牛胚胎移植技術在涼山黃牛的應用試驗報告

安拉扎，張 濤，陳仕毅，賈先波，吉米有爾

(1.四川省涼山彝族自治州畜牧獸醫(yī)科學研究所，四川 西昌 615000；2.四川農(nóng)業(yè)大學，成都 溫江 611130;3.四川省昭覺縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，四川 昭覺 616150)

涼山黃牛于1995年全國畜禽品種補充調(diào)查時命名,是昭覺縣的優(yōu)勢畜種，是一種以放牧為主的役肉兼用型小型地方品種，主要分布在四川省涼山州境內(nèi)及攀枝花市部分縣區(qū)，適宜在海拔1500m以上的二半山區(qū)生長、繁衍。該品種在生產(chǎn)性能、抗病力、適應性等方面都表現(xiàn)出了特有的品質(zhì)，2017年末昭覺縣存欄64348頭。四川肉牛創(chuàng)新團隊彝區(qū)肉牛工作崗位為推動涼山昭覺縣肉牛產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，加快涼山黃牛良種化進程，為品種改良提供一條新的技術思路。崗位團隊從2018年7月起，在四川肉牛創(chuàng)新團隊農(nóng)區(qū)肉牛崗位、中國農(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所專家的協(xié)作指導下，共同在彝區(qū)崗位工作示范縣昭覺縣開展肉牛同期發(fā)情、胚胎移植技術的試驗研究工作?，F(xiàn)將胚胎移植應用試驗情況報告如下：

1 材料

1.1 胚胎來源

中國農(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所提供澳大利亞進口和牛凍胚。

1.2 移植地點

四川省涼山州昭覺縣特布洛鄉(xiāng)特布洛村、慶恒鄉(xiāng)慶恒村、比爾鄉(xiāng)補各洛呷村、灑拉地坡鄉(xiāng)爾打火村4個鄉(xiāng)鎮(zhèn)。

1.3 使用藥物

黃體酮陰道緩釋劑(孕酮栓CIDR):新西蘭DEC國際有限公司生產(chǎn)、生產(chǎn)批號：X043691

氯前列醇鈉注射液(PG-CL):寧波三生生物科技有限公司生產(chǎn)2ml(0.2mg×10支)、生產(chǎn)批號S180901

鹽酸利多卡因注射液:石藥銀湖制藥有限公司生產(chǎn)5ml(0.1g×5支)、生產(chǎn)批號：1061607311

2 方法

2.1 受體牛的選擇

對移植地養(yǎng)牛戶飼養(yǎng)的牛只保定，掏出直腸內(nèi)積糞，用0.1%的高錳酸鉀(KMnO4)液清洗肛門和外陰，然后進行直腸檢查，篩選出29頭2～7歲、生長發(fā)育良好、空懷、發(fā)情周期正常、無生殖系統(tǒng)疾病、產(chǎn)犢3個月以上的涼山黃牛、蜀宣花牛雜交牛作為受體牛。其中涼山黃牛18頭、蜀宣花牛雜交牛11頭。

2.2 同期發(fā)情處理

2.2.1 7月2日埋植孕酮栓 對篩選的29頭受體牛作埋植孕酮栓處理。將受體牛保定，操作人員穿好防護服和手套，在清水中清洗放栓槍，然后放入新潔爾滅消毒液中浸泡1min。將孕酮栓放入槍中并用液體石蠟涂抹在槍表面。再用75%酒精棉消毒外陰部。將放栓槍正面向上(開口向上)輕輕用力推入陰道前部，推送孕酮栓并緩慢旋轉取出放栓槍。

2.2.2 7月11日注射PG 對4頭掉栓受體牛不再進行后期試驗處理。慶恒鄉(xiāng)慶恒村掉栓1頭、比爾鄉(xiāng)補各洛呷村掉栓3頭。對剩余的25頭受體牛注射了PG，每頭牛肌肉注射0.6mg。

2.2.3 7月14日撤栓 提起牛尾，外陰部拉住塑料線輕輕扯出孕酮栓。

2.2.4 7月15日下午觀察發(fā)情并配種 如出現(xiàn)受體牛發(fā)情可用凍精輸精一次。

2.2.5 7月16日配種 早上進行二次配種。

個別受體牛先出現(xiàn)發(fā)情可進行冷凍精液輸精，間隔12小時兩次輸精，這樣可提高胚胎移植的成活率。

2.3 移植

7月22日對同期發(fā)情處理的25頭受體牛進行直腸檢查，對黃體質(zhì)量較好的11頭受體牛進行胚胎移植。其中涼山黃牛7頭、蜀宣花牛雜交牛4頭。

2.3.1 直腸檢查 對受體牛進行直腸檢查，確定黃體發(fā)育情況。用直腸檢查法依次檢查子宮頸、左右兩側子宮角、卵巢的發(fā)育情況，對符合條件的受體牛同時要檢查卵巢的黃體，根據(jù)黃體大小、發(fā)育成度、質(zhì)地軟硬、卵巢基礎和有無排卵點分為A、B、C三級。A級為正常，卵巢基礎好，黃體直徑在1.5cm 以上，質(zhì)地軟硬適中，觸摸感覺如豬肝，與卵巢銜接好，有排卵點；B級為黃體直徑在1～1.5cm之間，質(zhì)地稍軟或稍硬，與卵巢連接痕跡隱性黃體與排卵點不明顯，卵巢基礎薄弱；C級為黃體過小，與卵巢連接痕跡明顯，有小卵泡或卵巢基礎過差。C級不能作為黃體移植，視為廢棄，A、B級分別進行胚胎移植[1]。

2.3.2 胚胎移植 對黃體質(zhì)量較好的11頭受體牛進行胚胎移植。

方法：第一步：將胚胎裝入輸胚槍。將細管在36℃的溫水中浴浸10S解凍胚胎，剪去細管封口端，裝入輸胚槍。第二步：將受體牛保定好，掏出直腸積糞，用0.1%高錳酸鉀(KMnO4)溶液沖洗并用毛巾將牛外陰部擦拭干凈，再用75%酒精棉消毒外陰部。第三步：移植前進行硬膜外腔麻醉。在受體牛尾根部1～2尾椎間用酒精棉進行擦拭消毒，針頭呈45度斜向下刺入1～2尾椎間3CM左右，注入3mL2%鹽酸利多卡因注射液，便于胚移進行。第四步：輸胚時用左手扒開外陰, 右手持輸胚槍插入陰道。通過直腸把握法將胚胎植入有黃體一側的子宮角的大彎處(上1/3～1/2處)，在5min內(nèi)完成移植操作。移植時要做到輕、穩(wěn)、快，防止用力不當損傷子宮造成感染，尤其在穿過子宮頸時必須順著子宮頸螺旋方向前進[2]。

受體牛移植后盡量不要驅趕和劇烈運動，也不要與當?shù)毓；炷?，以免影響胚胎著床?/p>

3 妊娠檢查

2018年10月22日初步診斷受體牛妊娠5頭。其中涼山黃牛4頭、蜀宣花牛雜交牛1頭。經(jīng)檢查確定妊娠的受體母牛應加強飼養(yǎng)管理，保證胎兒和母牛的營養(yǎng)需要。

4 試驗結果

妊娠牛只已分別于2019年4月22日、2019年4月28日、2019年5月1日成功產(chǎn)犢公牛3頭。慶恒鄉(xiāng)慶恒村1頭、特布洛鄉(xiāng)特布洛村1頭、比爾鄉(xiāng)補各洛呷村產(chǎn)1頭。牛只被毛黑色，精神狀態(tài)良好。產(chǎn)犢受體牛均為涼山黃牛。初生重分別為25.0kg、24.5kg、25.5kg，均顯著高于涼山黃牛初生重 13～16kg，其余2頭出現(xiàn)流產(chǎn)，未能正常產(chǎn)犢。

5 結論

(1)胚胎移植11頭，成功受孕5頭，受孕率45%。因此，在涼山利用涼山黃牛作為胚胎移植受體牛開展胚胎移植技術是可行的。

(2)此次進行胚胎移植受體牛11頭，其中涼山黃牛7頭、蜀宣花牛雜交牛4頭。試驗成功的產(chǎn)犢受體牛均為涼山黃牛，蜀宣花牛雜交牛只有1頭妊娠，但中途出現(xiàn)流產(chǎn)。涼山黃牛因長期以放牧為主，對涼山氣候、草料及飼養(yǎng)方式等的適應性非常強，具有耐粗飼、耐寒、耐勞、抗病力強的特點。因此胚胎移植應選擇更適應當?shù)厣鷳B(tài)環(huán)境的本地牛為佳。

(3)篩選的空懷、健康無生殖疾病的受體牛29頭，經(jīng)同期發(fā)情處理，達到移植條件的受體牛11頭，僅占同期發(fā)情處理牛的37.93%；胚胎移植受體牛11頭，成功產(chǎn)犢3頭，僅占27%。主要原因是受昭覺縣受地理環(huán)境、養(yǎng)殖習慣的影響，當?shù)厝馀ｏ曫B(yǎng)以放牧、單戶散養(yǎng)為主。養(yǎng)殖戶養(yǎng)殖技術水平較低，不能及時把握牛只發(fā)情狀態(tài)；飼養(yǎng)方式落后，肉牛營養(yǎng)水平跟不上；單戶散養(yǎng)的模式給技術人員的適時跟蹤造成一定難度等原因所導致。