不同樣品制備方法對一次性使用灌流器熱原試驗的影響

曾裕 李偉松 楊立峰 田勝慧 廣東省醫(yī)療器械質量監(jiān)督檢驗所 （廣東 廣州 510663）

內容提要： 目的：研究一次性使用血液灌流器不同樣品制備方法所獲得的供試液對其熱原質檢測的影響。方法：參照GB/T14233.2-2005和GB/T16886.12-2005的試驗原則，對一次性使用血液灌流器不同生產企業(yè)的不同批次不同規(guī)格，運用不同的樣品制備方法進行了熱原檢測。結果與結論：模擬臨床使用的樣品制備方法適合灌流器的生物相容性試驗。

不同樣品制備方法所獲得的供試液對其熱原檢測有一定的影響[1]。一般制樣的方法是參照GB/T14233.2-2005和GB/T16886.12-2005的試驗原則，但是對于特殊性狀的醫(yī)療器械產品的制樣需要結合各自的產品特性以及臨床使用來進行制樣[2-4]。結合實驗數(shù)據(jù)進行研究。

血液灌流器，是開展血液灌流必不可少的醫(yī)療器械。灌流器外殼為塑料，內容物為已處理包膜吸附劑，屬于三類高風險醫(yī)療器械，主要用于血液凈化治療。YY 0464-2009《一次性使用血液灌流器》[5]行業(yè)標準中，要求要做熱原試驗，但并未有具體的樣品制備方法，本文主要討論制樣方法對熱原試驗的影響。

1.材料與方法

1.1 一般材料

試驗樣品：一次性使用血液灌流器；浸提介質：生理鹽水；試驗動物：新西蘭大白兔，健康無孕，體重不低于2.0kg（廣東省醫(yī)學實驗動物中心）。

1.2 方法

自兔耳緣靜脈緩緩注入規(guī)定劑量并溫熱至約38°C的樣品浸提液。注射完畢，每隔30min測量體溫1次，共6次。以6次體溫中最高的1次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高溫度[2]。

1.3 結果評價

3只兔子體溫升高均低于0.6°C，且體溫升高總和低于1.3°C。在該試驗條件下，試驗樣品浸提液熱原檢查合格。

2.不同的制樣方法

①參照GB16886.12-2005，不規(guī)則產品浸提比例0.2g/mL，對外殼進行切割后（型號規(guī)格HA130、HA330），取20g產品的各部件，加入100mL的生理鹽水，在37°C下浸提72h。②取滅菌后的灌流器（型號規(guī)格：HA130、HA150、HA330），按產品說明書規(guī)定的鹽水量（3000mL）預沖，再用生理鹽水充滿灌流器，37°C下浸提72h，取浸提液備用。③3000mL生理鹽水沖洗灌流器后收集100mL作為檢驗液。④直接取填充液作為供試液。

3.實驗結果

按照制樣方法①，熱原實驗結果不合格，所有兔子的反應異常，三只兔子體溫升高均高于0.6°C，三只兔子體溫升高總和高于1.3°C。

用方法②制樣后實驗，實驗過程兔子反應正常，兔子體溫升高也正常。但是也有方法②做不合格的產品（型號規(guī)格：WG130）。整改的方法是制樣方法③，整改后實驗結果是三只兔體溫升高均低于0.6°C。

有很多產品（型號規(guī)格如下表1），按方法④進行實驗，按家兔體重每公斤注射10mL，注射完畢，新西蘭兔反應正常，三只兔子體溫升高均低于0.6°C，且體溫升高總和低于1.3°C。反應出他們的填充液是沒有熱原反應的。見表1。

4.討論

按照GB16886.12-2005，不規(guī)則產品浸提比例0.2g/mL的制樣方案，顯然對于一次性使用灌流器來說是不合適的，以至于現(xiàn)在所有的灌流器產品基本上都不會采用這種方法來制備樣品試驗液。因為灌流器內裝的吸附劑大都是具有輕小、易黏附的特性，切割取出后容易污染，再加上被破壞的外殼，稱取的比例不易把握。在稱取樣品時，也很容易使樣品污染，導致熱原的發(fā)生。

那么灌流器的樣品制備方法就要參照GB/T16886.12-2005《醫(yī)療器械生物學評價 第12部分：樣品制備與參照樣品》[3]3.14，模擬使用浸提：符合GB/T16886本部分要求的浸提，通過評價在常規(guī)使用某一器械過程中，患者或者使用者接受可瀝物質水平而使用的一種模擬產品使用的浸提。取填充液作為供試液和預沖洗后灌滿浸提得出浸提液，實驗的結果表明，這兩種的樣品制備方法可取。這是企業(yè)根據(jù)自己的灌流器的特性制定的制樣方案。填充液是已經(jīng)對灌流器內吸附劑（樹脂）進行過沖洗排污后密封包裝進血室內的無菌液體（符合《中華人民共和國藥典》[6]2015年版要求的注射用水），保證了無菌狀態(tài)下保存，不受污染的情況下，直接用填充液進行試驗。而選取預沖后灌滿浸提的操作，是參照一次性使用灌流器的使用說明書中[安裝和使用說明]“治療前的準備”和“預沖”[7]。實際使用中也有血漿灌流的方法：“連接灌流管路，用3000mL生理鹽水沖洗管路[8]。自患者肘正中靜脈插管雙腔管，動脈血經(jīng)血漿分離器后，形成血循環(huán)和血漿循環(huán)，血漿經(jīng)過灌流器?！蹦M臨床使用的沖洗方法，預沖后灌滿取浸提液備用，實驗數(shù)據(jù)正常。

樣品制備的方法，都是要在保證樣品不受污染，并且在制樣過程中，沒有使樣品及浸提液受污染的情況下進行。由于它組成成分的特殊性，以及在制樣過程中不易污染的操作，在熱原實驗的樣品制備時，可以參照樣品的使用說明書上的操作進行制樣，對它的“治療前準備”與“預沖”均要參考，使樣品的制備盡可能與實際臨床應用相契合。若是有實驗過程的異常，應采取復試來進行驗證。

表1. 產品型號規(guī)格(mL)