急性缺血性腦卒中患者血漿miR-124表達變化及其意義

謝尊椿 劉彬 周美鴻 陳永康

1南昌大學第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科（南昌330006）；2廣州醫(yī)科大學中西結合研究所（廣州510260）

急性缺血性腦卒中（AIS）是臨床常見的神經(jīng)系統(tǒng)急癥。微小RNA（micro RNA，miRNA）是內(nèi)源性的非編碼調(diào)節(jié)RNA，能與靶基因的3'UTR 區(qū)結合，抑制靶基因的轉(zhuǎn)錄［1］。已有研究［2］表明miRNA可調(diào)控細胞的增殖、分化、凋亡等生理病理過程，并與缺血性腦血管疾病的發(fā)生、發(fā)展過程關系密切。小RNA-124（miR-124）是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)特異性的miRNA［3］，相關臨床［4-6］及動物［7-8］研究顯示，在缺血性腦卒中后血漿miR-124 水平呈現(xiàn)動態(tài)變化，表現(xiàn)出成為缺血性卒中發(fā)病風險新的生物標志物的潛力。然而miR-124 與AIS 的關系及確切的作用機制尚未完全闡明。本研究旨在探索miR-124 在AIS 診斷及預后評估中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2016年2月至2017年10月，于南昌大學第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科就診AIS 患者40 例，男28 例，女12 例，平均年齡（65.03 ± 10.18）歲。對照組為無AIS 病史體檢者，共40 例，男25例，女15 例，平均年齡（63.18 ± 8.16）歲。 兩組患者的年齡、性別構成、高血壓病、冠心病、糖尿病病史差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。納入標準：2018中國急性缺血性腦卒中診治指南診斷標準及MRI和（或）CT 結果確診AIS。排除標準：合并腦出血者；合并嚴重的肝腎功能不全者；有嚴重的心、肺功能障礙；有惡性腫瘤、自身免疫性疾病。所有AIS 患者入選時均進行NIHSS 評分評價神經(jīng)功能缺損癥狀，NIHSS≤5 提示輕度神經(jīng)功能受損，NIHSS ＞5 提示中度及重度神經(jīng)功能受損。進行MRI 彌散加權成像測定梗死體積，參考文獻［9］將梗死面積＜3 cm3的納入小面積梗死組，將梗死面積＞3 cm3的納入大面積梗死組。

1.2 miRNA-124 相對定量檢測AIS 入院后24 h內(nèi)抽取靜脈血5 mL，3 000 r/min 離心分離血漿。采用TRIzol 法提取血漿總RNA。采用Takara 公司的Mir-X miRNA 第一鏈合成試劑盒進行逆轉(zhuǎn)錄。采用Takara 公司的SYBR qRT-PCR 試劑盒檢測miR-124 和U6 的表達。miR-124 上游引物：5'-CGT GTT CAC AGC GGA CCT TGA T-3'，下游引物為試劑盒提供的通用引物mRQ 3' Primer；U6 上游引物：5'-CTC GCT TCG GCA GCA CA-3'；下游引物：5'-CGC TTC ACG AAT TTG CGT GTC-3'。采用2-ΔΔCT法計算miRNA 的相對表達量。

1.3 統(tǒng)計學方法采用SPSS 16.0 進行統(tǒng)計學分析。計量資料以均數(shù)± 標準差表示，兩組間比較用t檢驗。采用Pearson 相關分析對連續(xù)資料的變量間相關性進行分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 AIS 患者血漿miR-124 水平降低AIS 患者血漿miR-124 水平檢測結果見圖1，與對照組比較，AIS 組患者的血漿miR-124 水平顯著降低，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。

圖1 AIS 患者血漿miR-124 水平Fig.1 Plasma miR-124 levels in AIS patients

2.2 AIS 患者梗死區(qū)大小與miR-124 水平的相關性將AIS 患者分為梗死體積＞3 cm3和梗死體積＜3 cm3兩個組，比較不同梗死程度AIS 患者的血漿miR-124 水平。結果如圖2 所示，梗死體積＞3 cm3的AIS 患者的血漿miR-124 水平顯著低于梗死體積＜3 cm3的AIS 患者，與梗死體積＜3 cm3組比較差異有統(tǒng)計學意義（t= 4.34，P＜0.001）。AIS患者的梗死體積與miR-124 水平的升高呈負相關（r=-0.473，P＜0.001）。

圖2 AIS 患者梗死體積與miR-124 水平的關系Fig.2 The correlation between infarction volume and miR-124 level in AIS patients

2.3 AIS 患者血漿miR-124 與NIHSS 評分的相關性將AIS 患者根據(jù)NIHSS 評分分為NIHSS ＞5 和NIHSS ≤5兩個組，比較不同神經(jīng)損傷程度AIS患者的血漿miR-124 水平。結果如圖3 所示，NIHSS ＞5的AIS患者的血漿miR-124水平顯著低于NIHSS ≤5的AIS 患者，與NIHSS ≤5 組比較差異有統(tǒng)計學意義（t=3.24，P=0.002）。AIS 患者的NIHSS 評分與miR-124 水平的升高呈負相關（r=-0.567，P＜0.001）。

圖3 AIS 患者NIHSS 評分與miR-124 水平的關系Fig.3 The correlation between NIHSS score and miR-124 level in AIS patients

3 討論

AIS 已成為導致我國居民致死和致殘的最重要的中樞神經(jīng)系統(tǒng)血管事件［10］。近年來眾多相關研究［11-12］顯示，缺血性腦卒中后組織和血漿中的miRNAs 的表達譜發(fā)生顯著變化。AIS 的發(fā)生及發(fā)展過程中，血漿miR-124 水平在不同時間點的變化尚存在爭議［4-6，13］。有研究［14］發(fā)現(xiàn)缺血性卒中患者發(fā)病后血漿miR-124 水平顯著升高，上升時間一般能夠持續(xù)48 h。還有研究［4，6］發(fā)現(xiàn)在AIS 患者發(fā)病后24 h 內(nèi)血漿miR-124 水平顯著降低。本研究通過臨床研究發(fā)現(xiàn)，AIS 患者發(fā)病后24 h 內(nèi)血漿miR-124 水平顯著降低，這與之前的研究［4，6］結果一致。本研究結果進一步豐富并完善了AIS 患者血漿miR-124 水平的變化特點，為miR-124 可用于AIS 患者的早期診斷提供了實驗證據(jù)。

此外，在AIS 患者血漿miR-124 水平與腦梗死體積及神經(jīng)功能缺損嚴重程度的相關性研究中亦存在爭議，JI 等［5］研究發(fā)現(xiàn)，AIS 患者血漿miR-124水平與梗死體積及NIHSS 評分均呈正相關。而動物研究發(fā)現(xiàn)：在大腦中動脈閉塞小鼠模型中抑制miR-124 的表達顯著增加模型小鼠的梗死體積［7］。大腦中動脈閉塞模型小鼠顱內(nèi)注射miR-124 擬似物脂質(zhì)體后，腦梗死面積顯著減少，且具有保護及改善AIS 患者神經(jīng)功能損傷的作用［15］。表明miR-124與腦梗死體積及NIHSS評分呈負相關。本研究發(fā)現(xiàn)AIS 患者的腦梗死體積及NIHSS 評分與miR-124 水平均呈負相關，結果與動物實驗研究結果一致，提示miR-124 可作為評估AIS 患者腦梗死體積及神經(jīng)功能損傷嚴重程度的潛在標志物。

綜上，本研究從AIS 患者血漿niR-124 水平、梗死體積及神經(jīng)功能損傷等方面，從臨床角度為血漿miR-124 表達水平在評估AIS 患者病情嚴重程度及預測神經(jīng)功能損傷中的應用提供了依據(jù)。本研究還存在以下不足：首先，本研究的樣本量過小，NIHSS ＞15 分的僅有1 例，造成無法準確評估m(xù)iR-124 在判斷重度神經(jīng)功能損傷中的意義。其次，未檢測AIS 患者發(fā)病后多個時間點miR-124 的表達，無法觀察miR-124 表達水平在AIS 患者中的演變規(guī)律。筆者將在未來研究中從這些方面繼續(xù)探索血漿miR-124 在AIS 中的意義，為AIS 的臨床治療提供新的思路和依據(jù)。