高危型人乳頭瘤病毒載量對(duì)不同宮頸病變調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞表達(dá)的影響研究

余楊，付艷麗，孫翔

高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）持續(xù)性感染是導(dǎo)致宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）及宮頸癌的主要病因［1-4］。發(fā)達(dá)國(guó)家建立的完善篩查體系，使宮頸癌的發(fā)病率和病死率顯著下降，新發(fā)病例居于全身惡性腫瘤的第10位，而在發(fā)展中國(guó)家，新發(fā)病例位于第2位［5］。由此可見(jiàn)，基于HR-HPV建立可進(jìn)一步分選出高級(jí)別CIN和宮頸癌高危人群的合理篩查體系很重要和迫切。腫瘤是多種因素共同作用的結(jié)果，HR-HPV持續(xù)性感染是宮頸癌發(fā)生的必要條件，卻非唯一致病條件，HR-HPV感染后誘發(fā)的宮頸病變轉(zhuǎn)歸與機(jī)體免疫功能，尤其是宮頸局部微環(huán)境免疫功能密切相關(guān)［6］。機(jī)體免疫調(diào)控復(fù)雜多樣，免疫細(xì)胞之間，外來(lái)抗原HR-HPV和免疫細(xì)胞之間，HR-HPV、免疫細(xì)胞與局部微環(huán)境之間均存在相互制約、相互調(diào)節(jié)的交互作用和交聯(lián)影響。免疫抑制細(xì)胞構(gòu)筑的免疫抑制微環(huán)境通過(guò)免疫耐受、免疫逃逸等機(jī)制促進(jìn)宮頸病變的進(jìn)展［7］，調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞（Treg）是一群發(fā)揮免疫抑制功能的獨(dú)特輔助性T淋巴細(xì)胞亞群，叉頭翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3（Foxp3）是Treg的特征性分子標(biāo)志，可對(duì)腫瘤免疫應(yīng)答從啟動(dòng)到效應(yīng)的整個(gè)階段全程調(diào)控。本研究同步監(jiān)測(cè)宮頸局部微環(huán)境HR-HPV載量和Treg變化，探討其與宮頸病變進(jìn)程的聯(lián)系和發(fā)展趨勢(shì)，為HR-HPV持續(xù)性感染者更深入地分流診治提供臨床依據(jù)。

本研究背景：

宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展是多種因素參與調(diào)控的復(fù)雜過(guò)程，僅高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)DNA突變是不夠的，還需在慢性炎癥的持續(xù)刺激下不斷累積變異，再加上微環(huán)境改變腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性，發(fā)生惡性特征轉(zhuǎn)化的強(qiáng)大激活信號(hào)，基因組、微環(huán)境、炎癥和免疫體系發(fā)生改變的綜合結(jié)果導(dǎo)致了癌變的風(fēng)險(xiǎn)，因此，HR-HPV持續(xù)性感染是宮頸癌發(fā)生的必要條件而非充分條件，基于HR-HPV感染并能方便、無(wú)創(chuàng)、準(zhǔn)確量化地反映宮頸癌生物學(xué)行為變化的標(biāo)志物是臨床重點(diǎn)。目前宮頸局部微環(huán)境中HR-HPV載量對(duì)調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞（Treg）表達(dá)的影響及其兩者同時(shí)在HR-HPV免疫逃逸和宮頸病變進(jìn)程中相互作用的報(bào)道較少。本研究圍繞HR-HPV抗原既可激發(fā)免疫反應(yīng)又可負(fù)向抑制免疫反應(yīng)的特點(diǎn)，探討不同微環(huán)境誘導(dǎo)的Treg表達(dá)差異對(duì)宮頸病變進(jìn)程或促進(jìn)或抑制的雙向影響，為宮頸癌前病變以及宮頸癌個(gè)性化診療方案提供實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)和臨床思路。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2012年1月—2015年7月河南理工大學(xué)第一附屬醫(yī)院經(jīng)液基薄層細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)（TCT）篩查、HR-HPV基因分型檢測(cè)〔聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）-反向點(diǎn)雜交法〕，最終經(jīng)陰道鏡下宮頸多點(diǎn)病理活檢確診的HR-HPV持續(xù)性感染的不同宮頸病變患者342例，年齡38～55歲；其中慢性宮頸炎55例、CINⅠ級(jí)73例、CINⅡ級(jí)71例、CINⅢ級(jí)72例、宮頸癌71例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）有1年以上性生活史；（2）經(jīng)2名以上有經(jīng)驗(yàn)病理科醫(yī)師確診；（3）患者本人知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）妊娠期婦女；（2）合并其他惡性腫瘤或自身免疫性疾?。唬?）近期使用過(guò)免疫抑制類(lèi)藥物；（4）人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）陽(yáng)性；（5）有放化療史；（6）2周內(nèi)接受過(guò)局部或全身抗病毒藥物治療。HR-HPV持續(xù)性感染的定義：HR-HPV感染者隨訪(fǎng)1次/6個(gè)月，在間隔6～12個(gè)月相鄰兩次隨訪(fǎng)中，同一例患者宮頸檢測(cè)樣本均顯示HR-HPV陽(yáng)性且為同種類(lèi)型，修改為第1年隨訪(fǎng)1次/4個(gè)月，以后至少1次/6個(gè)月（依據(jù)病情動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)），持續(xù)時(shí)間均在2年以上［8-9］。

1.2 主要儀器與試劑 流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)BD FACS Calibur，配有BD CellQuest軟件。試劑：鼠抗人異硫氰酸熒光素（FITC）-CD4單克隆抗體、鼠抗人PE-CD25單克隆抗體、鼠抗人PE-Cy5-Foxp3單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)eBioscience公司。PCR擴(kuò)增儀DA7600型和HRHPV核酸定量（16、18、31、33、45、52、56、58共8個(gè)型）檢測(cè)試劑盒均由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 采用宮頸刷取物制備宮頸病變單細(xì)胞懸液 采用陰道窺器暴露宮頸，干棉球拭凈宮頸口過(guò)多分泌物，觀(guān)察宮頸，將刷頭插入宮頸管，中央較長(zhǎng)的刷絲針對(duì)準(zhǔn)新鮮病變部位，順時(shí)針或逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)3～5圈，取下刷頭，并將其浸泡在含液基細(xì)胞學(xué)保存液的瓶中，300目尼龍網(wǎng)過(guò)濾雜質(zhì)，取10 ml保存液轉(zhuǎn)入15 ml試管，402×g離心5 min，棄上清液，取2 ml沉淀液，以磷酸鹽緩沖液（PBS）漂洗2～3次，45×g離心沉淀1～2 min，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，不少于106個(gè)。

1.3.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)單細(xì)胞懸液中Treg 調(diào)整細(xì)胞濃度至（1～2）×107個(gè)/ml，用PBS洗滌、重懸，取上述細(xì)胞100 μl，加入鼠抗人FITC-CD4單克隆抗體、鼠抗人PE-CD25單克隆抗體各5 μl，混勻，室溫避光20 min，加冷固定破膜劑1 ml，4 ℃避光孵育30 min，加破膜緩沖液2 ml，洗滌2次，棄上清液，加鼠抗人PE-Cy5-Foxp3單克隆抗體進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)染色，4 h內(nèi)進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)。用空白管調(diào)節(jié)電壓，以CD25同型對(duì)照調(diào)節(jié)補(bǔ)償，確定細(xì)胞群，再以細(xì)胞設(shè)門(mén)，以Foxp3同型對(duì)照確定陽(yáng)性信號(hào)，最后測(cè)定C管，檢測(cè)Foxp3+細(xì)胞占C細(xì)胞的百分比。

1.3.3 HR-HPV載量檢測(cè) 無(wú)菌條件下采用宮頸刷插入宮頸內(nèi)，旋轉(zhuǎn)數(shù)圈后停留片刻取出，將宮頸刷置入無(wú)菌管，采集的宮頸分泌物及時(shí)送檢或4 ℃保存1周內(nèi)檢測(cè)。DNA提取和PCR擴(kuò)增按其說(shuō)明書(shū)（PCR熒光法）進(jìn)行具體操作。根據(jù)HR-HPV載量拷貝數(shù)分為4組：低載量組（104～105copies/ml）69例、中載量組（＞105～106copies/ml）90例、高載量組（＞106～107copies/ml）106例、超高載量組（＞107copies/ml）77例。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料以M（P25，P75）表示，HR-HPV載量經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，多組間比較采用秩和檢驗(yàn)，組間兩兩比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson簡(jiǎn)單相關(guān)分析及偏相關(guān)分析；選用簡(jiǎn)單和復(fù)式箱型圖解析數(shù)據(jù)分布，繪制散點(diǎn)圖加趨勢(shì)擬合線(xiàn)描述線(xiàn)性關(guān)系。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 繪制HR-HPV載量標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) PCR熒光法閾值設(shè)定原則是值線(xiàn)剛好超過(guò)正常陰性樣品擴(kuò)增曲線(xiàn)的最高點(diǎn)，且循環(huán)閾值（Ct）不出現(xiàn)任何數(shù)值。以標(biāo)準(zhǔn)品4個(gè)濃度（1×103～1×106copies/ml）的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，Ct為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（見(jiàn)圖1）。Ct與樣本起始模板的拷貝數(shù)呈正相關(guān)，與起始模板拷貝數(shù)對(duì)數(shù)值間有嚴(yán)格的線(xiàn)性反比關(guān)系。

圖1 PCR熒光法檢測(cè)HR-HPV載量的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Figure 1 Standard curve of HR-HPV load detected by QF-PCR

2.2 低載量組、中載量組、高載量組、超高載量組患者年齡及Treg比較 低載量組、中載量組、高載量組、超高載量組患者年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。低載量組、中載量組、高載量組、超高載量組患者Treg比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中中載量組、高載量組、超高載量組患者Treg較低載量組升高，高載量組、超高載量組患者Treg較中載量組升高，超高載量組患者Treg較高載量組升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見(jiàn)表1）。復(fù)式箱型圖顯示各組均無(wú)異常值，HR-HPV載量逐步增加，Treg分布愈加分散，超高載量組Treg分布最分散，低、中載量組Treg分布較為集中（見(jiàn)圖2）。

2.3 慢性宮頸炎、CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)、宮頸癌患者年齡、Treg及HR-HPV載量比較 慢性宮頸炎、CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)、宮頸癌患者年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。慢性宮頸炎、CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)、宮頸癌患者Treg、HR-HPV載量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中CINⅠ級(jí)患者Treg較慢性宮頸炎升高，CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)、宮頸癌患者Treg、HR-HPV載量較慢性宮頸炎、CINⅠ級(jí)升高，CINⅢ級(jí)患者Treg較CINⅡ級(jí)升高，宮頸癌患者Treg、HR-HPV載量較CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見(jiàn)表2）。復(fù)式箱型圖顯示在慢性宮頸炎中有1個(gè)溫和的異常值，其余病變組無(wú)異常值，隨宮頸病變程度的加重，Treg分布愈加分散，宮頸癌組Treg分布最分散，低宮頸病變Treg分布較為集中（見(jiàn)圖3）；在慢性宮頸炎和宮頸癌中共有3個(gè)溫和的異常值，其余病變組無(wú)異常值，隨宮頸病變程度的加重，HR-HPV載量分布趨向分散，宮頸癌組HRHPV載量分布最分散，低宮頸病變HR-HPV載量分布較為集中（見(jiàn)圖4）。

表1 低載量組、中載量組、高載量組、超高載量組患者年齡及Treg比較〔M（P25，P75）〕Table 1 Comparison of age and number of Treg in patients with different cervical lesions by HR-HPV load

圖2 低載量組、中載量組、高載量組、超高載量組患者Treg分布Figure 2 Distribution of the number of Treg in patients with different cervical lesions by HR-HPV load

2.4 低載量組、中載量組、高載量組、超高載量組不同病變患者分布 低載量組、中載量組、高載量組、超高載量組宮頸病變分布比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見(jiàn)表3）。復(fù)式箱型圖顯示，在低、中載量組不同宮頸病變的Treg分布較為集中，高、超高載量組不同宮頸病變的Treg分布更加分散，特別是宮頸癌組數(shù)值波動(dòng)幅度較大；低級(jí)別宮頸病變不同載量組中Treg集中分布趨勢(shì)明顯，僅CINⅠ級(jí)在高載量組有小幅波動(dòng)，高級(jí)別CIN和宮頸癌在低、中載量組Treg分布較為集中，在高、超高載量組數(shù)據(jù)分散，波動(dòng)明顯，幅度較大（見(jiàn)圖5）。

2.5 相關(guān)性分析 簡(jiǎn)單相關(guān)分析顯示，HR-HPV載量與宮頸病變、Treg呈正相關(guān)（r=0.631、0.683，P＜0.05），組別與宮頸病變、Treg呈正相關(guān)（r=0.612、0.686，P＜0.05），宮頸病變與Treg呈正相關(guān)（r=0.863，P＜0.05）?？刂平M別后，偏相關(guān)分析顯示，HR-HPV載量與宮頸病變、Treg呈正相關(guān)（r=0.204、0.137，P＜0.05）， 宮 頸 病 變 與 Treg呈 正 相 關(guān)（r=0.770，P＜0.05）?？刂芓reg后，偏相關(guān)分析顯示，宮頸病變與HR-HPV載量呈正相關(guān)（r=0.114，P＜0.05），組別與宮頸病變無(wú)直線(xiàn)相關(guān)關(guān)系（r=0.053，P＞0.05）。以組別為橫坐標(biāo)，Treg為縱坐標(biāo)，宮頸病變作為點(diǎn)標(biāo)簽繪制散點(diǎn)圖并添加總體趨勢(shì)擬合線(xiàn)（R2=0.572），結(jié)果顯示，此三變量之間存在線(xiàn)性關(guān)系，子變量慢性宮頸炎、CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)、宮頸癌的趨勢(shì)擬合線(xiàn)決定系數(shù)R2依次為0.559、0.339、0.653、0.546、0.085。不同宮頸病變與HR-HPV載量、Treg的擬合線(xiàn)決定系數(shù)R2分別為0.399和0.789（見(jiàn)圖6）。

表2 慢性宮頸炎、CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)、宮頸癌患者年齡、Treg及HR-HPV載量比較〔M（P25，P75）〕Table 2 Comparison of age，number of Treg and HR-HPV load in patients with chronic cervicitis，CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ and squamous carcinoma of the cervix

圖3 慢性宮頸炎、CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)、宮頸癌患者Treg分布Figure 3 Distribution of the number of Treg in patients with chronic cervicitis，CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ and squamous carcinoma of the cervix

3 討論

圖4 慢性宮頸炎、CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)、宮頸癌患者HR-HPV載量分布Figure 4 Distribution of the level of HR-HPV load in patients with chronic cervicitis，CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ and squamous carcinoma of the cervix

表3 低載量組、中載量組、高載量組、超高載量組不同病變患者分布Table 3 Distribution of different cervical lesions in patients by the level of HR-HPV load

宮頸病變階梯式緩慢演變進(jìn)程，加之病因明確、方便取材的優(yōu)勢(shì)，預(yù)示著宮頸癌是可以早預(yù)防、早發(fā)現(xiàn)、早治療的，但事實(shí)并不似預(yù)期，我國(guó)每年新發(fā)宮頸癌患者多達(dá)13萬(wàn)，發(fā)病年輕化趨勢(shì)明顯，10年間下降約5歲［10］?；煛⑹中g(shù)和放射等傳統(tǒng)療法難以根治殘留的小病灶或微轉(zhuǎn)移灶，35%左右的患者因復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移死亡［11］，以激活抗腫瘤免疫為基礎(chǔ)的免疫治療，其臨床療效并不理想，這與腫瘤細(xì)胞所處的腫瘤微環(huán)境關(guān)系密切［12］，主要是免疫抑制微環(huán)境負(fù)向調(diào)控作用的強(qiáng)大。很多病變的早期，機(jī)體的全身免疫功能并未出現(xiàn)明顯的改變，但病變局部即已存在免疫抑制。文獻(xiàn)報(bào)道，Treg表達(dá)強(qiáng)度與HPV-16基因所致宮頸癌變關(guān)系密切［13］。本研究結(jié)果顯示，HR-HPV載量在宮頸癌變期有相對(duì)較大的浮動(dòng)，在慢性宮頸炎/CINⅠ級(jí)之間以及CINⅡ級(jí)/CINⅢ級(jí)之間HR-HPV載量差異不明顯，提示HRHPV載量與宮頸病變的嚴(yán)重程度不總是同步的，一定范圍內(nèi)HR-HPV載量越高，觸發(fā)的抗HR-HPV免疫應(yīng)答越強(qiáng)，適當(dāng)?shù)拿庖邞?yīng)答有利于HR-HPV清除，但過(guò)度的免疫應(yīng)答反過(guò)來(lái)?yè)p壞免疫功能和靶向組織器官功能，使機(jī)體處于HR-HPV感染和免疫功能受損的惡性循環(huán)中。HR-HPV載量不能作為區(qū)分宮頸病變程度良好的量化指標(biāo)，但高/超高的HR-HPV載量仍有預(yù)警作用，可間接反映機(jī)體對(duì)病毒的清除能力和感染輕重。相關(guān)分析顯示，HR-HPV載量、宮頸病變、Treg均呈正相關(guān)，宮頸病變與Treg高度相關(guān)；偏相關(guān)分析顯示：控制組別后，宮頸病變與Treg仍呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)較簡(jiǎn)單相關(guān)分析稍微下降；控制Treg后，宮頸病變與組別間不再有直線(xiàn)相關(guān)性。提示HR-HPV載量、Treg、宮頸病變3個(gè)變量之間存在交互影響，Treg較HR-HPV載量與宮頸病變進(jìn)展更具相關(guān)性，HR-HPV持續(xù)感染是宮頸病變進(jìn)展惡化過(guò)程中必要條件的第一步，宮頸局部微環(huán)境免疫失衡是關(guān)鍵環(huán)節(jié)，推測(cè)病變進(jìn)展到重度CIN和宮頸癌程度后，細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化可能不再依賴(lài)HR-HPV的高載量。

圖5 低載量組、中載量組、高載量組、超高載量組不同病變患者Treg分布Figure 5 Distribution of the number of Treg in patients with different cervical lesions by the level of HR-HPV load

圖6 低載量組、中載量組、高載量組、超高載量組不同病變患者Treg分布Figure 6 Distribution of the number of Treg in patients with different cervical lesions by the level of HR-HPV load

HR-HPV感染不是全身的，不形成病毒血癥。腫瘤微環(huán)境是有別于人體正常內(nèi)環(huán)境的復(fù)雜系統(tǒng)，具有低氧、低pH值及高壓的特點(diǎn)，使效應(yīng)T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)功能狀態(tài)，隨后凋亡，從而損害抗腫瘤免疫反應(yīng)，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中至關(guān)重要［14］。腫瘤微環(huán)境具有異質(zhì)性，不同的個(gè)體、不同的腫瘤，甚至在同一個(gè)體的不同部位，均面對(duì)不同的免疫微環(huán)境，腫瘤免疫治療的療效存在明顯的個(gè)體差異，目前多將此歸于腫瘤微環(huán)境的異質(zhì)性［15］。本研究發(fā)現(xiàn)，不同HR-HPV載量組別和不同宮頸病變患者Treg均有明顯差異，在超高的病毒載量作用下和宮頸癌變期，Treg分散趨勢(shì)明顯，波動(dòng)明顯，幅度較大，提示HR-HPV載量越高、宮頸病變?cè)街?，宮頸局部免疫抑制微環(huán)境組成的異質(zhì)性越顯著，個(gè)體差異越大，治療方面應(yīng)突出個(gè)性化的特點(diǎn)；復(fù)式箱型圖直觀(guān)地顯示了HR-HPV誘導(dǎo)的Treg表達(dá)強(qiáng)度在增加宮頸病變這一變量后數(shù)值分布的多樣性，提示宮頸局部免疫抑制微環(huán)境異質(zhì)性的復(fù)雜多變，組成上和功能上的異質(zhì)性，為此在注重個(gè)體化治療的同時(shí)，密切監(jiān)測(cè)微環(huán)境的動(dòng)態(tài)變化，及時(shí)調(diào)整，至關(guān)重要；在判定HR-HPV載量與Treg的相關(guān)性上，若將宮頸病變視為整體考量，其所起的決定作用為0.572，慢性宮頸炎、CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)、宮頸癌所起的決定作用依次為0.559、0.339、0.653、0.546、0.085，換言之，宮頸癌變期宮頸局部免疫抑制微環(huán)境異質(zhì)性最復(fù)雜。通過(guò)上述統(tǒng)計(jì)學(xué)分析推測(cè)，宮頸癌變期和超高的病毒載量在宮頸局部免疫抑制微環(huán)境異質(zhì)性上發(fā)揮了更大和更為復(fù)雜的作用，在不同程度宮頸病變、不同HR-HPV載量中Treg表達(dá)量及其發(fā)揮的功能并由此產(chǎn)生的重要作用并不相同。Treg的免疫抑制作用在HR-HPV相關(guān)性宮頸病變的進(jìn)程變化中，可能因微環(huán)境的差異具有雙向性調(diào)節(jié)：（1）對(duì)HPV誘導(dǎo)的持續(xù)炎性刺激形成保護(hù)性生理防御反應(yīng)，在防止過(guò)強(qiáng)的免疫損傷和清除病原體之間維持平衡，以減緩組織病理?yè)p害；（2）免疫逃逸導(dǎo)致機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫無(wú)應(yīng)答或免疫反應(yīng)低下，促使宮頸癌變。結(jié)合本研究結(jié)果，Treg在程度較低的宮頸病變和低拷貝的病毒載量時(shí)，作用較一致，其表達(dá)水平的升高更多是一種應(yīng)激性保護(hù)防御反應(yīng)的正向作用，提示Treg在病毒感染過(guò)程中可使組織損傷程度最小化［16］，致使HR-HPV感染雖持續(xù)存在，但患者病情較輕，應(yīng)動(dòng)態(tài)監(jiān)護(hù)，持續(xù)隨訪(fǎng)。Treg在CINⅢ級(jí)/宮頸癌和高/超高拷貝的病毒載量時(shí)，三者之間不一致性更大，表現(xiàn)多樣，復(fù)雜多變。

在HR-HPV相關(guān)性宮頸病變中，細(xì)胞免疫功能狀態(tài)雖不能直接反映抗HR-HPV免疫效應(yīng)，通過(guò)聯(lián)合HR-HPV載量等指標(biāo)能較好地預(yù)測(cè)HR-HPV感染人群的宮頸病變發(fā)展進(jìn)程。腫瘤的發(fā)生和發(fā)展不僅依賴(lài)于基因突變，還與腫瘤微環(huán)境的異質(zhì)性有關(guān)，所有抗瘤和促瘤因素共同組成腫瘤微環(huán)境的免疫網(wǎng)絡(luò)，腫瘤微環(huán)境的動(dòng)態(tài)改變影響抗瘤/促瘤效應(yīng)平衡，決定腫瘤逆轉(zhuǎn)、穩(wěn)定和惡化的轉(zhuǎn)歸趨向。CD4+Treg負(fù)向調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的特性，不僅導(dǎo)致HR-HPV慢性感染長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)存在，所形成的慢性炎性微環(huán)境作為免疫微環(huán)境的重要組成部分，在宮頸病變進(jìn)展過(guò)程中作用重大，通過(guò)其異質(zhì)性和動(dòng)態(tài)演變精細(xì)調(diào)控病毒復(fù)制和機(jī)體效應(yīng)之間的相互作用。因此，基于對(duì)HR-HPV感染引發(fā)人體病變的整體認(rèn)識(shí)，從宮頸局部微環(huán)境入手，兼顧正向和負(fù)向調(diào)控機(jī)制，此外，考慮到腫瘤免疫抑制性微環(huán)境存在的異質(zhì)性，在宮頸癌免疫診斷和治療方面應(yīng)體現(xiàn)個(gè)體化特點(diǎn)，助推精準(zhǔn)醫(yī)療發(fā)展。

作者貢獻(xiàn)：余楊進(jìn)行文章的構(gòu)思與設(shè)計(jì)，研究的實(shí)施與可行性分析，結(jié)果的分析與解釋?zhuān)珜?xiě)論文；孫翔進(jìn)行數(shù)據(jù)收集、整理，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理；付艷麗進(jìn)行論文的修訂，負(fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制及審校；余楊、付艷麗對(duì)文章整體負(fù)責(zé)，監(jiān)督管理。

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