替來他明/唑拉西泮聯(lián)合右美托咪定對BALB/c 小鼠麻醉效果觀察

鄒 蘆, 戴天娥, 盧 曉, 艾曉杰

(1. 上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院/上海市獸醫(yī)生物技術(shù)重點實驗室, 上海 200240；

2. 迪哲(上海)醫(yī)藥有限公司, 上海 201203； 3. 上海浦靈生物科技有限公司, 上海 201203)

麻醉是指使用藥物或非藥物方法使機體或機體一部分暫時失去感覺, 以達到無痛的目的。理想的麻醉應(yīng)該是誘導(dǎo)迅速、麻醉平穩(wěn)、清醒快。吸入性氣體麻醉是實驗小鼠最常用的麻醉方法, 其以獲取容易、麻醉效果迅速且麻醉深度可調(diào)節(jié)、麻醉及復(fù)蘇迅速平穩(wěn)等優(yōu)點, 在小鼠麻醉中占據(jù)重要地位[1]。但是吸入性氣體麻醉需要用到昂貴的呼吸麻醉機, 而且對于使用場地和氣體回收裝置有一定的要求； 同時當需要進行大批量、連續(xù)的實驗操作時, 使用氣體麻醉就不太適合。另外, 一些特殊的動物模型無法使用吸入性氣體麻醉。

替來他明/唑拉西泮(舒泰50)是現(xiàn)在臨床上最常見的獸用麻醉劑，它是一種新型的解離性麻醉藥品，主要由解離性麻醉劑替來他明和苯二氮類鎮(zhèn)靜劑唑拉西泮按比例混合而成。唑拉西泮可加強替來他明對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制作用，又可防止由替來他明引起的驚厥，增強肌肉松弛效果,還可以縮短麻醉蘇醒時間。其復(fù)合使用能夠使肌肉松弛，引起淺表性痛覺和內(nèi)臟痛覺的消失，并且不會引起呼吸中樞的抑制，具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛和麻醉的作用[2]。但對小鼠的麻醉, 舒泰50 單獨使用不能起到很好的作用。右美托咪定(哆咪靜)是一種高特異性的α2 腎上腺素受體興奮劑，能降低交感神經(jīng)的活性，產(chǎn)生鎮(zhèn)靜和止痛的作用[3]。由于哆咪靜對其他中樞抑制劑(如麻醉藥)具有明顯的增效作用，并能夠明顯降低麻醉劑的劑量，因此考慮哆咪靜和舒泰50 復(fù)合麻醉來麻醉小鼠。

1 材料與方法

1.1 動物

7～9 周齡SPF級BALB/c小鼠雌雄各9只，體質(zhì)量19～26 g，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司[SCXK(京)2016-0006]并飼養(yǎng)于迪哲(上海)醫(yī)藥有限公司屏障設(shè)施內(nèi)[SYXK(滬)2018-0015]。所有動物和飼養(yǎng)操作均符合國家實驗動物標準GB14925-2010《實驗動物環(huán)境及設(shè)施》和《實驗動物飼養(yǎng)管理和使用指南》[4]的要求。自由攝食(提供PMI 公司生產(chǎn)的5C02C 標準維持飼料)、飲水，每2 周更換一次墊料以保持干燥，飼養(yǎng)間按15 次/h 換氣, 溫度20～26 ℃，相對濕度40%～70%, 12 h 照明/12 h 黑暗交替光照。每籠給予1 根白楊木條供動物磨牙。IACUC 批準號為1804-PK-01。實驗前保證動物在迪哲動物房內(nèi)適應(yīng)至少3 d。

1.2 主要藥品及試劑

舒泰5 0 購自法國維克有限公司( 批號：6VUL)。使用前將舒泰50 凍干粉完全溶解，配成50 mg/mL 注射液待用； 哆咪靜(批號： 1832885)和阿替美唑(咹啶醒)(批號1735088)均購自碩騰(上海)企業(yè)管理有限公司； 生理鹽水購買自上海百特醫(yī)療用品有限公司(批號： S1706027)； 淚然滴眼液購自Alcon 公司(批號： 17122BA)。

1.3 實驗方法

1.3.1 動物分組 18 只BALB/c 小鼠，用隨機數(shù)字表編號，并按體質(zhì)量隨機分為2 組(A 組雌雄各6 只，B 組雌雄各3只)： A組給予舒泰50和哆咪靜混合麻醉； B組給予同樣劑量的舒泰50和哆咪靜混合麻醉，待麻醉穩(wěn)定維持1 h 后, 給予0.5 mg/kg劑量的咹啶醒。

1.3.2 實驗步驟 已溶解的舒泰50溶液和哆咪靜溶液按照40∶1 的比例混合均勻，用生理鹽水稀釋4 倍后待用。咹啶醒注射液按體積比1∶100稀釋后待用。每只小鼠給藥前稱重。按照舒泰50劑量40 mg/kg+哆咪靜0.1 mg/kg 給予A、B 兩組小鼠腹腔注射。當B 組動物麻醉穩(wěn)定維持1 h 后，給予0.5 mg/kg劑量的稀釋后的咹啶醒注射液以拮抗哆咪靜的麻醉效果。

1.4 觀測指標

注射時間： 藥物注射入動物體內(nèi)的時間； 倒地時間： 動物倒地，軀體位置不再移動，此時翻正反射消失； 疼痛反射消失時間： 使用眼科手術(shù)鑷夾取動物四肢及尾根部，均無反映定義為疼痛反射消失； 疼痛反射出現(xiàn)時間： 使用眼科手術(shù)鑷夾取動物四肢及尾根部, ≥2處連續(xù)2次出現(xiàn)疼痛反映定義為疼痛反射出現(xiàn)； 蘇醒時間： 動物四肢開始活動，翻正反射恢復(fù)； 誘導(dǎo)時間= 疼痛反射消失時間-注射時間； 麻醉維持時間= 疼痛反射出現(xiàn)時間-疼痛反射消失時間。此時適合進行手術(shù)操作?；謴?fù)時間= 動物蘇醒時間-疼痛反射出現(xiàn)時間。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

使用Prism 8 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理分析。定量資料采用多個樣本均數(shù)方差分析，以x-± s 表示，組間比較采用兩樣本均數(shù)的t 檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

舒泰50 和哆咪靜復(fù)合麻醉的麻醉誘導(dǎo)時間、麻醉維持時間、蘇醒時間和麻醉總時間的數(shù)據(jù)見表1。數(shù)據(jù)顯示, 舒泰50 和哆咪靜復(fù)合麻醉成功率為100%(18/18), 并且能夠快速地誘導(dǎo)小鼠進入外科麻醉期[雌性(18.2±4.3) min, 雄性(8.0±1.2) min], 失去疼痛反射； 18 只動物無一死亡。

B 組動物在麻醉時間維持1 h 后, 注射咹啶醒，雌性動物蘇醒時間從(100±17.6) min 縮短至(31.1±8) min，減少了69%； 雄性動物(110.2±19.5) min 縮短至(36.7±5.5) min，減少了66%(P＜0.05)。

3 討論

傳統(tǒng)的非吸入性麻醉藥主要有戊巴比妥鈉、水合氯醛、氯胺酮、速眠新等。其中通過作為γ-氨基丁酸(GABA)受體激動劑而發(fā)揮麻醉作用的戊巴比妥鈉, 列為國家二類精神藥品, 不僅申請、購買、使用和儲存有著較高的要求，而且深度麻醉劑量與致死量很接近，使用時麻醉劑量難以掌握，極易造成術(shù)中麻醉死亡； 水合氯醛是一種催眠藥、抗驚厥藥，動物手術(shù)所需麻醉劑量的水合氯醛不能提供足夠的鎮(zhèn)痛作用，并且還會導(dǎo)致顯著的呼吸抑制，因此不推薦存活動物實驗使用水合氯醛腹腔麻醉； 氯胺酮是一種作用于大腦皮質(zhì)和脊髓神經(jīng)元的非競爭性N- 甲基-D- 天冬氨酸(NMDA)受體拮抗劑，廣泛應(yīng)用于所有動物物種的麻醉, 還具有鎮(zhèn)痛作用，但氯胺酮的多種不良反應(yīng), 包括妄想、幻覺、譫妄和混亂等[5], 同時作為國家一類精神藥品, 其申請、購買的難度也限制了其使用。至于國產(chǎn)麻醉藥品速眠新等產(chǎn)品有著麻醉效果不穩(wěn)定、深度不夠和不良反應(yīng)大等缺點[6]，在實際使用中仍然存在較大問題。

表 1 麻醉時間比較 min

舒泰50 是目前臨床上最常見的獸用麻醉劑，在犬、貓、猴、大鼠等動物的麻醉效果得到了一致的認可, 但是對小鼠麻醉, 舒泰50的效果不盡人意。當使用劑量在75 mg/kg 以上時，極易造成動物死亡； 當使用50～75 mg/kg 時, 動物麻醉深度不夠, 四肢無意識地劃動, 無法進行手術(shù)操作。舒泰50 和哆咪靜復(fù)合麻醉彌補了其中的不足。

本文研究表明，舒泰50 和哆咪靜復(fù)合麻醉維持時間47～92 min, 總麻醉時間146～225 min，適合常規(guī)手術(shù)操作。在麻醉過程中，小鼠的眨眼反射喪失, 角膜暴露在空氣中, 極易干燥、充血,造成不適。建議涂抹眼藥膏或者定時滴眼藥水以保證眼球濕潤； 同時由于長時間麻醉造成小鼠體溫下降, 也是導(dǎo)致小鼠蘇醒時間過長的原因，建議在動物麻醉時添加保溫墊以保暖。本實驗表明,咹啶醒的拮抗作用, 能消除(或抑制)哆咪靜注射液引起的鎮(zhèn)靜與止痛作用, 從而大大縮短了小鼠的蘇醒時間，因此建議在術(shù)后給予咹啶醒，以縮短麻醉時間，增加動物存活率。同時根據(jù)不同的麻醉要求可以微調(diào)藥品的使用劑量，比如當需求的麻醉時間不足30 min 時, 可以使用舒泰5 032 mg/kg和哆咪靜0.08 mg/kg，以縮短麻醉持續(xù)時間。此復(fù)合麻醉方法不足之處在于，舒泰50和哆咪靜只能提供中等程度的鎮(zhèn)痛作用，因此對于某些手術(shù)操作來說，需要聯(lián)合阿片類鎮(zhèn)痛劑(比如丁丙諾啡)同時使用。Cagle 等[7]研究表明，哆咪靜在雄性小鼠會有66%的概率造成尿道栓塞，但本研究中未觀察到，可能尿道栓塞是反復(fù)哆咪靜麻醉才會導(dǎo)致的現(xiàn)象； 至于舒泰50 和哆咪靜復(fù)合麻醉針對其他品系小鼠的麻醉作用，有待后續(xù)研究。