實(shí)驗(yàn)用豬感染模型研究概況

王玉娥, 張 賀, 陳洪巖

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,

黑龍江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 哈爾濱 150069)

1 模型動(dòng)物

為了探索人類疾病的發(fā)病機(jī)制, 尋找預(yù)防及治療方法，評(píng)價(jià)藥物效果及毒副作用，研究人員常常使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為生物醫(yī)學(xué)研究的模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為人類疾病模型的替代者，具備以下特點(diǎn)：能夠正確模擬預(yù)期的疾病、存活足夠長時(shí)間以獲得預(yù)期效果、容易獲得, 且能夠產(chǎn)生大量后代； 同時(shí)，可以提供連續(xù)和足夠的生物樣本。諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)設(shè)立一百多年來，至少有75個(gè)獎(jiǎng)項(xiàng)得益于利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行的研究[1]。然而，由于動(dòng)物的物種進(jìn)化程度不同，使得不同動(dòng)物的結(jié)構(gòu)、功能、代謝等生物學(xué)特性存在許多相異之處，因此研究工作者不能隨便選用一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來做科學(xué)研究。此外，由于動(dòng)物和人類的生活環(huán)境不同，研究者在使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)應(yīng)充分了解動(dòng)物的特性差異，做出恰當(dāng)?shù)倪x擇。如果在不適當(dāng)?shù)膭?dòng)物體內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不可靠，甚至使得整個(gè)實(shí)驗(yàn)徒勞無功，直接關(guān)系到科學(xué)研究的質(zhì)量和成敗, 所以選擇什么樣的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物制作模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)是生物醫(yī)學(xué)研究工作中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。

傳統(tǒng)的生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型(如： 果蠅、秀麗隱桿線蟲、斑馬魚和不同嚙齒類動(dòng)物等)在實(shí)驗(yàn)設(shè)施中很容易獲得，常用于研究某種特定基因在人類疫病感染相關(guān)生物途徑上的單一影響，但這往往無法代表人類生理機(jī)能的復(fù)雜性。人類疫病感染模型則需要根據(jù)人類疫病的特點(diǎn)來選擇合適的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，使得受試動(dòng)物能最大程度地復(fù)制人類疫病感染所呈現(xiàn)的臨床癥狀、分子途徑、細(xì)胞或組織參與的功能障礙等?；蛘咄ㄟ^對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行人工誘導(dǎo)或基因修飾，使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物能再現(xiàn)人類疫病感染的部分或全部的發(fā)生、發(fā)展過程，建立恰當(dāng)?shù)娜祟愐卟「腥緞?dòng)物模型。感染動(dòng)物模型是研究人類疫病機(jī)制、治療、藥物評(píng)價(jià)等不可或缺的條件。

2 豬是理想的研究人類疾病的模型動(dòng)物

近年來，人們逐漸意識(shí)到一些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疫病感染模型的局限性，因此盡量選擇與研究對(duì)象的機(jī)能、代謝、結(jié)構(gòu)及疾病特點(diǎn)相似的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。一般來講，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物學(xué)分類地位愈高等、進(jìn)化愈高級(jí)，其機(jī)能、代謝及結(jié)構(gòu)愈復(fù)雜，反應(yīng)就愈接近人類。猴、狒狒、猩猩和長臂猿等非人靈長類動(dòng)物是最近似于人類的理想模型動(dòng)物。但非人靈長類動(dòng)物使用成本極高，且存在被廣泛關(guān)注的倫理學(xué)問題，因此主要被用作人類腦疾病機(jī)理和治療方法研究的模型動(dòng)物。目前，在人類疫病感染模型研究上，小鼠是最廣泛使用的模型動(dòng)物。然而，通過對(duì)免疫系統(tǒng)參數(shù)對(duì)比分析，研究人員[2]發(fā)現(xiàn)小鼠免疫系統(tǒng)與人類免疫系統(tǒng)相似性僅有10%, 相比之下，豬免疫系統(tǒng)與人類相似性超過80%。因此, 在疫病感染模型研究中，除小鼠和非人靈長類動(dòng)物外，豬被認(rèn)為是最有價(jià)值的臨床前模型動(dòng)物[3]。目前，豬被廣泛用于醫(yī)學(xué)教學(xué)、心血管病研究、藥物評(píng)價(jià)和疫病感染模型等領(lǐng)域, 主要原因除了其免疫系統(tǒng)與人類高度相似外,還包括如下幾方面： ①豬與人的重量和器官相似性高； ②豬與人生理和疾病進(jìn)展(特別是新陳代謝和傳染性)的相似性高； ③豬與人基因組、轉(zhuǎn)錄組、蛋白質(zhì)組等數(shù)據(jù)庫工具的可共用性； ④有效克隆豬的應(yīng)用, 以及穩(wěn)定豬細(xì)胞系的存在[4]。近年來,隨著豬遺傳學(xué)研究及生物技術(shù)的迅猛發(fā)展[5-9], 使得轉(zhuǎn)基因豬的培育與轉(zhuǎn)基因鼠一樣可行[10]。因此，豬作為最理想的模型動(dòng)物，可用于人類病毒、細(xì)菌以及寄生蟲的傳播、感染動(dòng)力學(xué)、組織分布和致病機(jī)制等方面的疫病感染模型的研究工作[4]。

目前，豬種群的商業(yè)化日趨成熟，且具有多樣化(源于自然或人工選擇)特征，為特定的研究目的提供了使用所需不同表型(或相關(guān)基因型)的機(jī)會(huì)[11]。商業(yè)化生產(chǎn)的豬種(如： 大白、長白、大約克夏、杜洛克、漢普夏和皮特蘭等)易于繁殖和生產(chǎn), 可滿足一般研究需求； 同時(shí), 各種各樣自然選擇獲得的地方豬種或轉(zhuǎn)基因修飾豬在市場(chǎng)上可以獲取。值得一提的是, 小型豬種由于其體型較小, 具有易于實(shí)驗(yàn)操作、微生物控制、飼養(yǎng)成本低等優(yōu)點(diǎn), 逐漸成為生物醫(yī)學(xué)模型研究中的重要實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。明尼蘇達(dá)霍麥爾系小型豬和哥廷根系小型豬是歐美常用的小型豬實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系。近年來, 我國開發(fā)了藏香豬、五指山小型豬、巴馬香豬、西雙版納小型豬、貴州小型豬、滇南小耳豬和臺(tái)灣小型豬等實(shí)驗(yàn)小型豬[12；13]。巴馬香豬和五指山小型豬已經(jīng)在國內(nèi)得到廣泛使用。

3 豬作為研究人類病原體傳染病的模型動(dòng)物

豬已經(jīng)被用作與人類健康相關(guān)的諸多傳染病的模型[14,15]，這些模型主要包括三類：第一類為自然疾病模型，即自然界存在與人類病原體密切相關(guān)或完全相同的豬病原體，以此為感染模型研究人類相似病原體的發(fā)病特點(diǎn)及機(jī)制等；第二類是在實(shí)驗(yàn)條件下，將人類病原體傳給豬，使得受試動(dòng)物在一定程度上可模擬人類疾病特征，具有一定實(shí)驗(yàn)性的替代感染模型； 第三種是使用轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因豬，使得原本不能感染豬的人類病原體能夠在轉(zhuǎn)基因豬體內(nèi)感染復(fù)制，獲得人類特有病原體的感染模型。目前，運(yùn)用豬作為模型動(dòng)物已成功建立了多種人類病原體感染模型，下面以病原體種類分別進(jìn)行總結(jié)。

3.1 病毒感染模型

甲型流感病毒(IAV)可感染多種宿主，包括人類、豬和各種鳥類等。即使目前在使用疫苗情況下，人類的流感疾病仍然每年爆發(fā)，而且流感病毒在人類身上的發(fā)病機(jī)理和傳播機(jī)制還不是很清楚。豬是流感病毒的自然宿主，在新流感病毒的出現(xiàn)、流行和傳播中起著至關(guān)重要的作用。豬流感病毒感染與人類有許多相似之處，如相同的病毒亞型在這兩個(gè)物種中都是地方性的，病毒在這兩種宿主之間反復(fù)交替出現(xiàn)，人類和豬在感染IAV 后臨床表現(xiàn)和發(fā)病機(jī)理是相似的，并且在呼吸道中也有類似的IAV 受體分布[16]?？紤]到這些共同特征，豬被認(rèn)為是IAV 感染研究的合適和有價(jià)值的模型。研究[17]發(fā)現(xiàn)，以基質(zhì)蛋白胞外功能區(qū)(M2e)表位為基礎(chǔ)的亞單位疫苗鼻內(nèi)接種豬只后，能有效保護(hù)豬只免受同源性病毒攻擊，宏觀和微觀損傷均減少，臨床癥狀減輕，鼻分泌物和唾液中的病毒量顯著降低。Kiyoko 等[18]利用小型豬作為IAV 感染模型，研究發(fā)現(xiàn)豬呼吸道存在病毒的傳統(tǒng)受體SAα2,3Gal 和SAα2,6Gal，使得該小型豬與傳統(tǒng)商品化豬對(duì)病毒的易感性相似，可作為新型IAV 感染的動(dòng)物模型。

阿爾法皰疹病毒，如豬的偽狂犬病毒(PRV)和人類的1型單純皰疹病毒(HSV-1)，已經(jīng)與宿主共同進(jìn)化。病毒與上皮屏障和免疫系統(tǒng)的相互作用促進(jìn)了宿主屏障適應(yīng)和免疫反應(yīng)。由于阿爾法皰疹病毒不會(huì)在嚙齒動(dòng)物中傳播，因此嚙齒動(dòng)物不能被用作同源模型，而帶有PRV的豬是合適的同源模型，能夠用于研究阿爾法皰疹病毒與宿主的相互作用，以鑒定免疫逃避途徑進(jìn)而篩選阻止病毒復(fù)制的藥物新靶點(diǎn)[18]。阿爾法皰疹病毒感染豬模型的研究[19]表明，PRV 與病毒復(fù)制主要部位的鼻黏膜相互作用，與HSV-1 非常相似。該病毒首先在上皮細(xì)胞中復(fù)制，激活細(xì)胞絲氨酸蛋白酶，在基底膜上鉆洞，從而使病毒通過上皮細(xì)胞屏障，迅速擴(kuò)散到黏膜和黏膜下層。之后，阿爾法皰疹病毒沿著軸突傳播到感覺神經(jīng)元的神經(jīng)元細(xì)胞體。該研究還發(fā)現(xiàn)，干擾素α(IFN-α）在PRV和HSV-1-感染的神經(jīng)元中促進(jìn)了病毒的潛在感染階段。

戊型肝炎病毒(HEV)是已知的5種人類肝炎病毒之一，與其他肝炎病毒相比，擁有獨(dú)一無二的多種儲(chǔ)存宿主，是重要的人獸共患病之一。盡管非人靈長類動(dòng)物是最常用于研究HEV感染的動(dòng)物模型，但豬作為HEV基因3型和4型的天然宿主，已經(jīng)被成功地用于闡明HEV基因的結(jié)構(gòu)和功能關(guān)系, 及HEV 復(fù)制機(jī)制的研究[20]。Cao 等[21]開展了一種HEV感染豬模型的研究，并檢測(cè)了導(dǎo)致慢性疾病發(fā)生的免疫相關(guān)因素，研究表明用免疫抑制劑，包括環(huán)孢霉素、阿扎匹林和潑尼松龍, 處理模型動(dòng)物豬，造成的免疫系統(tǒng)損傷情況與HEV感染造成人類免疫缺陷進(jìn)而發(fā)展成慢性疾病相似。

寨卡病毒(ZIKV)是一種蟲媒傳播的病毒，2014 年2 月在智利首次發(fā)現(xiàn)該病毒感染病例。孕婦感染ZIKV 后自身癥狀表現(xiàn)輕微，但孕婦分娩的后代多呈現(xiàn)畸形，即在胎兒和新生兒中出現(xiàn)異常發(fā)育和嚴(yán)重的腦損傷。同時(shí)，人們擔(dān)心，在子宮內(nèi)和出生時(shí)沒有明顯癥狀的后代可能會(huì)患上精神疾病，因此需要發(fā)現(xiàn)合適的動(dòng)物模型測(cè)試ZIKV 感染對(duì)嬰兒腦組織損傷情況，判定無癥狀后代的健康與否。為了模擬病毒在人子宮內(nèi)的感染情況， Darbellay等[22]給妊娠母豬接種了ZIKV，結(jié)果表明病毒可通過胎盤屏障造成胎兒感染，并產(chǎn)生持續(xù)感染、胎兒大腦中的分子病理變化、胎兒抗體和IFN-α 反應(yīng)特征。感染ZIKV 妊娠母豬的后代在出生后的胎兒膜中存在ZIKV。一些產(chǎn)后仔豬個(gè)頭很小、精神沉郁、腦容量不足，并且表現(xiàn)出癲癇癥狀；一些仔豬則表現(xiàn)出潛在的活躍度升高狀況。子宮內(nèi)感染ZIKV 的豬模型具有很大的轉(zhuǎn)化研究潛力，可以用于模擬測(cè)試孕婦感染ZIKV 的治療干預(yù)措施是否可行。

轉(zhuǎn)矩塔諾河病毒(TTSuV)可感染多種脊椎動(dòng)物。盡管有流行病學(xué)證據(jù)[23]表明與人類疾病有關(guān)聯(lián), 但一直以來TTSuV 感染并沒有與特定疾病聯(lián)系在一起。最近，人們發(fā)現(xiàn)[24]豬身上也存在自然發(fā)生的TTSuV感染，且感染情況與人類TTSuV有諸多相似之處，這增加了使用豬作為研究人類TTSuV 感染模型的可能性。這種方法將需要開發(fā)新的調(diào)查工具來研究流行病學(xué)、傳播、免疫反應(yīng)以及TTSuV感染的潛在發(fā)病機(jī)制。 Kekarainen等[25]總結(jié)了動(dòng)物TTSuV感染的研究，重點(diǎn)關(guān)注豬的TTSuV感染，并考慮了豬實(shí)驗(yàn)感染模型如何幫助研究人類TTSuV 感染。

腸道病毒71(EV71)是造成人類手足口病的病原，通常與嚴(yán)重的、甚至是致命的神經(jīng)系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)疾病有關(guān)。隨著脊髓灰質(zhì)炎病毒在世界大部分地區(qū)的根除，EV71 是目前最重要的神經(jīng)毒性腸病毒。每年有100 多萬例手足口病病例和數(shù)百例嬰兒和幼兒死亡，其中6 個(gè)月至23 個(gè)月的兒童發(fā)病率和死亡率最高[26,27]。然而，EV71 的疫苗開發(fā)和發(fā)病機(jī)理研究因缺乏合適的動(dòng)物模型受到限制。Yang 等[28]通過體外和體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)，新生無菌豬可以通過口服和口服-鼻腔接種感染新分離的神經(jīng)毒性EV71 BJ110 毒株。病毒感染導(dǎo)致豬只出現(xiàn)了一些人手足口病發(fā)病的臨床特征，包括神經(jīng)系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的癥狀，這些癥狀模擬了嬰兒感染EV71 疾病的癥狀；同時(shí)，血清中EV71高效價(jià)的中和抗體也在口服和聯(lián)合口鼻接種感染的豬中誘導(dǎo)產(chǎn)生。上述研究結(jié)果表明，新生無菌豬代表了一種具有前景的新型動(dòng)物模型，可用于對(duì)EV71 疫苗和抗病毒藥物進(jìn)行臨床前評(píng)估。

3.2 細(xì)菌感染模型

由金黃色葡萄球菌引起的敗血癥嚴(yán)重影響了全世界人類的健康問題[29]。隨著青霉素的廣泛使用，有些金黃色葡萄球菌對(duì)青霉素產(chǎn)生耐藥性，被命名為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，現(xiàn)已成為臨床上常見的毒性較強(qiáng)的重要病原菌之一[30]。豬被認(rèn)為是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的來源。由于金黃色葡萄球菌所能參與的疾病范圍較廣，豬被用于該細(xì)菌的多種感染模型研究，包括傷口感染、骨髓炎、肺炎和敗血癥等[31-33]。金黃色葡萄球菌感染后，在8 周齡的豬體模型上出現(xiàn)了骨髓炎的病變，這與在青春期前兒童身上出現(xiàn)的骨髓樣病變相似。

肺炎鏈球菌是在人鼻咽部攜帶的一種革蘭氏陽性細(xì)菌，可在人與人之間傳播，引起不同的疾病，如中耳炎和鼻竇炎，甚至引起更為嚴(yán)重的疾病，包括肺炎、腦膜炎和敗血癥[34,35]。仔豬感染肺炎鏈球菌的發(fā)病機(jī)理與人肺炎鏈球菌病的發(fā)病機(jī)理有驚人的相似之處，因此豬可作為研究人類肺炎鏈球菌定植和侵襲性疾病的動(dòng)物模型。研究發(fā)現(xiàn)[36]，靜脈注射致病性肺炎球菌，2 d 后細(xì)菌在仔豬體內(nèi)明顯復(fù)制，5 d 后豬仔出現(xiàn)菌血癥，且菌血癥通常與發(fā)熱和敗血性關(guān)節(jié)炎緊密相關(guān)。此外，仔豬鼻內(nèi)注射肺炎鏈球菌菌株后，連續(xù)6 d 可檢測(cè)到定居的菌株。仔豬作為動(dòng)物模型不但可以用于模擬人肺炎球菌感染產(chǎn)生的核心問題，還可以用于對(duì)肺炎感染和侵入性疾病的研究，也可以用于改進(jìn)肺炎鏈球菌疫苗的開發(fā)。

百日咳是一種由百日咳桿菌引起人類急性呼吸道傳染病, 5 歲以內(nèi)小兒易感性最高。Elahi 等[37]研究發(fā)現(xiàn)，在實(shí)驗(yàn)條件下百日咳桿菌感染新生仔豬誘發(fā)的臨床癥狀和病理變化與嬰兒患病相似，包括初乳和母乳中母源抗體的測(cè)定，以及病原抵達(dá)黏膜免疫間隙的研究。利用豬感染模型，研究者[38]發(fā)現(xiàn)母源抗體在保護(hù)機(jī)體免受百日咳感染中發(fā)揮重要作用，因此豬成為檢測(cè)小兒百日咳疫苗效力最有價(jià)值的模型動(dòng)物。同樣，副百日咳博德特桿菌也是引起人類急性呼吸道傳染病的病原，也可以感染日齡較大的豬只。副百日咳博德特桿菌具有抑制感染豬只天然免疫防御的能力，但是該細(xì)菌抑制天然免疫的能力在呼吸道中可被防御素所中和[39]，使得豬成為進(jìn)一步揭示百日咳致病及免疫機(jī)制的模型動(dòng)物。

3.3 寄生蟲感染模型

由于剛地弓形蟲(弓形蟲)能夠長期感染包括人類在內(nèi)的所有溫血?jiǎng)游?，使得弓形蟲成為世界上最普遍的寄生蟲之一。弓形蟲的終端宿主是貓科動(dòng)物, 其在宿主體內(nèi)的終生存在增加了它的傳播機(jī)會(huì)。終端宿主將弓形蟲卵囊排入環(huán)境后, 污染土壤、食物或水等； 中間宿主(如： 鼠、豬或人類)則通過接觸污染的環(huán)境被弓形蟲感染[40-42]。與小鼠相比, 豬感染弓形蟲后的疾病發(fā)生發(fā)展過程與人弓形蟲病更加相似。例如, 在豬和人類中, 弓形蟲感染的嚴(yán)重程度、經(jīng)胎盤傳播和干擾素誘導(dǎo)的抗寄生蟲效應(yīng)機(jī)制是相似的。此外, 在小鼠身上所描述的急性弓形蟲感染期間的嚴(yán)重免疫抑制現(xiàn)象并不發(fā)生在感染的人和實(shí)驗(yàn)感染的豬身上。因此, 豬弓形蟲感染數(shù)據(jù)更能代表人類弓形蟲病[43]。

豬有與人類非常相似的皮膚系統(tǒng)和眼部結(jié)構(gòu)，He 等[44]成功運(yùn)用Yucatan 小型豬模型研究了人類寄生蟲病——棘阿米巴角膜炎，研究表明，小型豬感染棘阿米巴原蟲后產(chǎn)生的病變與人類的病變相似，包括眼睛呈現(xiàn)密集的白色環(huán)狀浸潤、間質(zhì)水腫和角膜炎。豬的病變和感染的慢性特性，以及豬與人類眼睛的解剖學(xué)相似性，使豬模型成為研究角膜炎的細(xì)胞生物學(xué)、宿主免疫反應(yīng)和潛在療法的重要補(bǔ)充。

3.4 豬作為研究自身病原體感染的模型

傳統(tǒng)的豬傳染病模型研究用豬通常是從商品化的健康養(yǎng)殖系統(tǒng)中采購，獲得渠道簡(jiǎn)便易行。然而，在豬的病原傳染病研究中，獲得感興趣的病原體和抗體陰性豬是至關(guān)重要的。在此基礎(chǔ)上,多種豬傳染病模型均已建立, 能夠成功模擬豬只在自然發(fā)病情況下的感染癥狀, 可用于病原體致病機(jī)制及宿主免疫應(yīng)答的研究, 同時(shí)可作為評(píng)價(jià)防治豬傳染病生物制劑功效的標(biāo)準(zhǔn)感染模型。如非洲豬瘟(ASF), 是豬的一種高傳染性病毒性疾病, 可導(dǎo)致死亡率高達(dá)100%[45]。Galindo-Cardiel 等[46]建立了標(biāo)準(zhǔn)化的攻毒方案, 對(duì)不同病毒株和疫苗樣病毒感染后產(chǎn)生的臨床學(xué)、病理學(xué)和免疫應(yīng)答特性的進(jìn)行了詳細(xì)分析, 為ASF 疫苗研究提供了良好平臺(tái)。同樣, Lacasta 等[47]研究發(fā)現(xiàn), ASFV 強(qiáng)毒株感染豬只產(chǎn)生的病理變化和免疫應(yīng)答與弱毒株差異顯著，對(duì)研制有效的ASF 疫苗具有重要意義。

此外，如果新鑒定的或變異的豬病原體和相應(yīng)抗體檢測(cè)方法不存在，或某些豬源病原體難以根除，使得無法建立這些病原的感染模型。目前, 有幾種方法可以克服上述感染模型無法建立的問題： ①對(duì)常規(guī)豬的抗原和某些病原體抗體進(jìn)行檢測(cè)，篩選獲得陰性豬，在隔離環(huán)境中飼養(yǎng)并進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，進(jìn)而獲得無特定病原體(SPF)豬； ②采用自然分娩后不飼喂初乳的方法獲得自然分娩不喂母乳(NFCD)豬； ③剖宮產(chǎn)飼喂初乳方法獲得剖宮產(chǎn)不喂母乳(CDCD)豬； ④無菌法或無菌技術(shù)獲得無菌豬或悉生豬。SPF 方法的優(yōu)點(diǎn)是獲取方便、技術(shù)要求低和成本低。然而，當(dāng)需要豬群流行病原體陰性時(shí), 例如豬圓環(huán)病毒2 型(PCV2)，這種方法可行性很低, 因?yàn)榇蠖鄶?shù)豬都有針對(duì)PCV2 的抗體, 要么是母源的，要么是被動(dòng)免疫，要么是被感染的病原體誘導(dǎo)產(chǎn)生的。因此，研究人員不得不通過大量的農(nóng)場(chǎng)進(jìn)行篩選，以獲得可靠的豬源。CDCD 豬、無菌豬或悉生豬是獲得感染模型的最佳選擇，但是由于試驗(yàn)條件的要求和成本較高，使得實(shí)際應(yīng)用存在一定局限性[48,17]。

Liu 等[49]利用NFCD 豬作為研究工具，構(gòu)建了PCV2 和副嗜血桿菌4型(HPS4)聯(lián)合感染動(dòng)物模型，研究表明，PCV2 和HPS4 單獨(dú)感染動(dòng)物時(shí)，均產(chǎn)生病毒血癥或菌血癥，聯(lián)合感染仔豬出現(xiàn)多系統(tǒng)衰竭綜合征，包括呼吸困難、厭食、虛脫和體質(zhì)量嚴(yán)重減輕。PCV2 和HPS4聯(lián)合感染導(dǎo)致了血清和組織中病毒含量增加，針對(duì)PCV2 的抗體產(chǎn)生較慢且較低。PCV2 和HPS4聯(lián)合感染導(dǎo)致了總的和分化的外周血白細(xì)胞數(shù)量進(jìn)一步減少。HPS4共感染增強(qiáng)了PCV2相關(guān)的肺臟和淋巴結(jié)病變的嚴(yán)重程度，增加了PCV2 抗原的毒性，提高了仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征的發(fā)生率。該研究證實(shí)NFCD 成為豬病原體感染的有價(jià)值的動(dòng)物模型。

4 小結(jié)與展望

除了危害人類健康的心腦血管疾病和惡性腫瘤外，傳染性疾病成為影響人類健康的主要威脅。為了探尋傳染性疾病的發(fā)病機(jī)制，研發(fā)預(yù)防性疫苗，評(píng)價(jià)藥物治療效果，急需根據(jù)人類疾病的特殊性來選擇研究模型，并盡可能復(fù)制與功能障礙相關(guān)的臨床癥狀、細(xì)胞或組織、分子變化等。選擇合適的動(dòng)物模型并構(gòu)建接近于人類疫病感染的動(dòng)物模型是疫病感染研究的基礎(chǔ)和前提。世界上幾乎所有的地理區(qū)域，豬成為食物、蛋白質(zhì)和脂肪來源已有幾個(gè)世紀(jì)，利用豬與人類的相似之處，并結(jié)合先進(jìn)的研究技術(shù)如蛋白質(zhì)組、基因組等組學(xué)，以豬作為動(dòng)物模型來深入開展人類疾病的研究具有巨大優(yōu)勢(shì)。