美洲大蠊的炮制、提取工藝及藥理活性的研究進(jìn)展

耿巧玉，劉金安，范路路，田景振

（山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355）

美洲大蠊Periplaneta americana(L.)為昆蟲綱，蜚蠊目，蜚蠊科，俗稱“蟑螂”。在《本草綱目》、《名醫(yī)別錄》、《本經(jīng)》、《神農(nóng)本草經(jīng)》、《新修本草》中均有記載。美洲大蠊含有多種活性成分，具有消炎、促進(jìn)創(chuàng)面愈合等作用?，F(xiàn)代研究表明，美洲大蠊提取物能抗腫瘤、抗氧化、強(qiáng)心升壓、修復(fù)組織等功效。

1 產(chǎn)地加工

藥材的產(chǎn)地加工對(duì)后期實(shí)驗(yàn)進(jìn)行有著不可忽視的意義，不同的加工方法對(duì)藥材中有效成分的作用不同，如高溫會(huì)破壞動(dòng)物藥材中的某些蛋白質(zhì)成分，而動(dòng)物藥中大多有效物質(zhì)是易降解、變性、失活的蛋白質(zhì)類活性成分，因此產(chǎn)地加工的方式對(duì)藥材中物質(zhì)有顯著影響。

湖南中藥飲片炮制規(guī)范2010年版規(guī)定美洲大蠊的炮制步驟為：取原藥材，去除雜質(zhì)，曬干或60 ℃烘干。有研究[1]制備治療抗癌藥物的產(chǎn)地加工是：捕捉后用乙醇浸泡殺死或沸水燙殺死，凍干。趙德潤[2]用美洲大蠊鮮品作活性肽時(shí)，將美洲大蠊鮮品置沸水中燙后，加入其重量3～10倍水直接過組織破碎機(jī)破碎制得美洲大蠊勻漿，再放入蒸煮鍋內(nèi)燒開煮10～40 min，靜置放涼將上層脂肪收取棄用，即得美洲大蠊鮮品勻漿。有研究[3]將美洲大蠊的成蟲用不同溫度的熱水燙殺，75 ℃熱水燙殺至少30 s可有效殺死美洲大蠊，且有效成分含量最高；同時(shí)研究干燥溫度，結(jié)果表明，75或80 ℃制備的美洲大蠊各種有效成分含量均較高，是最優(yōu)的干燥溫度。有研究[4]采用電擊法、窒息法和冷水溺亡法3種非加熱方法制備美洲大蠊藥材，通過測定醇浸出物、氨基酸含量發(fā)現(xiàn)，3種加工方法均比傳統(tǒng)加工方法含量高，但窒息法中的醇浸出物和氨基酸含量比電擊法和冷水溺亡法高。有研究[5]取干美洲大蠊置入牛奶，拌勻，悶潤，干燥；牛奶與美洲大蠊的用量比為1:20～1:1，此法可改善美洲大蠊的口味，使病患更易接受，且有效成分基本未變。

2 提取工藝

鄒俊波等[6]研究發(fā)現(xiàn)，藥材:70%乙醇為1:12、提取2次，每次提取120 min時(shí)，測得的氨基酸含量和干膏率與預(yù)測值基本一致。何正春等[7]按干燥蟲體與95%乙醇料液比為1:15進(jìn)行冷提取，用石油醚脫脂，不同濃度乙醇洗脫，測得提取物可選擇性地抑制或殺滅人和小鼠腫瘤細(xì)胞。王濤等[8]研究了美洲大蠊蛋白質(zhì)的提取工藝優(yōu)化及其對(duì)傷口愈合的影響，發(fā)現(xiàn)1.5%堿80 ℃提取1 h，蛋白提取率最高；1.0%鹽40 ℃提取2 h，蛋白提取率最高；酶為藥材用量的0.6%，45 ℃酶解2 h時(shí)，蛋白提取率最高；小鼠傷口愈合實(shí)驗(yàn)表明，提取的蛋白質(zhì)不僅能加快傷口愈合，還使愈合時(shí)間相較于正常情況縮短一半。周湘等[9]采取了水提和醇提兩種方法，先用1:5干燥蟲粉和石油醚超聲脫脂30 min 2次；水提用15倍量提取3次，每次30 min；醇提用15倍量95%乙醇超聲提取3次，每次30 min；結(jié)果表明，蟲粉混懸液和水提物對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用效果較好，醇提物次之。余昕等[10]采用滲漉法、超聲法和乙醇回流法提取美洲大蠊粗粉，研究對(duì)3種腫瘤細(xì)胞SMMC-7721、K562、HCT116增殖的影響，發(fā)現(xiàn)滲漉法提取的美洲大蠊對(duì)腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的抑制作用。

3 美洲大蠊抗腫瘤的機(jī)制研究

3.1 體外研究

李婷等[11]研究表明，美洲大蠊提取物CⅡ-3和脫脂膏對(duì)線粒體膜電位降低有一定作用，但是CⅡ-3較脫脂膏作用強(qiáng)；發(fā)現(xiàn)CⅡ-3和脫脂膏能抑制Bel-7402/5-Fu的Bcl-2蛋白表達(dá)，且抑制作用與劑量成正相關(guān)；可促進(jìn)Bax、Caspase-3，Caspase-9蛋白表達(dá)，且與劑量成正比。張蕊等[12]研究表明，美洲大蠊脫脂膏、多肽及CⅡ-3能抑制人肝癌細(xì)胞HCC HepG2增殖和遷移，且呈時(shí)間、劑量依賴關(guān)系；免疫細(xì)胞化學(xué)染色法和ELISA法表明，美洲大蠊脫脂膏、多肽和CⅡ-3能降低人肝癌細(xì)胞HCC HepG2中血管內(nèi)皮生長因子VEGF蛋白的表達(dá)。杜澤軒[13]研究了美洲大蠊不同極性部位的抗氧化活性發(fā)現(xiàn)，乙酸乙酯部位有較強(qiáng)的體外抗氧化活性，且對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2、人肺癌細(xì)胞A549、人骨肉瘤細(xì)胞U20S、人宮頸癌細(xì)胞Hela、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7均有促進(jìn)細(xì)胞增殖的活性，能促進(jìn)大鼠正常肝細(xì)胞 BRL-3A 增殖活性。

3.2 體內(nèi)研究

謝波等[14]研究表明，美洲大蠊提取物能促進(jìn)大鼠膀胱上皮愈合；可使大鼠膀胱上皮炎性細(xì)胞浸潤大幅度降低。張丹等[15]研究表明，美洲大蠊提取物中含有多種多肽、氨基酸；對(duì)小鼠肉瘤細(xì)胞S180有顯著地體內(nèi)抗腫瘤活性，該活性表達(dá)可能與增強(qiáng)荷瘤小鼠的免疫功能有關(guān)。

常旭等[16]研究表明，HFDT1、CⅡ-3高、 低劑量及環(huán)磷酰胺CTX均能抑制腫瘤生長。與陽性藥組比較，HFDT1、CⅡ-3高、低劑量能升高荷瘤小鼠的體質(zhì)量，提高免疫細(xì)胞數(shù)量，提高脾、胸腺指數(shù)（P＜0.05），提高NK細(xì)胞比例及脾淋巴細(xì)胞總數(shù)（P＜0.05）；與模型組比較，三者均提高脾T細(xì)胞比例。

4 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

目前美洲大蠊還未被收錄到藥典中，因此出現(xiàn)了不同的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有藥材本身的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，也有美洲大蠊提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

4.1 美洲大蠊

湖南省2009年中藥材標(biāo)準(zhǔn)中美洲大蠊的【檢查】水分 照水分測定法測定，不得過13.0%。 總灰分 不得過8.0%。 酸不溶性灰分 不得過1.6%；浸出物 照醇溶性浸出物測定法項(xiàng)下的熱浸法測定，用50%乙醇作溶劑，不得少于20.0%。

張丹[17]在其申請(qǐng)的專利中寫到美洲大蠊凍干粉質(zhì)量控制方法，所述多肽含量測定方法為：用folin-酚試劑法測定多肽含量，暫定凍干粉每克含多肽以牛血清白蛋白計(jì)不得少于53.94%；所述氨基酸含量測定方法為：用茚三酮法測定氨基酸含量，暫定凍干粉每克氨基酸含量以丙氨酸計(jì)不得少于4.51%。

4.2 美洲大蠊提取物

張臻等[18]采用薄層色譜法鑒別美洲大蠊提取物；用UV-可見分光光度法測定總氨基酸的含量，綜合考慮多種因素，將美洲大蠊水提物總氨基酸的含量標(biāo)準(zhǔn)稍微降低，暫定美洲大蠊水提物的谷氨酸含量不能少于0.049%，總氨基酸含量不能少于7.03%；照《中國藥典》 2015年版一部附錄IX H項(xiàng)下水分測定第一法對(duì)提取物的水分進(jìn)行測定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，美洲大蠊提取物的平均含水量是4.67%，將美洲大蠊提取物的含水量標(biāo)準(zhǔn)按150%降低，規(guī)定水分不能超過7.0%。

5 展望

通過總結(jié)近年美洲大蠊的研究文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，美洲大蠊蛋白提取物對(duì)于某些腫瘤作用較好，且產(chǎn)地、加工工藝及脫脂工藝不同時(shí)，其體內(nèi)體外抗腫瘤效果仍顯著。美洲大蠊作為中藥抗腫瘤有較好的研究前景，相對(duì)于放化療，能大大的降低患者身心病痛。綜上所述，對(duì)于美洲大蠊的炮制工藝有待進(jìn)一步研究；對(duì)于抗病毒、抗菌方面仍有待進(jìn)一步研究。