SNAP25基因多態(tài)性對(duì)氨磺必利治療精神分裂癥PANSS評(píng)分的影響

曹 峰鄒 瑩

盡管目前抗精神分裂癥藥物的副作用已經(jīng)大大減少，但是許多精神分裂癥患者的治療效果仍然難以令人滿意[1]，導(dǎo)致患者的癥狀加重出現(xiàn)功能障礙等嚴(yán)重后果?？咕穹至寻Y藥物的臨床療效可能因個(gè)體差異而產(chǎn)生不同，因此藥物遺傳學(xué)研究對(duì)于精神分裂癥的的治療顯得尤為重要[2]。Muller等[3]報(bào)道突觸相關(guān)蛋白25kDa（synaptosomal associated protein of 25KD，SNAP25）基因與抗精神病藥物反應(yīng)相關(guān)，發(fā)現(xiàn)rs8636位點(diǎn)基因多態(tài)性與高加索人精神分裂癥患者藥物治療反應(yīng)有關(guān)。Dai等[4]研究顯示，SNAP25基因rs3746544位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與精神分裂癥患者患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。本研究采用病例對(duì)照研究的方法分析SNAP25基因rs8636位點(diǎn)和rs3746544位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與精神分裂癥易感性和氨磺必利治療精神分裂癥患者PANSS評(píng)分的影響，報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2014年5月—2017年8月期間浙江省紹興第七人民醫(yī)院收治的精神分裂癥患者150例作為研究對(duì)象，招募145名健康的體檢者作為對(duì)照組。本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的審核通過(guò)，所有受試者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合國(guó)際疾病分類(lèi) 10（international Classification of diseases，ICD-10）[5]精神分裂癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）年齡 18～55 歲；（3）陽(yáng)性與陰性癥狀量表（PANSS）總分≥70分，陽(yáng)性癥狀≤22 分，陰性癥狀≥40 分，P1、P3、P6、G9 四項(xiàng)≥4分不超過(guò)2項(xiàng)，任一項(xiàng)評(píng)分均≤5分[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）有過(guò)兩種或多種抗精神病藥治療的耐藥性精神分裂癥患者；（2）不能配合完成本次研究的患者；（3）有比較嚴(yán)重的暴力傾向和自殺傾向的患者；（4）1個(gè)月內(nèi)服用氯氮平治療者；（5）處于妊娠期或哺乳期的患者；（6）有藥物過(guò)敏史的患者。

2 方法

2.1 檢測(cè)SNAP25基因rs8636位點(diǎn)和rs3746544位點(diǎn)基因型 取所有受試者肘靜脈血5mL，采用Qiagen全血基因組DNA提取試劑盒（貨號(hào)：61104，Qiagen，德國(guó)）提取基因組DNA，采用特異性引物擴(kuò)增SNAP25基因rs8636位點(diǎn)和rs3746544位點(diǎn)目的片段，其中rs8636位點(diǎn)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增引物序列為上游：5’-AGGGTTTGTTTGCTGCTTTTGA-3’，下游：5’-ACATCCACACTGTTTCACAGC-3’。rs3746544位點(diǎn)PCR擴(kuò)增引物序列為上游：5’-CTCTTGTTTTC AGGTTGGCTCC-3’，下游：5’-AGGGATAGCCCACTTACCCA-3’。PCR反應(yīng)體系：10ng DNA模板，上下游引物各 10pmol，Taq DNA 聚合酶 0.25U，1×的 buffer，10mM dNTP，補(bǔ)水至20μL。PCR反應(yīng)條件：預(yù)變性95℃，5min；94℃，30s；60℃，30s，72℃，30s；30 個(gè)循環(huán)后 72℃延伸 5min，4℃保存。PCR產(chǎn)物純化后采用Sanger測(cè)序的方法檢測(cè)SNAP25基因rs8636位點(diǎn)和rs3746544位點(diǎn)基因型，見(jiàn)圖1。

2.2 治療方法 所有精神分裂癥患者均采用氨磺必利（規(guī)格：0.2g，批號(hào) 20140524001，齊魯制藥有限公司）治療，以陽(yáng)性癥狀為主者口服氨磺必利400～1200mg/d，以陰性癥狀為主口服氨磺必利50～300mg/d。根據(jù)患者的耐受情況和病情，適當(dāng)調(diào)整劑量，氨磺必利片≤400mg/d則一次服用完；若＞400mg/d，則分為2次服用，療程8周。治療期間不與其他抗精神病藥物合用。治療過(guò)程中出現(xiàn)失眠的患者可以使用苯二氮卓類(lèi)藥物治療，如果出現(xiàn)錐體外系反應(yīng)（EPS）可以采用苯海索片治療，記錄患者出現(xiàn)的不良反應(yīng)。

2.3 評(píng)價(jià)指標(biāo) 治療前和治療8周后采用PANSS[7]對(duì)患者的精神狀況進(jìn)行評(píng)價(jià)，包含陽(yáng)性癥狀、陰性癥狀、一般精神病理癥狀、總分等指標(biāo)。

圖1 Sanger測(cè)序結(jié)果

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以[例（%）]表示，采用 χ2檢驗(yàn)。計(jì)算等位基因頻率的OR（odds ratio，比值比）值和 95%CI（Confidence interval，置信區(qū)間）。Hardy-Weinberg 平衡采用 χ2檢驗(yàn)。使用多元Logistic回歸分析精神分裂癥易感性，采用Bonferroni法對(duì)年齡、性別、BMI等因素進(jìn)行校正，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 研究組和對(duì)照組一般資料比較 研究組男87例，女 63例，年齡 18～52歲，平均（37.8±8.9）歲；體質(zhì)指數(shù)（BMI）（22.3±2.4）kg/m2。對(duì)照組男 85 名，女 60名，年齡18～50歲，平均（38.2±9.1）歲；BMI（21.9±2.7）kg/m2。兩組年齡、性別、BMI等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

3.2 研究組和對(duì)照組SNAP25基因SNP位點(diǎn)基因型頻率 SNAP25基因rs8636位點(diǎn)和rs363032位點(diǎn)基因型頻率符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05）。研究組患者SNAP25基因rs8636位點(diǎn)TT基因型頻率顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。rs8636位點(diǎn)突變型等位基因T是精神分裂癥的危險(xiǎn)因素（校正比值比（OR）=1.21，95%置信區(qū)間（CI）=1.02～1.43，P=0.03）。研究組患者的 SNAP25 基因rs363032位點(diǎn)突變基因型（TC和CC）頻率顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。SNAP25基因rs363032位點(diǎn)突變型等位基因C是精神分裂癥的危險(xiǎn)因素（校正 OR=1.60，95%CI=1.35～1.83，P＜0.001），見(jiàn)表1。

3.3 SNAP25基因SNP與精神分裂癥患者一般資料比較 SNAP25基因rs8636位點(diǎn)和rs363032位點(diǎn)不同基因型精神分裂癥患者的年齡、性別、BMI等一般資料之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。SNAP25基因rs8636位點(diǎn)和rs363032位點(diǎn)野生型、雜合型、突變純合型患者治療消耗的氨磺必利的劑量依次上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表 2。

表1 研究組和對(duì)照組SNAP25基因SNP位點(diǎn)基因型頻率比較[例（%）]

表2 SNAP25基因rs8636位點(diǎn)和rs363032位點(diǎn)不同基因型精神分裂癥患者一般資料比較（±s）

表2 SNAP25基因rs8636位點(diǎn)和rs363032位點(diǎn)不同基因型精神分裂癥患者一般資料比較（±s）

注：SNAP25：突觸相關(guān)蛋白 25kDa；BMI：體質(zhì)量指數(shù)

臨床參數(shù)年齡（歲）性別（男/女）BMI（kg/m2）氨磺必利劑量（mg）CC 37.7±9.2 51/32 22.5±2.6 715.4±184.1 rs8636 rs363032 CT 37.1±8.5 22/17 22.1±2.2 755.3±171.0 TT 37.9±8.4 14/14 22.7±2.8 815.8±190.3 P值0.91 0.55 0.85 0.03 TT 37.4±8.8 49/34 22.2±2.7 709.8±179.4 TC 37.9±9.1 24/15 22.4±2.2 761.5±186.2 CC 37.6±8.4 14/14 22.7±2.5 812.6±193.4 P值0.89 0.62 0.76 0.02

表3 精神分裂癥患者SNAP25基因SNP與PANSS評(píng)分比較（分，±s）

表3 精神分裂癥患者SNAP25基因SNP與PANSS評(píng)分比較（分，±s）

注：與治療前同基因型比較，*P＜0.05；SNAP25：突觸相關(guān)蛋白25kDa；PANSS：陽(yáng)性與陰性癥狀量表

基因型rs8636 CC CT TT F值P值rs363032 TT TC CC F值P值PANSS總分 陽(yáng)性癥狀 陰性癥狀 一般病理癥狀治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后88.7±19.8 88.0±20.7 89.7±21.7 0.41 0.81 51.1±9.5*49.5±10.1*49.0±9.8*0.51 0.77 23.8±7.2 23.4±7.8 24.1±8.1 0.38 0.84 15.8±5.8*15.5±6.1*15.7±5.7*0.10 0.94 20.5±7.1 20.3±6.4 21.1±8.1 0.63 0.58 14.8±6.5*14.2±7.9*14.4±7.7*0.35 0.87 44.2±11.5 44.3±12.3 44.5±13.4 0.38 0.84 20.4±8.5*19.8±8.9*18.9±9.0*0.52 0.76 88.0±19.2 88.5±20.3 89.4±21.4 0.53 0.75 52.4±9.1*49.1±9.5*48.7±10.3*0.56 0.71 23.4±7.5 23.5±7.7 24.3±7.9 0.58 0.69 15.4±6.2*15.1±5.9*16.0±6.1*0.35 0.87 20.8±6.9 21.4±8.0 21.3±7.7 0.59 0.65 14.2±6.7*14.6±7.4*14.2±7.1*0.41 0.81 44.1±12.3 44.0±11.8 44.8±12.5 0.49 0.79 20.8±8.9*19.4±8.1*18.5±9.4*0.58 0.69

3.4 SNAP25基因SNP與PANSS評(píng)分的相關(guān)性 治療后所有精神分裂癥患者的PANSS總分、陽(yáng)性癥狀評(píng)分、陰性癥狀評(píng)分、一般病理癥狀評(píng)分均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治療前與治療后SNAP25基因rs8636位點(diǎn)和rs363032位點(diǎn)不同基因型之間的PANSS總分、陽(yáng)性癥狀評(píng)分、陰性癥狀評(píng)分、一般病理癥狀評(píng)分之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表 3。

3.5 不良反應(yīng) 治療過(guò)程中出現(xiàn)的不良反應(yīng)主要有失眠 15例（10.0%），頭痛 10例（6.7%），焦慮 3例（2.0%），EPS35例（23.3%），催乳素升高 32例（21.3%）。SNAP25基因rs8636位點(diǎn)和rs363032位點(diǎn)不同基因型精神分裂癥患者的不良反應(yīng)情況比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表4。

4 討論

氨磺必利是一種新型的抗精神病藥物，選擇性阻斷多巴胺能D2和D3受體，在低劑量時(shí)能夠顯著改善患者的陰性癥狀，當(dāng)使用劑量較高時(shí)能夠改善患者的陽(yáng)性癥狀[8-10]。低劑量（＜10mg/kg）的氨磺必利對(duì)突觸前D2/D3受體的親和力較強(qiáng)，突觸前抑制消除，進(jìn)入間隙的多巴胺增加后額前皮質(zhì)的多巴胺性能傳遞提升，使患者的陰性癥狀顯著改善[11-12]。然而在實(shí)際臨床工作中往往出現(xiàn)個(gè)體差異而導(dǎo)致治療效果的不同，這可能與遺傳因素的不同有關(guān)。陳穎等[13]研究顯示，多巴胺D1受體基因多態(tài)性與氯氮平治療精神分裂癥患者的療效有關(guān)。歐陽(yáng)后先等[14]研究顯示，α1B-腎上腺素受體基因多態(tài)性與精神分裂癥奧氮平臨床治療效果具有相關(guān)性。由此可知，遺傳因素對(duì)精神分裂癥患者的治療效果具有非常重要的影響。

表4 精神分裂癥患者SNAP25基因SNP不良反應(yīng)比較（例）

SNAP25基因位于人20p12-p11.2染色體上，該基因大小為88.59kbp，包含8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子。SNAP25是神經(jīng)遞質(zhì)釋放所必需的一種突觸前胞膜蛋白，在腦神經(jīng)元中高度表達(dá)，是SNA受體（SNARE）復(fù)合體的核心結(jié)構(gòu)，在突觸的可塑性中發(fā)揮重要作用[15-16]。SNAP25基因變異種類(lèi)較多，劉云升等[17]研究顯示，SNAP-25基因多態(tài)位點(diǎn)rs3746544與中國(guó)兒童注意缺陷多動(dòng)障礙（ADHD）的發(fā)病有關(guān)，但未發(fā)現(xiàn)rs8636位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與ADHD之間的相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示，精神分裂癥患者與健康者SNAP25基因rs8636位點(diǎn)和rs363032位點(diǎn)基因型頻率之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），突變型人群更容易患精神分裂癥。rs8636位點(diǎn)位于SNAP25基因3’UTR，而rs363032位點(diǎn)位于SNAP25基因5’UTR，這兩個(gè)位點(diǎn)SNP不影響SNAP25蛋白的氨基酸序列，但是屬于SNAP25基因的調(diào)控區(qū)域，突變可能改變了SNAP25蛋白的表達(dá)水平。從本研究結(jié)果中可以看出，治療后達(dá)到相同PANSS評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，突變型精神分裂癥患者需要的氨磺必利劑量較大，且不影響治療副反應(yīng)，說(shuō)明SNAP25基因rs8636位點(diǎn)和rs363032位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性影響SNAP25蛋白的表達(dá)水平進(jìn)而影響氨磺必利對(duì)精神分裂癥患者的臨床療效，具體機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。研究不足之處，首先，藥物遺傳學(xué)研究的受試者樣本量相對(duì)較??；其次，根據(jù)各種遺傳模型和混雜因素進(jìn)行多重測(cè)試，如疾病持續(xù)時(shí)間、基線癥狀嚴(yán)重程度、抗精神病藥物劑量和既往用藥效果等可能導(dǎo)致偏倚。因此本研究也可能產(chǎn)生假陽(yáng)性。

綜上所述，SNAP25基因rs8636位點(diǎn)和rs363032位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與精神分裂癥易感性有關(guān)，這種單核苷酸多態(tài)性可能影響氨磺必利的治療效果，為了避免假陽(yáng)性對(duì)結(jié)果產(chǎn)生的影響，還需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行研究。