• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    京尼平抑制高糖誘導(dǎo)的大鼠心肌H9c2細(xì)胞氧化應(yīng)激及凋亡損傷*

    2019-02-28 09:10:22齊曉丹梁麗杰寧小美李淑艷徐文雙陳慶友張春晶
    中國病理生理雜志 2019年2期
    關(guān)鍵詞:膜電位高糖心肌細(xì)胞

    師 巖, 徐 晶▲, 程 昊, 齊曉丹, 樊 麗, 梁麗杰, 寧小美, 李淑艷, 徐文雙, 陳慶友, 張春晶△

    (齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院 1生物化學(xué)教研室, 2附屬第三醫(yī)院內(nèi)分泌科, 3附屬第二醫(yī)院, 4齊齊哈爾市五官醫(yī)院, 黑龍江 齊齊哈爾 161006)

    糖尿病并發(fā)癥嚴(yán)重危害著人們的健康,持續(xù)高血糖導(dǎo)致的糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)是很多糖尿病患者發(fā)生心衰和死亡的原因之一?,F(xiàn)已明確糖尿病及其并發(fā)癥的統(tǒng)一發(fā)病機(jī)制之一是高濃度血糖水平引起人體氧化應(yīng)激損傷[1],產(chǎn)生大量活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)會(huì)直接損傷心肌細(xì)胞,引起心肌細(xì)胞凋亡,常常導(dǎo)致心肌發(fā)生嚴(yán)重的功能性障礙[2],因此通過抗氧化防治糖尿病心肌病是一個(gè)有效途徑,研究天然有效的抗氧化劑具有重要意義。

    京尼平(genipin, GEN)屬于環(huán)烯醚萜類物質(zhì),是傳統(tǒng)中藥梔子花和果實(shí)中提取的京尼平苷經(jīng)β-葡萄糖苷酶水解而生成的[3],具有強(qiáng)抗氧化活性,小劑量應(yīng)用具有天然無毒、分子量小和易于被機(jī)體吸收等優(yōu)點(diǎn)[4]。研究顯示,京尼平對缺氧/復(fù)氧引起的心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷具有很好的拮抗作用,且能夠有效減輕肝臟細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷[5],減輕氧化應(yīng)激損傷導(dǎo)致的脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)的癥狀[6],具有抑制胃癌、前列腺癌、乳腺癌和結(jié)腸癌等細(xì)胞生長的作用[7-10];在獨(dú)立的胰島中加入京尼平還可逆轉(zhuǎn)高葡萄糖和肥胖誘導(dǎo)的β細(xì)胞功能障礙[11],并對血管通透性也具有一定的保護(hù)作用[12]。但是京尼平對高濃度葡萄糖引起心肌細(xì)胞損傷的作用及相關(guān)機(jī)制報(bào)道并不多見。在前期大量抗氧化劑研究的基礎(chǔ)上,我們以培養(yǎng)的大鼠心肌H9c2細(xì)胞為研究對象,建立高濃度葡萄糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷模型[13],證明京尼平在抑制高濃度葡萄糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷中的作用及其作用機(jī)制。

    材 料 和 方 法

    1 材料

    大鼠心肌H9c2細(xì)胞由本實(shí)驗(yàn)室保存(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)細(xì)胞中心);京尼平(Cayman);胎牛血清和活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)檢測試劑盒(Invitrogen);葡萄糖(Sigma);0.25%胰酶-0.02% EDTA(吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司);DMEM培養(yǎng)基(Thermo);CCK-8檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所);凋亡檢測試劑盒(Roche);線粒體膜電位檢測試劑盒、超敏ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒和BCA蛋白濃度測定試劑盒(碧云天生物技術(shù)有限公司);抗錳超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn-SOD)、細(xì)胞色素C(cytochrome C,Cyt C)、Bax和cleaved caspase-3抗體(Santa Cruz和Abcam);抗p-Akt抗體(Cell Signaling Technology);山羊抗鼠抗體(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。

    COULTER? EPICS?XLTM流式細(xì)胞儀(Beckman Coulter);凝膠成像系統(tǒng)(Bio-Rad);LSM 710激光掃描共聚焦顯微鏡(ZEISS);酶標(biāo)儀(MD)。

    2 方法

    2.1大鼠心肌H9c2細(xì)胞的培養(yǎng) H9c2細(xì)胞使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液常規(guī)培養(yǎng)在37 ℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中。

    2.2實(shí)驗(yàn)分組及預(yù)處理方式 細(xì)胞分組:(1)正常糖濃度對照(normal control, NC)組:葡萄糖濃度為5.6 mmol/L;(2)高濃度葡萄糖損傷(high glucose, HG)組:葡萄糖濃度為50 mmol/L;(3)正常糖濃度葡萄糖+京尼平(NC+GEN)組:葡萄糖濃度為5.6 mmol/L,京尼平濃度為10 μmol/L;(4)高濃度葡萄糖+京尼平(HG+GEN)組:葡萄糖濃度為50 mmol/L,京尼平濃度是10 μmol/L。

    2.3CCK-8法檢測細(xì)胞存活率 將心肌 H9c2細(xì)胞以每孔2×104個(gè)的細(xì)胞數(shù)懸液接種到96孔培養(yǎng)板,于37 ℃、5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,棄去培養(yǎng)基,PBS清洗3次,京尼平(10 μmol/L)作用于正常糖濃度和高葡萄糖濃度細(xì)胞中,每孔培養(yǎng)基體積100 μL,每組設(shè)6個(gè)平行復(fù)孔,分組培養(yǎng)48 h,每孔加10 μL CCK-8試劑后,輕緩地晃動(dòng)培養(yǎng)板,使試劑和培養(yǎng)基充分混勻,空白對照不加細(xì)胞懸液只加110 μL CCK-8試劑,繼續(xù)孵育2 h后,在450 nm波長處檢測吸光度(A)值,再換算成細(xì)胞存活率比較,重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。

    2.4細(xì)胞內(nèi)丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性和細(xì)胞上清液中乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)活性的測定 H9c2細(xì)胞用0.25%胰酶-0.02% EDTA消化,以(1.5~2)×108/L接種于100 mm培養(yǎng)板中,常規(guī)培養(yǎng)24 h后。按試劑盒說明書操作,相應(yīng)波長處測定各組細(xì)胞光密度(A)值,再換算成細(xì)胞內(nèi)MDA含量、SOD活性和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LDH活性,比較各組細(xì)胞氧化應(yīng)激水平。

    2.5DCF法檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平 將心肌 H9c2細(xì)胞按照每孔1.5×104個(gè)細(xì)胞接種于96孔板,分組培養(yǎng)后,根據(jù)活性氧簇測定試劑盒說明書操作。采用酶標(biāo)儀于560 nm波長測定A值。

    2.6ELISA檢測細(xì)胞凋亡 分組收集細(xì)胞, 4 ℃、1 500 r/min離心5 min,除上清,重新懸浮于200 μL細(xì)胞裂解液中,室溫裂解30 min,1 000 r/min離心10 min,小心吸出上清液,鏈霉親合素包被的培養(yǎng)板每孔加20 μL,根據(jù)試劑盒說明書操作。采用酶標(biāo)儀于410 nm波長測定A值,每一樣品做雙孔檢測,求其平均值,并計(jì)算核小體片段聚集值。

    2.7線粒體膜電位的檢測 心肌H9c2細(xì)胞用PBS洗滌細(xì)胞2次,然后加入1 mL JC-1染色工作液,充分混勻,細(xì)胞培養(yǎng)箱中37 ℃孵育20 min,在JC-1染色緩沖液(1×)洗滌2次后,使用具有FITC和RITC通道的激光掃描共聚焦顯微鏡獲得圖像。檢測JC-1單體最大激發(fā)波長490 nm,最大發(fā)射波長530 nm;檢測JC-1聚合物最大激發(fā)波長525 nm,最大發(fā)射波長590 nm。

    2.8Western blot檢測蛋白表達(dá) 將心肌H9c2細(xì)胞接種到培養(yǎng)皿中,常規(guī)培養(yǎng)24 h后,細(xì)胞密度70%~80%, 按照分組后續(xù)實(shí)驗(yàn),收集各組細(xì)胞獲得總蛋白,BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,每孔以40 μg樣品上樣進(jìn)行SDS-PAGE,采用濕法進(jìn)行Western blot轉(zhuǎn)膜(PVDF 膜)1 h, 5% 脫脂奶粉封閉 2 h, 加入 I 抗(Mn-SOD、p-Akt、Cyt C、Bax、cleaved caspase-3濃度為1∶500~1∶1 000,β-actin濃度為1∶5 000),4 ℃ 孵育過夜, II 抗37 ℃ 孵育 1 h, ECL 化學(xué)顯色,Quantity One 軟件分析蛋白表達(dá)水平。

    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    運(yùn)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。在方差齊性檢驗(yàn)的基礎(chǔ)上行方差分析,并用SNK-q檢驗(yàn)行各組均數(shù)間的兩兩比較。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié) 果

    1 京尼平對高糖損傷的H9c2細(xì)胞活力的影響

    CCK-8法檢測不同濃度京尼平對H9c2細(xì)胞活力的影響。結(jié)合前期研究,選擇50 mmol/L葡萄糖作用于心肌 H9c2細(xì)胞72 h,作為高濃度葡萄糖誘發(fā)的氧化應(yīng)激細(xì)胞損傷模型[13]。京尼平(10 μmol/L)作用于正常糖濃度和高葡萄糖濃度細(xì)胞,與正常糖對照組相比,高糖損傷組細(xì)胞活力顯著下降(P<0.05);10 μmol/L京尼平作用于高糖細(xì)胞中(HG+GEN組),相對于高糖損傷組(HG組)細(xì)胞活力顯著提高(P<0.05);京尼平加入正常糖濃度組(NC+GEN)與正常糖對照組(NC)相比,細(xì)胞活力的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性,見圖1,提示10 μmol/L京尼平對高糖環(huán)境培養(yǎng)的細(xì)胞具有抑制損傷的作用。

    Figure 1.The effects of genipin (GEN) at 10 μmol/L on the viability of H9c2 cells detected by CCK-8 assay. Mean±SD.n=6.*P<0.05vsNC group;#P<0.05vsHG group.

    圖1CCK-8法檢測京尼平(10μmol/L)對H9c2細(xì)胞活力的影響

    2 京尼平對高糖損傷的H9c2細(xì)胞內(nèi)MDA含量和SOD活性及細(xì)胞培養(yǎng)上清液LDH活性的影響

    50 mmol/L葡萄糖作用48 h,與正常糖對照組比較,高糖損傷組LDH活性和MDA含量明顯增高,SOD活性明顯下降(P<0.05);但10 μmol/L濃度京尼平加入高糖中,與HG組比較,其LDH活性和MDA含量明顯下降,SOD活性顯著上升(P<0.05),提示京尼平能有效抑制高糖引起H9c2細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷,對高糖環(huán)境的細(xì)胞具有保護(hù)作用。NC+GEN組與NC組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性,說明京尼平對正常糖處理的細(xì)胞無影響,見表1。

    表1各組細(xì)胞MDA含量及SOD和LDH活性的比較

    Table 1.The changes of the MDA, SOD and LDH levels (Mean±SD.n=9)

    GroupMDA (μmol/g protein)SOD (103 U/g protein)LDH (U/L)NC23.60±2.08213.651±12.893217.21±14.21HG31.80±3.14?171.148±19.596?295.96±15.32?NC+GEN24.60±2.15205.364±15.133198.66±17.89HG+GEN25.20±1.98#194.786±14.845#240.51±16.32#

    *P<0.05vsNC group;#P<0.05vsHG group.

    3 京尼平對高糖誘導(dǎo)下心肌 H9c2細(xì)胞內(nèi)ROS含量的影響

    與正常糖對照組比較,高糖組ROS含量明顯增加(P<0.05);與高糖組比較,高糖+京尼平組顯著減少由高糖誘導(dǎo)損傷產(chǎn)生ROS的含量(P<0.05);而正常糖+京尼平組與正常糖對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性,見圖2。

    Figure 2.The effect of genipin (GEN) on ROS production in H9c2 cardiomyocytes induced by high glucose (HG). Mean±SD.n=3.*P<0.05vsNC group;#P<0.05vsHG group.

    圖2京尼平對高糖誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞ROS含量的影響

    4 京尼平對高糖誘導(dǎo)的心肌H9c2細(xì)胞凋亡的影響

    檢測心肌細(xì)胞核小體片段聚集值以評價(jià)細(xì)胞凋亡的變化,結(jié)果表明與正常糖對照組相比,高糖組細(xì)胞內(nèi)核小體的聚集程度明顯高于正常糖組(P<0.05);而與高糖組相比,高濃度葡萄糖+京尼平組核小體的聚集程度顯著降低(P<0.05),見圖3。

    5 京尼平對高糖誘導(dǎo)下心肌H9c2細(xì)胞線粒體膜電位的影響

    激光共聚焦顯微觀察及JC-1 探針染色法檢測各組線粒體膜電位變化,結(jié)果顯示,與正常糖對照組比較,高糖損傷組的JC-1 探針綠色熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng),紅色熒光強(qiáng)度明顯減弱(P<0.01),表示線粒體膜電位下降;與高糖損傷組比較,高濃度葡萄糖+京尼平組JC-1 探針綠色熒光明顯減弱,紅色熒光強(qiáng)度增加(P<0.01),表示線粒體膜電位升高,見圖4。

    Figure 3.The effect of genipin (GEN) on the apoptosis of high glucose (HG)-induced H9c2 cardiomyocytes detected by nucleosome fragmentation enrichment factor assay. Mean±SD.n=9.**P<0.01vsNC group;#P<0.05vsHG group.

    圖3核小體片段聚集值分析京尼平對高糖誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞凋亡的影響

    6 京尼平對高糖誘導(dǎo)下心肌H9c2細(xì)胞Mn-SOD、p-Akt、Cyt C、Bax和cleaved caspase-3蛋白水平的影響

    與正常糖對照組比較,高糖損傷組細(xì)胞內(nèi)Mn-SOD 和p-Akt的蛋白水平顯著減少,Cyt C、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平升高(P<0.05); 與高糖損傷組比較,高糖+京尼平組細(xì)胞內(nèi)Mn-SOD的釋放量顯著升高(P<0.05),Cyt C、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平減少;而正常糖+京尼平組與正常糖對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性,見圖5。

    討 論

    糖尿病心肌病是心肌細(xì)胞對高血糖的急性應(yīng)激反應(yīng)而表現(xiàn)出來的慢性病理改變,急性應(yīng)激反應(yīng)主要是氧化應(yīng)激反應(yīng)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路改變及細(xì)胞凋亡[14]。體外培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細(xì)胞,模擬高糖環(huán)境中的心肌細(xì)胞相關(guān)病理變化并探討抗氧化藥物京尼平的作用機(jī)制。在前期研究結(jié)果基礎(chǔ)上[13, 15],建立高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷模型,用CCK-8法檢測的抗氧化劑京尼平對高糖損傷H9c2細(xì)胞的影響,結(jié)果顯示京尼平(10 μmol/L)對正常糖培養(yǎng)的細(xì)胞存活率沒有影響,能提高高糖損傷組的細(xì)胞存活率,說明京尼平對高糖損傷的細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用。在調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激系統(tǒng)平衡和抗氧化應(yīng)激酶的系統(tǒng)中MDA和SOD占據(jù)著重要的地位,MDA反映著脂質(zhì)過氧化的程度,含量過高說明受氧自由基攻擊程度較嚴(yán)重,導(dǎo)致了細(xì)胞損傷;SOD活力的大小可以直接反應(yīng)細(xì)胞清除氧自由基的能力。MDA和SOD相互驗(yàn)證細(xì)胞氧化應(yīng)激狀態(tài)[16-17]。LDH是一種心肌細(xì)胞內(nèi)標(biāo)志性酶,細(xì)胞損傷LDH會(huì)大量釋放出來,上清液中LDH含量升高提示著心肌細(xì)胞損傷程度,京尼平降低高糖損傷細(xì)胞的LDH,說明對細(xì)胞具有保護(hù)作用。研究結(jié)果顯示,京尼平(10 μmol/L)能有效降低H9c2心肌細(xì)胞高糖環(huán)境產(chǎn)生的氧化應(yīng)激的產(chǎn)物MDA和心肌損傷標(biāo)志物L(fēng)DH的含量,增高細(xì)胞內(nèi)抗氧化應(yīng)激酶SOD的活力,降低活性氧簇ROS的產(chǎn)生,均證明京尼平可明顯減輕高糖導(dǎo)致的心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。蔣有琴等[18]和Hughes等[19]研究小組的京尼平抗氧化作用與本研究結(jié)果相一致。

    Figure 4.The effect of genipin (GEN) on mitochondrial membrane potential in high glucose (HG)-induced H9c2 cardiomyocytes (×400). Mean±SD.n=6.**P<0.01vsNC group;##P<0.01vsHG group.

    圖4京尼平對高糖誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞線粒體膜電位的影響

    線粒體是細(xì)胞能量代謝的中心,心肌細(xì)胞要消耗大量的氧,主要通過線粒體氧化呼吸鏈,心肌細(xì)胞高糖損傷會(huì)引起線粒體內(nèi)產(chǎn)生大量活性氧簇[20],ROS的大量積累就會(huì)破壞心肌細(xì)胞線粒體內(nèi)抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)的平衡,線粒體內(nèi)抗氧化應(yīng)激的酶系統(tǒng)防御較弱,導(dǎo)致線粒體氧化損傷,加速線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的開放。分布在線粒體基質(zhì)內(nèi)的主要抗氧化酶Mn-SOD是一種金屬酶,對于線粒體的抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)的平衡具有重要保護(hù)作用,成為檢測線粒體內(nèi)抗氧化酶系統(tǒng)的重要標(biāo)志性酶,能有效清除生物體內(nèi)多余的氧自由基,對活性氧簇誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡具有一定的拮抗作用。本實(shí)驗(yàn)給予高糖處理的細(xì)胞給予京尼平處理,可顯著抑制ROS的產(chǎn)生,減少細(xì)胞由高糖氧化損傷引起的線粒體膜電位去極化,升高線粒體內(nèi)抗氧化應(yīng)激蛋白酶Mn-SOD的含量,均提示京尼平具有降低細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激產(chǎn)物生成的作用,并能維持線粒體內(nèi)抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)酶的平衡。線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件,通過JC-1熒光探針從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測到細(xì)胞膜電位的下降,結(jié)果顯示,高糖損傷組比正常糖對照組線粒體膜電位下降。京尼平作用于高濃度葡萄糖時(shí)與高糖損傷組比較,JC-1 探針綠色熒光明顯減弱,紅色熒光強(qiáng)度增加,線粒體膜電位升高,說明京尼平能抑制高糖導(dǎo)致的心肌細(xì)胞凋亡。ELISA法中雙抗體夾心酶法,可以利用鈣-鎂依賴性核酸酶切割凋亡細(xì)胞的核小體,產(chǎn)生180 bp~200 bp或其倍數(shù)的核小體片段,應(yīng)用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體,與核小體片段形成夾心結(jié)構(gòu),特異性檢測細(xì)胞溶解物中的核小體片段的聚集程度,結(jié)果發(fā)現(xiàn)京尼平降低了高糖環(huán)境下核小體片段的聚集程度,進(jìn)一步說明京尼平能有效抑制高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡。

    高糖環(huán)境導(dǎo)致心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷,線粒體功能發(fā)生一系列障礙,是細(xì)胞凋亡和壞死的重要標(biāo)志性事件[21],Bax作為Bcl-2家族重要的促凋亡蛋白,可作為線粒體膜上離子通道的重要組成部分,Bax增強(qiáng)會(huì)導(dǎo)致線粒體膜電位去極化,損傷的線粒體中的Cyt C大量釋放,激活細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮關(guān)鍵核心作用的促凋亡蛋白酶 caspase-3[22],引發(fā)線粒體凋亡通路活化,降解細(xì)胞DNA損傷修復(fù)酶,激活核酸內(nèi)切酶,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡和壞死[23-24]。本實(shí)驗(yàn)檢測京尼平使高糖損傷細(xì)胞的線粒體通路級聯(lián)反應(yīng)中的促凋亡蛋白Cyt C、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平下降,充分證明了一定濃度的京尼平抑制高糖細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷與抑制線粒體凋亡途徑有關(guān)。

    Figure 5.Western blot was used for determining the protein levels of Mn-SOD, p-Akt, Cyt C, Bax and cleaved caspase-3 in the H9c2 cardiomyocytes. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vsNC group;#P<0.05,##P<0.01vsHG group.

    圖5Westernblot檢測心肌H9c2細(xì)胞中Mn-SOD、p-Akt、CytC、Bax和cleavedcaspase-3的蛋白水平

    京尼平是位于線粒體內(nèi)膜上解偶聯(lián)蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)的特異性阻斷劑[25-27]。UCP2是一種質(zhì)子載體,在高糖信號的刺激下,可將線粒體內(nèi)膜外質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)至線粒體內(nèi),使線粒體膜電位去極化[28]。UCP2在線粒體電子傳遞鏈的能量代謝中發(fā)揮重要作用,必將與抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)密切相關(guān)[29-31],我們將進(jìn)一步研究抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)與能量代謝之間的關(guān)系。

    綜上所述,京尼平對于高糖損傷的心肌細(xì)胞具有抗氧化作用,其作用機(jī)制與減少氧化應(yīng)激產(chǎn)物的釋放,平衡抗氧化應(yīng)激酶系統(tǒng),抑制線粒體凋亡途徑有關(guān),將為新型抗氧化劑應(yīng)用于防治糖尿病心肌病并發(fā)癥提供理論基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    膜電位高糖心肌細(xì)胞
    左歸降糖舒心方對糖尿病心肌病MKR鼠心肌細(xì)胞損傷和凋亡的影響
    有關(guān)動(dòng)作電位的“4坐標(biāo)2比較”
    參芪復(fù)方對GK大鼠骨骼肌線粒體膜電位及相關(guān)促凋亡蛋白的影響研究
    活血解毒方對缺氧/復(fù)氧所致心肌細(xì)胞凋亡的影響
    葛根素對高糖誘導(dǎo)HUVEC-12細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用
    中成藥(2018年6期)2018-07-11 03:01:04
    丹紅注射液對高糖引起腹膜間皮細(xì)胞損傷的作用
    中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:18:21
    心肌細(xì)胞慢性缺氧適應(yīng)性反應(yīng)的研究進(jìn)展
    槲皮素通過抑制蛋白酶體活性減輕心肌細(xì)胞肥大
    張掖市甜菜高產(chǎn)高糖栽培技術(shù)
    長江蔬菜(2015年3期)2015-03-11 15:10:29
    魚藤酮誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡及線粒體膜電位變化
    日韩成人av中文字幕在线观看| 午夜老司机福利剧场| 26uuu在线亚洲综合色| 国产一区二区三区综合在线观看 | 中文字幕久久专区| 久久国内精品自在自线图片| 各种免费的搞黄视频| 精品熟女少妇av免费看| 免费观看av网站的网址| 免费大片黄手机在线观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 日本爱情动作片www.在线观看| av免费观看日本| 精品国产露脸久久av麻豆| 99久久精品一区二区三区| 免费在线观看成人毛片| 嫩草影院新地址| 免费播放大片免费观看视频在线观看| www.av在线官网国产| 日韩视频在线欧美| 色视频www国产| 综合色丁香网| 亚洲伊人久久精品综合| 国产av精品麻豆| av在线老鸭窝| a 毛片基地| 青青草视频在线视频观看| 久久精品国产自在天天线| 国产有黄有色有爽视频| 乱码一卡2卡4卡精品| 日本欧美国产在线视频| 亚洲av福利一区| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 久久亚洲国产成人精品v| 欧美成人午夜免费资源| 在现免费观看毛片| 免费av中文字幕在线| 极品教师在线视频| 午夜激情久久久久久久| 日韩人妻高清精品专区| 国产在线免费精品| 成人黄色视频免费在线看| 日韩欧美 国产精品| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 亚洲av二区三区四区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| av一本久久久久| 视频中文字幕在线观看| 国产精品久久久久久av不卡| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲国产精品国产精品| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲第一区二区三区不卡| 91aial.com中文字幕在线观看| 日韩av免费高清视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲精品一区蜜桃| 免费看光身美女| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 精品少妇久久久久久888优播| 国产美女午夜福利| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲av二区三区四区| 日本色播在线视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国内精品宾馆在线| 丁香六月天网| 伦理电影大哥的女人| 国产熟女午夜一区二区三区 | 人人妻人人看人人澡| 我的老师免费观看完整版| 99久久精品热视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 亚洲av成人精品一区久久| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 丰满人妻一区二区三区视频av| 内射极品少妇av片p| 国产成人aa在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 在线观看www视频免费| 国产高清三级在线| 欧美日韩综合久久久久久| 搡女人真爽免费视频火全软件| 天美传媒精品一区二区| 另类精品久久| kizo精华| 这个男人来自地球电影免费观看 | 精品一区二区三区视频在线| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 尾随美女入室| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 久久ye,这里只有精品| 国产成人aa在线观看| 午夜免费观看性视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 一本色道久久久久久精品综合| 日韩免费高清中文字幕av| 十八禁高潮呻吟视频 | 国产 精品1| 赤兔流量卡办理| 亚洲精品aⅴ在线观看| 一边亲一边摸免费视频| 老司机影院成人| 亚洲第一av免费看| 久久99一区二区三区| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产精品久久久久成人av| 新久久久久国产一级毛片| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 久久国内精品自在自线图片| av在线老鸭窝| 男女免费视频国产| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 91精品国产国语对白视频| 欧美+日韩+精品| 亚洲丝袜综合中文字幕| 欧美成人精品欧美一级黄| av女优亚洲男人天堂| 美女cb高潮喷水在线观看| 晚上一个人看的免费电影| av播播在线观看一区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产高清三级在线| 男人添女人高潮全过程视频| 成人亚洲欧美一区二区av| 九草在线视频观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 3wmmmm亚洲av在线观看| 一本色道久久久久久精品综合| 欧美bdsm另类| 一区在线观看完整版| 丰满乱子伦码专区| 午夜免费鲁丝| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲av综合色区一区| 超碰97精品在线观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 成人黄色视频免费在线看| 91精品伊人久久大香线蕉| 涩涩av久久男人的天堂| 日韩欧美 国产精品| av天堂久久9| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 免费大片黄手机在线观看| 一区二区av电影网| 最近手机中文字幕大全| 丝袜喷水一区| 色5月婷婷丁香| 国产毛片在线视频| 国产高清不卡午夜福利| av又黄又爽大尺度在线免费看| 丝袜脚勾引网站| 中国美白少妇内射xxxbb| 久久久久精品久久久久真实原创| 插阴视频在线观看视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 日日啪夜夜撸| 国产av国产精品国产| 亚洲图色成人| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲精品国产成人久久av| 国产精品蜜桃在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 精品久久久久久久久av| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲av男天堂| 欧美日韩av久久| 欧美+日韩+精品| 美女国产视频在线观看| 欧美性感艳星| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 欧美区成人在线视频| 欧美最新免费一区二区三区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久精品国产亚洲av涩爱| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产精品伦人一区二区| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲av国产av综合av卡| 免费观看无遮挡的男女| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲精品自拍成人| 久久精品久久精品一区二区三区| av在线app专区| 男的添女的下面高潮视频| 嫩草影院新地址| 一个人免费看片子| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产成人a∨麻豆精品| 精品视频人人做人人爽| 欧美精品一区二区免费开放| 国模一区二区三区四区视频| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 大香蕉97超碰在线| 亚洲精品一二三| 少妇人妻 视频| 国产精品一区www在线观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 午夜激情久久久久久久| 丝袜在线中文字幕| 精品国产露脸久久av麻豆| 国国产精品蜜臀av免费| 久久久久久人妻| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 久久青草综合色| 精品久久久噜噜| 哪个播放器可以免费观看大片| av不卡在线播放| 麻豆成人av视频| 五月玫瑰六月丁香| 妹子高潮喷水视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 精品少妇久久久久久888优播| 精品久久久噜噜| 精品久久久久久久久亚洲| 在线 av 中文字幕| 国产成人精品福利久久| 有码 亚洲区| 99热这里只有精品一区| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产精品国产三级专区第一集| 午夜福利影视在线免费观看| 人妻一区二区av| 亚洲国产欧美在线一区| 国产精品蜜桃在线观看| 免费观看在线日韩| 日韩成人av中文字幕在线观看| 日韩视频在线欧美| 亚洲天堂av无毛| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久鲁丝午夜福利片| 午夜激情久久久久久久| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲精品一二三| 亚洲怡红院男人天堂| 精品卡一卡二卡四卡免费| 天堂俺去俺来也www色官网| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲人与动物交配视频| 秋霞伦理黄片| 久久免费观看电影| 精品少妇内射三级| 18+在线观看网站| 亚洲av.av天堂| 超碰97精品在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 七月丁香在线播放| 欧美成人精品欧美一级黄| 日韩av不卡免费在线播放| 99九九在线精品视频 | 九色成人免费人妻av| 91精品国产九色| 两个人的视频大全免费| videossex国产| 欧美激情国产日韩精品一区| 一级a做视频免费观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产亚洲5aaaaa淫片| 免费观看的影片在线观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 2018国产大陆天天弄谢| av线在线观看网站| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 亚洲国产精品999| 午夜激情久久久久久久| 国产乱人偷精品视频| 免费观看a级毛片全部| 国产黄色视频一区二区在线观看| .国产精品久久| 校园人妻丝袜中文字幕| 免费看不卡的av| 爱豆传媒免费全集在线观看| 久久精品国产亚洲av天美| av在线观看视频网站免费| 国产精品嫩草影院av在线观看| 免费av不卡在线播放| 在线观看美女被高潮喷水网站| 日韩一区二区视频免费看| 亚州av有码| 国产深夜福利视频在线观看| 国产精品无大码| 亚洲欧美一区二区三区国产| 全区人妻精品视频| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产成人午夜福利电影在线观看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲av在线观看美女高潮| 五月伊人婷婷丁香| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 高清黄色对白视频在线免费看 | 国产永久视频网站| 亚洲欧美清纯卡通| 国产精品.久久久| 一级毛片久久久久久久久女| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲av.av天堂| 久久久久久人妻| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产乱来视频区| 亚洲精品aⅴ在线观看| 一本久久精品| 亚洲av二区三区四区| 国产高清有码在线观看视频| 伦精品一区二区三区| 国产高清国产精品国产三级| 秋霞伦理黄片| 一边亲一边摸免费视频| 国产成人精品一,二区| 女人精品久久久久毛片| 免费黄网站久久成人精品| 精品久久久久久久久亚洲| 丰满饥渴人妻一区二区三| 日韩av在线免费看完整版不卡| 女性被躁到高潮视频| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲精品国产av成人精品| 国产男女超爽视频在线观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 亚洲精品国产色婷婷电影| 黄色欧美视频在线观看| 日韩三级伦理在线观看| 久久久a久久爽久久v久久| 美女国产视频在线观看| 国产在线一区二区三区精| 美女主播在线视频| 国产精品久久久久久精品古装| 久久99精品国语久久久| 日韩一区二区三区影片| 日韩一本色道免费dvd| 欧美日韩av久久| 九九在线视频观看精品| 国产精品免费大片| 十八禁高潮呻吟视频 | 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 亚洲精品,欧美精品| 免费在线观看成人毛片| 男女边摸边吃奶| 国产成人aa在线观看| 国产永久视频网站| 国产美女午夜福利| 久久免费观看电影| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲av欧美aⅴ国产| 久久久久网色| 日韩欧美 国产精品| 日本欧美国产在线视频| 男女免费视频国产| 在线 av 中文字幕| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 女性被躁到高潮视频| 在线看a的网站| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 大话2 男鬼变身卡| 日韩亚洲欧美综合| 两个人的视频大全免费| a 毛片基地| 亚洲av欧美aⅴ国产| a 毛片基地| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产 精品1| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 少妇 在线观看| 日韩av不卡免费在线播放| 在线免费观看不下载黄p国产| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲精品第二区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产乱来视频区| 街头女战士在线观看网站| 99热这里只有是精品在线观看| 街头女战士在线观看网站| 国产精品久久久久久精品古装| 国产熟女午夜一区二区三区 | h日本视频在线播放| 国产成人a∨麻豆精品| av福利片在线观看| 亚洲精品国产av成人精品| 日本-黄色视频高清免费观看| 99久国产av精品国产电影| 国产免费一级a男人的天堂| 欧美日韩av久久| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 日韩大片免费观看网站| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 亚洲第一av免费看| 亚洲欧洲日产国产| 国产午夜精品一二区理论片| 伦理电影免费视频| 人妻一区二区av| 国产黄片视频在线免费观看| 午夜福利,免费看| 日本av手机在线免费观看| 大香蕉久久网| 精品国产国语对白av| 精品国产露脸久久av麻豆| 热99国产精品久久久久久7| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 最近2019中文字幕mv第一页| 久久久午夜欧美精品| 超碰97精品在线观看| 99热国产这里只有精品6| 亚洲不卡免费看| 国产成人免费观看mmmm| 中文字幕久久专区| 伦理电影免费视频| 97在线人人人人妻| 看非洲黑人一级黄片| 久久99热6这里只有精品| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产男女内射视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 妹子高潮喷水视频| 视频区图区小说| 91成人精品电影| 一级片'在线观看视频| 两个人免费观看高清视频 | av有码第一页| 午夜老司机福利剧场| 永久网站在线| 欧美xxxx性猛交bbbb| 只有这里有精品99| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 搡女人真爽免费视频火全软件| 丝袜喷水一区| 国产精品欧美亚洲77777| 日韩成人伦理影院| av在线播放精品| 欧美最新免费一区二区三区| 老司机亚洲免费影院| 伊人亚洲综合成人网| 五月天丁香电影| 永久网站在线| 三级国产精品片| av免费观看日本| 久久久久久久久久久丰满| 777米奇影视久久| 两个人免费观看高清视频 | 熟女电影av网| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲不卡免费看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 少妇的逼水好多| 久久青草综合色| 国产av码专区亚洲av| 国产片特级美女逼逼视频| 国产亚洲5aaaaa淫片| 成年av动漫网址| 中国三级夫妇交换| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 中文字幕av电影在线播放| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 麻豆乱淫一区二区| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产色婷婷99| 视频中文字幕在线观看| 欧美区成人在线视频| 国产成人aa在线观看| 日韩av不卡免费在线播放| 欧美精品亚洲一区二区| 日韩一本色道免费dvd| 精品一区二区三区视频在线| 高清午夜精品一区二区三区| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 我的老师免费观看完整版| 欧美丝袜亚洲另类| 久久久久久伊人网av| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 免费观看性生交大片5| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲人与动物交配视频| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产淫语在线视频| 久久久久久久精品精品| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产亚洲一区二区精品| 国产成人免费观看mmmm| 91精品一卡2卡3卡4卡| 毛片一级片免费看久久久久| 精品人妻偷拍中文字幕| 99热这里只有精品一区| 午夜久久久在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 热99国产精品久久久久久7| 国产精品福利在线免费观看| 丁香六月天网| 成人漫画全彩无遮挡| 黑丝袜美女国产一区| 欧美日韩av久久| 最黄视频免费看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 一级二级三级毛片免费看| av天堂中文字幕网| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲成人手机| 边亲边吃奶的免费视频| 欧美 日韩 精品 国产| 精品午夜福利在线看| 中文资源天堂在线| 国产在视频线精品| av在线观看视频网站免费| av黄色大香蕉| 亚洲精品国产色婷婷电影| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美精品亚洲一区二区| 精品国产一区二区久久| 秋霞伦理黄片| av卡一久久| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 高清毛片免费看| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲中文av在线| 下体分泌物呈黄色| 最新中文字幕久久久久| 成人午夜精彩视频在线观看| 91久久精品国产一区二区成人| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲国产成人一精品久久久| 精品久久国产蜜桃| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 最近的中文字幕免费完整| 精品久久久久久电影网| 欧美高清成人免费视频www| 国产免费一区二区三区四区乱码| 日日啪夜夜撸| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产亚洲最大av| 国产精品一区二区在线观看99| 熟女人妻精品中文字幕| 日韩精品有码人妻一区| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲国产最新在线播放| av播播在线观看一区| 在线观看一区二区三区激情| 色视频在线一区二区三区| 大话2 男鬼变身卡| 中文字幕免费在线视频6| 丰满乱子伦码专区| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 色视频www国产| 亚州av有码| 亚洲国产日韩一区二区| 国产成人aa在线观看| www.色视频.com| 久久av网站| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲美女黄色视频免费看| 欧美一级a爱片免费观看看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 伊人亚洲综合成人网| 亚洲av在线观看美女高潮| 丰满迷人的少妇在线观看| .国产精品久久| 女性被躁到高潮视频| 日日啪夜夜撸| 在线观看人妻少妇| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 久久久久网色| 亚洲精品,欧美精品| 一级爰片在线观看| 久久青草综合色| 久久免费观看电影| 精品亚洲成国产av| 综合色丁香网| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 久久精品国产亚洲av天美| 99九九线精品视频在线观看视频| 在线看a的网站| 高清毛片免费看| 9色porny在线观看| 制服丝袜香蕉在线| 亚洲美女搞黄在线观看| 18禁在线播放成人免费| 亚洲欧美精品自产自拍| 免费黄网站久久成人精品| 青春草亚洲视频在线观看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 中文字幕亚洲精品专区| 久久久久人妻精品一区果冻| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产91av在线免费观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 国产一区二区三区av在线| 久久狼人影院| 精品卡一卡二卡四卡免费| 日本av免费视频播放| a级一级毛片免费在线观看| 日韩免费高清中文字幕av| 精品国产乱码久久久久久小说| 男人添女人高潮全过程视频| 视频中文字幕在线观看|