康太旨顆粒對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠降脂保肝作用的實(shí)驗(yàn)研究

陳學(xué)明 張佳信 楊婉婷 葉新苗#

1 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 浙江 杭州 310053

2 浙江省浦江縣中醫(yī)院 浙江 浦江 322200

康太旨顆粒是葉新苗教授治療非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）驗(yàn)方，前期研究證實(shí)其具有降血脂、改善肝功能、改善肝臟炎癥、減少肝脂肪變及纖維化等作用[1]。為進(jìn)一步研究康太旨顆粒對(duì)肝功能異常及脂質(zhì)代謝紊亂的影響，本實(shí)驗(yàn)通過建立NAFLD大鼠模型，研究其降脂保肝的作用及抗氧化作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物及飼料：SPF級(jí)別SD大鼠62只，雄性，6周齡，體重200±20g，許可證號(hào)：SCXK（浙）2014-0001，由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境設(shè)置：室溫24℃，濕度45%～75%?；A(chǔ)飼料由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。高脂飼料購自江蘇南通特洛菲飼料科技有限公司。

1.2 藥物及試劑：康太旨顆粒（由生葛根、桑葉、煅牡蠣、生玉竹各12g，炒槐花9g，桑椹子15g，制木瓜6g組成，浙江安貝特藥業(yè)有限公司，批號(hào)20170715、20170808、20171015） ；辛 伐 他 汀 片 （Merck Sharp&DohmeB.V.公司，進(jìn)口藥品注冊(cè)證號(hào)：H20130146，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字J20130068）；總膽固醇（CHOL，批 號(hào) ：20170724）、甘 油 三 酯（TG，批 號(hào) ：20170328）、低密度脂蛋白（LDL-C，批號(hào)：20161021）、高密度脂蛋白（HDL-C，批號(hào)：20171229）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT，批號(hào)：20161107）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST，批號(hào)：20160612）、載脂蛋白A1（APO-A1，批號(hào)：20160503）、載脂蛋白-B（APOB，批號(hào)20161027）、丙二醛(MDA，批號(hào)：20170921）、超氧化物歧化酶(SOD，批號(hào)：20170219）。試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組與造模：SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，隨機(jī)分為6組：正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，辛伐他汀組，太旨顆粒低、中高劑量組。模型對(duì)照組12只，其余每組10只。正常對(duì)照組給予普通飼料喂養(yǎng)，其余各組大鼠給予高脂飼料（普通飼料中添加10%豬油，4%膽固醇，0.5%膽鹽，0.4%丙基硫氧嘧啶，5%蔗糖）。造模4周，4周后模型組隨機(jī)處死3只，其余組隨機(jī)處死1只，行肝臟HE染色判斷造模是否成功。

2.2 給藥：造模成功后，空白對(duì)照組、模型對(duì)照組10ml/kg·d生理鹽水灌胃；康太旨顆粒高、中、低劑量組分別予生藥量12、6、3g/kg配制成混懸液10ml/kg·d灌胃；辛伐他汀組用辛伐他汀片碾磨成粉配制成0.008g/kg混懸液，10ml/kg·d，連續(xù)給藥6周。

2.3 標(biāo)本處理：實(shí)驗(yàn)第10周所有大鼠禁食12h（不禁水)后，稱重，各組大鼠用3%戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔內(nèi)注射麻醉后，腹主動(dòng)脈取血，離心，分裝，送實(shí)驗(yàn)室測(cè)各項(xiàng)血清指標(biāo)，并迅速摘取肝臟并稱重，計(jì)算肝臟指數(shù)。另取肝葉組織浸泡10%的福爾馬林液中固定，制作HE染色的病理切片；其余肝臟組織放入凍存管于-80℃冰箱備用。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS24.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，組間比較采用單因素方差分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（-x±s)表示。P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 各組大鼠血清APOA1、APOB比較：造模4周后，模型組血清APOA1、APOB水平較正常組顯著降低（P＜0.01）；治療6周后，與模型組比較，辛伐他汀組、康太旨顆粒低、高劑量組血清APOA1、APOB水平顯著升高（P＜0.01）；中劑量組對(duì)APOB有升高趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 各組大鼠APOA1、APOB水平比較（-x±s，mmol/L)

3.2 各組大鼠血清血脂水平比較：造模4周后，與正常組比較，模型組血清CHOL、TG、LDL-C、HDL-C水平顯著升高（P＜0.01），HDL-C水平顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，治療6周后，辛伐他汀組、康太旨顆粒三劑量組血清CHOL、TG、LDL-C、HDL-C水平顯著降低（P＜0.01），HDL-C水平顯著升高（P＜0.01）。見表2。

表2 各組大鼠血清 TG、LDL-C、HDL-C 、CHOL水平比較（-x±s，mmol/L)

3.3 各組大鼠血清肝功能指標(biāo)比較：造模4周后，與正常組比較，模型組血清ALT、AST水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，治療6周后，辛伐他汀組、康太旨顆粒三劑量組血清ALT、AST水平顯著降低（P＜0.01）。見表3。

表3 各組大鼠血清AST、ALT水平比較（-x±s，mmol/L)

3.4 各組大鼠肝指數(shù)及肝MDA、SOD水平比較：造模4周后，與正常組比較，模型組肝指數(shù)及肝MDA水平顯著升高（P＜0.01），SOD水平明顯降低（P＜0.01）；與模型組比較，治療6周后，辛伐他汀組、康太旨顆粒三劑量組大鼠肝指數(shù)及肝MDA水平顯著降低（P＜0.01），SOD水平明顯升高（P＜0.01），除辛伐他汀組以外其他組TC水平顯著降低（P＜0.01）。見圖1、2，表4。

圖1 各組大鼠SOD水平

圖2 各組大鼠MDA水平

表4 各組大鼠肝臟指數(shù)比較（-x±s）

3.5 各組大鼠肝臟病理變化：正常組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整，邊界清晰，以中央靜脈為中心呈放射狀排列緊密的肝細(xì)胞未見腫脹及脂肪變性病變，匯管區(qū)無炎癥細(xì)胞浸潤；模型組大鼠肝臟細(xì)胞腫脹呈脂肪變性，出現(xiàn)脂肪空泡，核位移，有脂肪堆積，小葉炎癥，肝小葉邊界不清晰，細(xì)胞排列混亂。匯管區(qū)及肝竇出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，肝竇消失，組織間質(zhì)也有炎癥反應(yīng)，局部有淋巴細(xì)胞浸潤；康太旨顆粒各個(gè)劑量組大鼠肝細(xì)胞脂肪變程度明顯減輕，脂肪滴空泡減少，肝細(xì)胞膨脹減少且排列緊密，肝小葉炎癥減輕，細(xì)胞接近于正常形態(tài)。見圖3。

圖3 HE染色光光鏡下觀察各組大鼠肝臟組織的結(jié)構(gòu)（200×）

4 討論

中醫(yī)學(xué)并無脂肪肝病名,但根據(jù)其病因、病機(jī)應(yīng)屬“肥氣”“脅痛”“積聚”“脹滿”“痰濁”等范疇?？堤碱w粒主治脾胃運(yùn)化失調(diào)，肝腎津虧，氣機(jī)不暢，血?dú)怵鰷碌姆蔷凭灾靖?。方中生葛根解肌退熱，透疹，生津止渴，升陽止瀉，為君藥，現(xiàn)代藥理研究其有降血糖，降血脂，保護(hù)心血管系統(tǒng)等作用；桑葉疏散風(fēng)熱，清瀉肝熱，其提取的桑葉總多糖有顯著的降血糖作用；槐花善清濕熱，涼血止血，現(xiàn)代研究表明其可降血脂；桑椹滋陰補(bǔ)血，補(bǔ)肝益腎，生津止渴；玉竹滋補(bǔ)氣陰，有生津止渴，為臣藥；煅牡蠣平肝潛陽，軟堅(jiān)散結(jié)，收斂固澀，現(xiàn)代藥理具有強(qiáng)肝解毒，凈化瘀血之效，為佐藥。每種中藥都具有廣泛的藥理活性，諸藥合用能夠運(yùn)化脾胃，改善肝腎津虧，調(diào)節(jié)氣機(jī)，促進(jìn)氣血，達(dá)到調(diào)節(jié)血脂，保肝護(hù)肝和代謝作用。

本研究結(jié)果表明，高脂飲食所致的NAFLD大鼠模型與正常組比較，血脂水平、肝臟的MDA水平明顯升高，SOD水平明顯降低（P＜0.01）?？堤碱w粒灌胃后，可明顯改善模型組血清中的AST、ALT、CHOL、TG、LDL-C、HDL-C等表達(dá)水平，以及肝臟中MDA、SOD的表達(dá)水平。本實(shí)驗(yàn)中康太旨顆粒組分別設(shè)有高、中、低劑量組，但是各個(gè)指標(biāo)的組間差異并不明顯，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也未呈現(xiàn)出與劑量大小間的正相關(guān)，這可能與各劑量組用藥梯度太小有關(guān)。ALT、AST水平升高與脂肪性肝炎炎癥和肝纖維化損傷呈明顯的相關(guān)性[2]，這兩個(gè)酶是衡量肝功能的重要指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示康太旨顆粒各劑量組可顯著降低NAFLD模型大鼠ALT、AST水平，表明康太旨顆粒具有改善肝臟炎癥和肝功能的作用。同時(shí)肝臟病理切片的結(jié)果也顯示康太旨顆粒能減輕肝臟脂肪性病變以及炎癥細(xì)胞浸潤，有效改善肝臟受損程度。預(yù)測(cè)其機(jī)制可能與抑制炎癥和清除脂毒性有關(guān)。MDA是脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，判斷脂質(zhì)過氧化損傷程度的高低是根據(jù)MDA含量來衡量的。SOD是肝臟抗氧化系統(tǒng)之一，可清除自由基和過氧化產(chǎn)物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示康太旨顆?？娠@著降低NAFLD模型大鼠肝臟MDA含量，提高肝臟SOD含量，提示康太旨顆粒能夠加強(qiáng)機(jī)體對(duì)肝臟代謝過氧化物的能力，減輕肝臟脂質(zhì)過氧化損傷程度，但其詳細(xì)的機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。綜上所述，康太旨顆粒可以降低NAFLD大鼠血清AST、ALT、CHOL、TG、LDL-C的含量，升高HDL-C的含量，減輕炎癥水平，減少脂質(zhì)沉積，減緩肝臟脂肪變性。這可能與其改善肝臟中MDA、SOD的表達(dá)，降低肝臟脂質(zhì)的過氧化反應(yīng)有關(guān)。

5 參考文獻(xiàn)

[1]葉新苗,楊寅,葉肖琳,等.太旨黃特型紹興黃酒降血脂的實(shí)驗(yàn)研究[J].中華中醫(yī)藥雜志,2012(6)：1655-1658.

[2]Lebeaupin C,Vall??e D,Rousseau D,et al.Bax Inhibitor-1 protects from Non-Alcoholic Steatohepatitis by limiting IRE1 α signaling[J].Hepatology,2018,68（2）：515-532.