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    丹參注射液聯(lián)合美常安對(duì)急性重癥胰腺炎模型大鼠血清炎性因子及胰腺組織病理的影響

    2019-02-23 02:24:18莊肇朦
    關(guān)鍵詞:常安空白對(duì)照丹參

    莊肇朦 賈 杰

    重癥急性胰腺炎(Severe Acuter Pancreatitis,SAP)常伴有血清炎性因子和細(xì)胞因子水平的升高,可能引起多器官供能衰竭、全身炎癥反應(yīng)綜合征[1-2]。在SAP治療方案中,調(diào)節(jié)機(jī)體適度反應(yīng)、保護(hù)機(jī)體防御功能越來(lái)越受到關(guān)注[3]。丹參注射液由唇形科草本植物經(jīng)精制提純而來(lái)的中藥制劑,具有活血化瘀,促進(jìn)血粘稠度下降和改善微循環(huán)的作用,能夠改善SAP大鼠的炎癥反應(yīng)水平[4];美常安(枯草桿菌二聯(lián)活菌)是一種微生態(tài)制劑,主要含有益生元和益生菌,能夠促進(jìn)腸道菌群的平衡,同時(shí)通過(guò)生物拮抗、生物奪取氧氣和參與腸道的免疫反應(yīng)從而改善腸道的屏障作用[5]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立SAP模型大鼠,觀察丹參注射液聯(lián)合美常安對(duì)SAP模型大鼠SOD和IL-10等因子表達(dá)水平的影響及其機(jī)制,探討丹參注射液聯(lián)合美常安治療SAP效果及機(jī)制,報(bào)道如下。

    1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1 動(dòng) 物 90只SD成年雄性大鼠(SPF級(jí)),購(gòu)買(mǎi)自安徽醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心(許可證號(hào):SCXK2016003),體質(zhì)量(300±10)g,喂養(yǎng)于自由進(jìn)食進(jìn)水、室溫23℃~25℃、相對(duì)濕度45%~60%、光照12h的環(huán)境中。

    1.2 藥 品 ?;悄懰徕c(美國(guó)Sigma公司),丹參注射液(四川升和藥業(yè)股份有限公司,批號(hào)1607117),美常安(北京韓美藥品有限公司,批號(hào)MH6080001L)。

    1.3 試 劑 超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(南京建成生物工程研究所,批號(hào)20131203),丙二醛(MDA)試劑盒(南京建成生物工程研究所,批號(hào)20140117),LPS酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(蘇州江萊生物研究所,批號(hào)20141019)、TNF-α酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(蘇州江萊生物研究所,批號(hào)20150325)、IL-10酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(蘇州江萊生物研究所,批號(hào)20141211)、IL-6酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(蘇州江萊生物研究所,批號(hào)20150312)、IL-1β酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(蘇州江萊生物研究所,批號(hào)201500414)。

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.1 分組及造模 90只實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組、SAP模型組、丹參治療組、美常安治療組和聯(lián)合治療組共六組,每組15只。用Aho方法[6]制造動(dòng)物模型:5%牛黃膽酸鈉溶液在膽胰管內(nèi)逆行性注射制作SAP模型大鼠,所有實(shí)驗(yàn)大鼠術(shù)前禁食12h,1%戊巴比妥鈉(25mg/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉。無(wú)菌情況下手術(shù),上腹壁正中切口入腹,尋及十二指腸及胰膽管,用一小動(dòng)脈夾夾閉膽管近肝門(mén)端,4號(hào)針頭經(jīng)腸壁從十二指腸乳頭刺入胰膽管約0.8cm,對(duì)SAP模型組、丹參治療組、美常安治療組大鼠以0.25mL/min的速度向胰膽管內(nèi)逆行推注5%?;悄懰徕c溶液1.0mL/kg,注畢壓迫5min,見(jiàn)胰腺出血壞死后去除小動(dòng)脈夾關(guān)腹。術(shù)后禁食不禁水。

    表1 各組大鼠血清炎癥因子水平比較(±s)

    表1 各組大鼠血清炎癥因子水平比較(±s)

    注:與SAP模型組比較*P<0.05,與丹參治療組、美常安治療組比較,△P<0.05;SAP:重癥胰腺炎;聯(lián)合治療組:丹參注射液+美常安

    組別空白對(duì)照組實(shí)驗(yàn)對(duì)照組SAP模型組丹參治療組美常安治療組聯(lián)合治療組F值P值只數(shù)15 15 15 15 15 15 IL-10(pg/ml)26.44±6.09*27.80±7.17*189.21±37.40 114.34±23.71*105.21±27.53*68.45±14.78*△67.09<0.01 IL-1β(pg/ml)21.55±2.40*22.00±2.11*56.65±8.37 41.40±4.93*39.51±3.76*31.40±3.56*△26.89<0.01 TNF-α(pg/ml)1.44±0.21*1.48±0.24*3.21±0.54 2.45±0.28*2.21±0.32*1.74±0.29*△31.27<0.01 IL-6(ng/ml)564.80±98.61*573.20±109.35*1383.47±284.57 1087.23±184.50*967.39±202.41*753.61±114.88*△33.95<0.01

    2.2 給 藥 空白對(duì)照組僅進(jìn)行開(kāi)關(guān)腹術(shù),膽胰管局部不予任何處理;實(shí)驗(yàn)對(duì)照組開(kāi)腹后予0.9%氯化鈉注射液逆行膽胰管注射;SAP模型組開(kāi)腹后予5%牛黃膽酸鈉溶液膽胰管內(nèi)逆行性注射制作SAP模型大鼠;丹參治療組造模后30min經(jīng)尾靜脈注射(5mL/kg體質(zhì)量)丹參注射液1次,相同劑量每12h 1次,共給藥4次;美常安治療組造模后30min經(jīng)空腸造瘺管注入美常安溶液,1×107CFU/只,相同劑量每 12h 1次,共給藥4次;聯(lián)合治療組造模后分別經(jīng)尾靜脈注入同等劑量丹參注射液及經(jīng)空腸造瘺管注入美常安溶液;空白對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組、SAP模型組不予任何注射治療。

    2.3 指標(biāo)檢測(cè) 檢測(cè)血清 LPS、TNF-α、IL-10、IL-1β、IL-6,取3mL麻醉大鼠腹主動(dòng)脈血,4℃下離心,3 000r/min,15min,保留血清,放在-20℃保存,嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)要求操作ELISA方法檢測(cè)。血清SOD,MDA水平檢測(cè),取6mL全血分裝于2個(gè)抗凝劑試管內(nèi),4℃下離心,3 000r/min,15min,分離血漿及血清,-20℃保存,SOD采用SOD放射免疫試劑盒測(cè)定,MDA采用MDA硫代巴比妥酸法試劑盒測(cè)定。

    2.4 病理學(xué)評(píng)分比較 各組大鼠72h后處死,取胰腺組織采用HE染色,觀察各組大鼠胰腺組織病理學(xué)評(píng)分[7],主要依據(jù)胰腺水腫程度、腺泡壞死程度、出血及脂肪壞死程度、血管周?chē)仔约?xì)胞浸潤(rùn)程度進(jìn)行評(píng)分,每一項(xiàng)評(píng)分0~4分,評(píng)分越高,胰腺組織病理變化程度越嚴(yán)重。

    2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS16.0,計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s),數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用單因素方差分析法,組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn);P<0.05說(shuō)明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    3.1 各組大鼠血清炎癥因子水平比較 SAP模型組、丹參治療組、美常安治療組、聯(lián)合治療組血清IL-10、IL-1β、TNF-α、IL-6 水平均高于空白對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(P<0.05),表明造模實(shí)驗(yàn)成功;丹參治療組、美常安治療組及聯(lián)合治療組的血清IL-10、IL-1β、TNF-α、IL-6水平均低于 SAP 模型組(P<0.05),聯(lián)合治療組的血清 IL-10、IL-1β、TNF-α、IL-6 水平均低于丹參治療組、美常安治療組(P<0.05),見(jiàn)表1。

    3.2 各組大鼠血清SOD、MDA、LPS水平比較 SAP模型組、丹參治療組、美常安治療組、聯(lián)合治療組血清MDA、LPS水平高于空白對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(P<0.05),SOD水平低于空白對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(P<0.05);丹參治療組、美常安治療組及聯(lián)合治療組MDA、LPS水平均低于 SAP模型組(P<0.05),SOD 高于SAP模型組(P<0.05);聯(lián)合治療組 MDA、LPS水平均低于丹參治療組、美常安治療組(P<0.05),SOD高于丹參治療組、美常安治療組(P<0.05),見(jiàn)表2。

    3.3 病理學(xué)評(píng)分觀察 SAP模型組、丹參治療組、美常安治療組、聯(lián)合治療組病理學(xué)評(píng)分高于空白對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(P<0.05);丹參治療組、美常安治療組及聯(lián)合治療組病理學(xué)評(píng)分低于SAP模型組(P<0.05),聯(lián)合治療組病理學(xué)評(píng)分低于丹參治療組、美常安治療組(P<0.05),見(jiàn)表 3。

    4 討論

    SAP是消化內(nèi)科常見(jiàn)病,在其發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子和血管活性物質(zhì)等,直接或

    表2 各組大鼠血清SOD、MDA、LPS水平比較(±s)

    表2 各組大鼠血清SOD、MDA、LPS水平比較(±s)

    注:與SAP模型組比較*P<0.05,與丹參治療組、美常安治療組比較,△P<0.05;SAP:重癥胰腺炎;聯(lián)合治療組:丹參注射液+美常安

    組別空白對(duì)照組實(shí)驗(yàn)對(duì)照組SAP模型組丹參治療組美常安治療組聯(lián)合治療組F值P值只數(shù)15 15 15 15 15 15 SOD(U/ml)359.54±16.90*355.19±15.09*222.50±12.89 267.81±10.75*278.00±14.41*310.47±16.90*△51.21<0.01 MDA(mmol/ml)4.32±0.86*4.41±0.72*8.98±1.26 7.30±1.08*7.11±0.95*5.94±0.89*△37.96<0.01 LPS(OD 值)0.21±0.05*0.22±0.07*0.51±0.13 0.42±0.09*0.38±0.10*0.31±0.07*△42.86<0.01

    表3 病理學(xué)評(píng)分觀察(分,±s)

    表3 病理學(xué)評(píng)分觀察(分,±s)

    注:與SAP模型組比較,*P<0.05,與丹參治療組、美常安治療組比較,△P<0.05;SAP:重癥胰腺炎;聯(lián)合治療組:丹參注射液+美常安

    組別空白對(duì)照組實(shí)驗(yàn)對(duì)照組SAP模型組丹參治療組美常安治療組聯(lián)合治療組F值P值只數(shù)15 15 15 15 15 15病理學(xué)評(píng)分0.27±0.11*△0.30±0.21*△14.15±1.60 10.96±1.80*10.27±1.44*7.36±1.20*△57.090<0.001

    本研究結(jié)果表明丹參注射液和美常安都能夠降低SAP大鼠血清IL-1、IL-6、TNF-a水平,可能由于丹參降低患者體內(nèi)炎癥因子的水平,并且能通過(guò)抑制NF-kB表達(dá)而發(fā)揮抗炎作用,降低大鼠體內(nèi)炎癥因子的水平;美常安通過(guò)調(diào)節(jié)大鼠體內(nèi)的菌群分布,改善大鼠腸道的微環(huán)境,降低炎癥因子的水平,兩者聯(lián)合使用通過(guò)改善腸道菌群的分布和改善炎癥水平,強(qiáng)化治療效果。

    丹參通過(guò)改善大鼠體內(nèi)的微循環(huán),減少胰腺組織缺血低氧和血管痙攣狀態(tài)[16]。美常安重建宿主腸道菌群間的微生態(tài)平衡,抑制腸內(nèi)有害菌和有害物質(zhì)的產(chǎn)生[17]。本研究結(jié)表明,丹參可降低SAP后血漿MDA水平,能夠升高SOD,可減輕SAP時(shí)對(duì)胰腺、肝、腎脂質(zhì)過(guò)氧化作用,從而減輕腎的損傷,可通過(guò)降低SAP時(shí)氧自由基水平,延緩胰腺炎時(shí)的病理進(jìn)程;美常安通過(guò)降低有害菌群的水平,降低體內(nèi)的氧化損傷。

    丹參和美常安聯(lián)合使用能夠有效改善大鼠體內(nèi)炎癥水平和氧化應(yīng)激水平的同時(shí),增強(qiáng)對(duì)胰腺組織的保護(hù)作用。本研究結(jié)果表明,丹參注射液聯(lián)合美常安能夠降低胰腺組織的損傷,通過(guò)調(diào)節(jié)體內(nèi)的微循環(huán)和炎性反應(yīng),對(duì)胰腺起到一定的保護(hù)作用。間接引起局部血流速度降低、白細(xì)胞粘附、血流量減少、毛細(xì)血管通透性增加及功能性毛細(xì)血管密度降低等造成微循環(huán)功能障礙。減輕細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)導(dǎo)致的全身炎癥反應(yīng)綜合征,改善胰腺微循環(huán)成為現(xiàn)今研究的熱點(diǎn)問(wèn)題[8]。

    丹參注射液具有通脈養(yǎng)心、活血化瘀的功效,臨床廣泛用于急性心肌梗死、SAP、冠心病等疾病的治療。丹參具有抑制血小板凝聚、降低血液黏度,達(dá)到改善微循環(huán)和血液流變學(xué)的作用[9]。同時(shí)能夠抑制TNF-α、IL-6、IL-8等促炎因子分泌,并上調(diào)IL-10、IL-4等含量。大鼠L-精氨酸-SAP模型中,注射丹參注射液能夠顯著降低血淀粉酶和NF-kB表達(dá)水平,減輕胰腺組織的損傷、出血等[10]。

    美常安為屎腸球菌和枯草桿菌二聯(lián)活菌,是腸道中的正常菌群成員[11-12]??莶輻U菌能夠迅速消耗環(huán)境中的游離氧,促進(jìn)有益的厭氧菌生長(zhǎng),通過(guò)產(chǎn)生乳酸等有機(jī)酸,降低腸道PH值,抑制致病菌的生長(zhǎng);激活T、B淋巴細(xì)胞,提高免疫球蛋白和抗體水平,增強(qiáng)細(xì)胞免疫和體液免疫功能[13]。屎腸球菌屬腸球菌屬,是人腸道中正常菌群的一部分,能夠抑制對(duì)人體腸系有害菌[14],調(diào)控人體腸系菌群和調(diào)整腸道菌群的平衡[15]。

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