol/L)27-OHC的培養(yǎng)液中培養(yǎng)36 h,每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，經(jīng)胰蛋白酶消化后，預(yù)冷卻的PBS洗滌細(xì)胞1次。采用250 μL PBS吹散細(xì)胞，向懸浮液中緩慢滴入750 μL無水乙醇。4℃固定過夜后，向每管中加入5 μL FITC-膜聯(lián)蛋白V，并將細(xì)胞在室溫下避光溫育15 min。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)之前，將5 μL熒光染料碘化丙啶(propidium iodide, PI)加入管中。

2 27-OHC對(duì)A549細(xì)胞ABCA1、HMG-CR和LDLR mRNA和蛋白表達(dá)的影響

與對(duì)照組相比，5 μmol/L 27-OHC在處理細(xì)胞36 h后顯著上調(diào)ABCA1的蛋白表達(dá)(P<0.05)，同時(shí)下調(diào)HMG-CR和LDLR的蛋白表達(dá)(P<0.01); 2.5 μmol/L 27-OHC略上調(diào)ABCA1的蛋白表達(dá)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，同時(shí)下調(diào)HMG-CR和LDLR的蛋白表達(dá)(P<0.01),見圖4。與蛋白質(zhì)表達(dá)一致，用2.5 μmol/L或5 μmol/L 27-OHC處理細(xì)胞36 h后，與空白對(duì)照組相比，ABCA1的mRNA表達(dá)增加(P<0.05或P<0.01)，HMG-CR的mRNA表達(dá)水平降低(P<0.01)，LDLR mRNA表達(dá)也降低，見圖5。

集中所有能調(diào)動(dòng)的資源，對(duì)國家最高領(lǐng)導(dǎo)者的位置發(fā)動(dòng)全力沖擊，一旦失敗，是否會(huì)跌入深淵？在美國，過去40年來的10位總統(tǒng)敗選者們，在敗選之后，又經(jīng)歷了怎樣的人生？約翰·麥凱恩John SidneyMcCain III

Figure 1.27-OHC decreased the viability of A549 cells. Mean±SD.n=3.**P<0.01vs0 μmol/L;##P<0.01vs24 h.

圖127-OHC降低A549細(xì)胞的活力

3 27-OHC對(duì)A549細(xì)胞內(nèi)膽固醇穩(wěn)態(tài)的影響

TC含量測(cè)試的結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，用5 μmol/L的27-OHC處理后細(xì)胞內(nèi)TC的水平顯著降低(P<0.05),見圖6A。

4 LXR通路抑制對(duì)A549細(xì)胞活力的影響

當(dāng)LXR通路被廣譜LXR抑制劑GSK2033阻斷后，進(jìn)一步檢測(cè)A549細(xì)胞活力,結(jié)果顯示，5 μmol/L GSK2033處理顯著減弱了27-OHC對(duì)A549細(xì)胞活力的抑制作用(P<0.05),見圖6B。

討 論

Figure 2.Effect of 27-OHC on cell cycle of A549 cells. Mean±SD.n=6.*P<0.05vscontrol group.

圖227-OHC對(duì)A549細(xì)胞周期的影響

Figure 3.27-OHC reduced the proliferation rate of A549 cells. Mean±SD.n=3.*P<0.05vscontrol group.

圖327-OHC降低A549細(xì)胞的增殖率

27-OHC是膽固醇代謝與疾病之間的主要介質(zhì)之一，以往研究證實(shí)了27-OHC與乳腺癌、前列腺癌、動(dòng)脈粥樣硬化和神經(jīng)退行性疾病之間的相關(guān)性[7-8,14-15]，然而很少報(bào)道27-OHC與肺癌之間的相關(guān)性。本研究結(jié)果表明，27-OHC可以通過激活LXR通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)膽固醇穩(wěn)態(tài)，從而使A549細(xì)胞的增殖受到抑制。LXR在許多疾病發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，研究表明LXR是機(jī)體抗心肌缺血/再灌注損傷的防御因子[16-17]；近來研究發(fā)現(xiàn)體內(nèi)/體外LXR活化對(duì)肺癌發(fā)展亦發(fā)揮著一定的保護(hù)作用。例如，敲除小鼠LXR-α和LXR-β基因會(huì)導(dǎo)致小鼠自發(fā)性外周鱗狀細(xì)胞肺癌的發(fā)生[10]。LXR激動(dòng)劑T0901317或GW3965抑制Akt活化并使耐吉非替尼的肺癌細(xì)胞HCC827-8-1對(duì)吉非替尼的敏感性增強(qiáng)[11]。

Figure 4.The relative protein expression of ABCA1, HMG-CR and LDLR in A549 cells treated with different doses of 27-OHC for 36 h. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group.

圖4A549細(xì)胞中ABCA1、HMG-CR和LDLR的蛋白表達(dá)情況

Figure 5.The mRNA expression of ABCA1, HMG-CR and LDLR in A549 cells treated with different doses of 27-OHC for 36 h. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group.

圖5A549細(xì)胞中ABCA1、HMG-CR和LDLR的mRNA表達(dá)情況

Figure 6.Cellular cholesterol content determination and effect of LXR pathway inhibition on A549 cell viability. A: the relative cholesterol content of A549 cells treated with different doses of 27-OHC for 36 h; B: effect of LXR pathway inhibition on A549 cell viability. Mean±SD.n=4.*P<0.05，**P<0.01vscontrol group;#P<0.05vs27-OHC group.

圖6細(xì)胞膽固醇含量測(cè)定和LXR途徑抑制對(duì)A549細(xì)胞活力的影響

LXR在維持細(xì)胞膽固醇代謝平衡中發(fā)揮著作用[18]。在本研究中，我們觀察到用不同濃度的27-OHC處理24/48 h后細(xì)胞活力顯著降低,流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，經(jīng)5 μmol/L 27-OHC處理后，細(xì)胞多數(shù)停滯在G1期，EdU實(shí)驗(yàn)證實(shí)A549細(xì)胞的增殖受到抑制。進(jìn)一步機(jī)制研究表明，27-OHC激活LXR通路，上調(diào)下游靶蛋白ABCA1的表達(dá)，下調(diào)HMG-CR和LDLR的表達(dá)，繼而促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)膽固醇的外排，降低膽固醇的從頭合成，減少膽固醇的攝入，使得A549細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平降低;另一方面，LXR通路經(jīng)5 μmol/L GSK2033部分阻斷后，27-OHC對(duì)A549細(xì)胞活力的抑制作用顯著減弱，進(jìn)一步表明LXR通路的激活參與了27-OHC抑制細(xì)胞增殖的作用，并在保持細(xì)胞內(nèi)膽固醇穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用。

膽固醇代謝平衡與癌細(xì)胞增殖密切相關(guān)，因?yàn)樗侵さ年P(guān)鍵組成成分；腫瘤細(xì)胞可能比正常對(duì)照具有更高水平的富含膽固醇的脂筏。脂筏總是作為信號(hào)調(diào)節(jié)的主要平臺(tái)，在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖以及凋亡的過程中發(fā)揮重要作用[19]。脂筏中PI3K/Akt等信號(hào)通路的激活與某些腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)[20]。然而，脂筏及其相關(guān)信號(hào)通路是否參與27-OHC調(diào)節(jié)肺癌細(xì)胞的增殖尚需深入研究。

27-OHC作為SERM和LXR通路的激活劑，其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用近來引起了重視。27-OHC促進(jìn)ER陽性乳腺癌的進(jìn)展以及對(duì)前列腺癌的保護(hù)性作用，提示27-OHC在腫瘤發(fā)展中的作用具有明顯的組織特異性。最近報(bào)道了27-OHC以ER-β依賴性方式促進(jìn)了肺癌細(xì)胞增殖，但ER-α陽性或ER陰性細(xì)胞的增殖未受影響[21]。我們的研究觀察到27-OHC對(duì)ER陰性的A549細(xì)胞增殖具有抑制性的作用。因此，肺癌組織中LXR和ER表達(dá)的差異，可能在膽固醇代謝影響肺癌發(fā)展中發(fā)揮了作用，值得深入地研究。