動(dòng)物寄生蟲的實(shí)驗(yàn)檢查法

孔凡兵

（黑龍江省雙鴨山市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，黑龍江 雙鴨山 155100）

通過實(shí)驗(yàn)室手段檢查糞便或血液，可以確定宿主是否感染了體內(nèi)寄生蟲，及其感染種類和感染強(qiáng)度。其中，糞便檢查在寄生蟲病診斷、流行病學(xué)調(diào)查和驅(qū)蟲效果評(píng)定上均具有重要意義。

1 小動(dòng)物的體內(nèi)寄生蟲的檢查

小動(dòng)物的體內(nèi)寄生蟲檢查是通過檢查糞便中的寄生蟲卵進(jìn)行。應(yīng)采用新鮮糞便樣品進(jìn)行檢查，最好用糞環(huán)從直腸中采集糞便樣品。采集的糞樣應(yīng)置于密閉容器中，加注適當(dāng)標(biāo)識(shí)后送交診斷實(shí)驗(yàn)室。寄送的糞樣應(yīng)固定在10%甲醛溶液中，也可在冷凍條件下寄送。其他防腐劑（如乙酸鈉甲醛、聚乙烯醇）能更好地保護(hù)原蟲，也有助于特殊染色（如三色染色法、鐵蘇木精染色法）。

可采用糞便直接涂片法和糞便漂浮法進(jìn)行糞常規(guī)檢查。通過在混合糞便樣品中（用木制棉簽的一頭蘸取糞便）加1滴生理鹽水（用于可游動(dòng)的生物）直接制備涂片，然后加入盧戈氏液染色，以觀察內(nèi)部結(jié)構(gòu)，如賈第鞭毛蟲屬寄生蟲，并在載玻片上蓋上蓋玻片。糞便漂浮法主要用于診斷，需要大約2 g糞便，制備較為干凈的樣品。常用的漂浮液是糖和硝酸鈉。采用硫酸鋅漂浮法時(shí)，需要連續(xù)檢查3 d，這是檢查賈第鞭毛蟲包囊的首選方法，這種包囊隨糞便排泄時(shí)呈間歇式排泄，故需多次檢查。采用貝爾曼沉淀法可對(duì)能游動(dòng)的線蟲幼蟲進(jìn)行收集和濃縮；一種可用于小動(dòng)物的簡(jiǎn)便方法是在一濾茶器放置幾層紗布，在其錐形漏嘴的廣口端裝上橡膠管和開關(guān)，將約2 g糞便置于紗布內(nèi)，通過漏嘴加注溫?zé)岬淖詠硭蛏睇}水，1 h后取沉渣物進(jìn)行檢查。幼蟲由于重力作用而下沉，可從漏斗底部收集，并進(jìn)行鏡檢。檢查寄生蟲的幼蟲時(shí)，由于幼蟲不易漂浮，也可采用特殊程序，如福爾馬林乙酸乙酯沉淀法。采用飽和糖溶液漂浮法，聚焦到蓋玻片下，即可檢查到隱孢子蟲卵囊（4~6 μm）或弓形蟲卵囊（12 μm）。在進(jìn)行鏡檢前10 min內(nèi)，載玻片上的卵囊即可浮動(dòng)到蓋玻片的底面。

采集1滴血液直接制備血涂片，可用于檢查能運(yùn)動(dòng)的犬惡絲蟲的微絲蚴，但這不是唯一的檢查方法。更精確的血液檢查方法是改良的諾茨檢查法：在15 mL試管中加入2%福爾馬林溶液9 mL，再加入1 mL血液，以1500 r·min-1離心。棄去上清液，在沉淀中加入1滴亞甲基藍(lán)染液，混勻后吸取適量滴在載玻片上，蓋上蓋玻片后進(jìn)行顯微鏡檢查，即可將犬惡絲蟲的微絲蚴與非致病性隱蔽棘唇線的微絲蚴辨別開。對(duì)已經(jīng)過治療的犬，首選方法是防止患犬體內(nèi)的犬惡絲蟲變成微絲蚴，并采用兩品化ELISA試劑盒檢測(cè)犬惡絲蟲雌成蟲的循環(huán)子宮抗原。貓發(fā)生惡絲蟲病時(shí)，由于惡絲蟲的數(shù)量太少，因此無法依據(jù)微絲蚴血癥或抗原血癥的檢查結(jié)果進(jìn)行確診；可以利用犬惡絲蟲的抗體滴度，檢測(cè)貓發(fā)生的提前暴露和可能存在的現(xiàn)癥感染。

2 家畜的體內(nèi)寄生蟲的檢查

應(yīng)使用塑料手套從牧場(chǎng)采集新鮮的家畜糞便樣品，最好從直腸采樣。應(yīng)將樣品置于密閉樣本瓶?jī)?nèi)，并進(jìn)行恰當(dāng)標(biāo)識(shí)。由于不同動(dòng)物排出的寄生蟲卵囊數(shù)量差異很大，因此最少應(yīng)采集10頭動(dòng)物的糞便，才能作為代表畜群樣本的數(shù)量。可以將多份糞便樣品充分混合形成一個(gè)組合樣品，以便對(duì)一個(gè)畜群的混合樣品進(jìn)行檢查?？梢圆捎酶牧嫉耐箍敌请x心漂浮法或類似方法，計(jì)算糞便中的蟲卵數(shù)，以便對(duì)發(fā)生“胃腸道寄生蟲綜合征”中的線蟲（如牛的毛圓線蟲幼蟲）相對(duì)感染負(fù)荷進(jìn)行評(píng)估，也可用于檢查球蟲和其他寄生蟲，如肺線蟲的幼蟲和絳蟲。取3 g糞便樣品置于容器內(nèi)，懸浮于約15 mL水中，通過紗布過濾到15 mL離心管內(nèi)，以1 500 r·min-1離心3 min。棄去上清液，在沉淀中加入飽和糖溶液混均，將混合液倒入小管內(nèi)，用吸管逐漸注滿小管，使液面突出于管口形成正彎月透鏡形，然后在管口蓋上22 mm×22 mm的蓋玻片。將試管再次以1 500 r·min-1低速離心5 min。蓋玻片上的表膜就可能含有蟲卵，將蓋玻片取下，置于顯微鏡載玻片上，對(duì)毛圓線蟲和類圓線蟲蟲卵進(jìn)行計(jì)數(shù)。所得總數(shù)除以3可得到每g糞便樣品的蟲卵數(shù)（EPG）。如果存在其他寄生蟲，也應(yīng)記錄，一般豐度指數(shù)表示方法為＋1（極少）、＋2（少量）、＋3（大量）或＋4（不計(jì)其數(shù)）。

飽和食鹽溶液（sg為1.20）是檢查家畜寄生蟲的一種廉價(jià)介質(zhì)，但食鹽對(duì)金屬可能有腐蝕性。硫酸鎂（sg1.20）是檢查豬糞的首選介質(zhì)。計(jì)算EPG時(shí)，也可使用特制載玻片，其上有已知容量的計(jì)數(shù)室，尤其是對(duì)小反芻動(dòng)物。用巴斯德吸管將含有濾液（通常是飽和鹽水）中的糞樣注入到計(jì)數(shù)板上每個(gè)計(jì)數(shù)室內(nèi)，在低倍顯微鏡下進(jìn)行蟲卵計(jì)數(shù)。常用的計(jì)數(shù)板是麥克馬斯特計(jì)數(shù)板，計(jì)數(shù)板上有兩個(gè)計(jì)數(shù)室，每個(gè)計(jì)數(shù)室的容積為0.15 mL。例如，如果3 g糞便與42 mL濃縮液混合，然后進(jìn)行計(jì)數(shù)，所得蟲卵數(shù)乘以50即可得糞樣中的EPG。在幼齡動(dòng)物檢出的EPG值和相對(duì)蠕蟲數(shù)之間的相關(guān)性一般比較高，但成年動(dòng)物檢出的EPG值通常比較低（<5EPG）或出現(xiàn)負(fù)數(shù)。青年牛的EPG值一般是成年牛的10倍，青年牛的EPG>50表明有中度感染，EPG>500則表明蟲卵數(shù)量很多需要進(jìn)行治療。