細(xì)胞蠟塊免疫標(biāo)記及基因檢測(cè)在漿膜腔積液中的臨床應(yīng)用意義

鄭建國(guó)，王敏，劉影

（廊坊市第四人民醫(yī)院，河北 廊坊 065700）

0 引言

由于漿膜腔積液是臨床多種疾病常見表現(xiàn)，其性質(zhì)的判斷，對(duì)于臨床診斷和治療具有重要意義，惡性腫瘤患者在疾病晚期往往會(huì)伴有漿膜腔積液現(xiàn)象，通常行細(xì)胞病理學(xué)診斷，且具有較大的優(yōu)勢(shì)[1-2]。因此我們采用細(xì)胞蠟塊技術(shù)，結(jié)合免疫組化染色診斷的應(yīng)用，能夠有效對(duì)其進(jìn)行鑒別診斷，并幫助判斷預(yù)后等、對(duì)于確診的肺腺癌患者進(jìn)行基因檢測(cè)，從而對(duì)于臨床分子靶向藥物篩選提供新型的檢測(cè)標(biāo)本來源。為進(jìn)一步進(jìn)行驗(yàn)證，本文選擇我院患者開展分析，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

擇取在2017 年1 月至2018 年12 月到我院就診的漿膜腔積液患者，有145 例進(jìn)行脫落細(xì)胞學(xué)檢查，采用細(xì)胞蠟塊技術(shù)，制作收集其細(xì)胞蠟塊共218個(gè)。其中男性、女性例數(shù)分別為70 例、75 例，年齡28～91 歲，平均（65.46±6.84）歲。其中66 例診斷為惡性漿膜腔積液，其中31 例行EnVision 二步法免疫組化染色。

1.2 方法

（1）細(xì)胞蠟塊：將送來檢查的液體需要在室溫下放置沉淀，時(shí)間約為20min，然后取出200mL，分別放入到4 個(gè)離心管中，并進(jìn)行20min 離心處理，速度為3000r/min，將上清液去掉，然后同福爾馬林（10%）充分混勻，進(jìn)行離心處理，紅細(xì)胞多者，加入冰乙酸乙醇混懸液去除，沉淀物再加入95%乙醇混勻離心沉淀，使用濾紙將沉淀物進(jìn)行包裹，接著行脫水、切片等處理。

（2）免疫組化：選擇PAX-8、CK7、TTF-1、CK5/6、Caleretinin,、WT-1、P63、CK20、P53、Ki67、CgA、CD56、NSE、ER、PR 等抗體，采用福州邁新公司試劑，EnVision 二步法免疫組化染色，具體步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。

（3）EGFR 基因檢測(cè)：采用ARMS-PCR 方法，基因提取后進(jìn)行EGFR 檢測(cè)，操作步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

145 例患者中，胸水128 例（88.28%），腹水15 例（10.34%），心包液2 例（1.38%），66 例確診為漿膜腔惡性積液，其中31 例進(jìn)一步免疫組化檢查。胸水中19 例肺腺癌轉(zhuǎn)移，1 例肺鱗狀細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移，1 例轉(zhuǎn)移惡性黑色素瘤，1 例惡性間皮瘤，2 例肺小細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移，1 例卵巢漿液癌轉(zhuǎn)移；腹水中：2例肺腺癌轉(zhuǎn)移，2 例胃腺癌轉(zhuǎn)移，1 例結(jié)腸腺癌轉(zhuǎn)移，2 例卵巢癌轉(zhuǎn)移。肺腺癌中有10 例檢測(cè)發(fā)現(xiàn)有EGFR不同外顯子突變，并進(jìn)行分子靶向藥治療。

3 討論

在臨床中，對(duì)漿膜腔積液的性質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確判斷對(duì)于科學(xué)、合理治療的意義重大，特別是惡性胸腔積液患者，因?yàn)槭艿椒e液的影響，對(duì)影像學(xué)檢查，內(nèi)鏡活檢獲取標(biāo)本等造成重大影響，從而影響疾病的鑒別、診斷與治療等[3-4]。但是漿膜腔積液的成分較為復(fù)雜，而且細(xì)胞的種類較多，如果僅行傳統(tǒng)涂片鑒別，對(duì)于惡性腫瘤診斷分型很困難，又存在不能長(zhǎng)期保存及重復(fù)使用，無法免疫組化及基因檢測(cè)，是無法有效滿足臨床診斷要求的[5]。而細(xì)胞蠟塊則能夠通過離心處理，將干擾結(jié)果的紅細(xì)胞因素去除，細(xì)胞的組織學(xué)結(jié)構(gòu)特征更明顯，可進(jìn)行多次切片用以免疫標(biāo)記，還可以進(jìn)行EGFR 基因突變檢測(cè)，因此具有惡性積液檢出率高，能夠準(zhǔn)確診斷腫瘤分型，判斷查找原發(fā)部位，利于鑒別診斷等優(yōu)勢(shì)[6-7]。CK7抗體同CK20 抗體進(jìn)行組合，能夠?qū)ο侔┑钠鹪催M(jìn)行鑒別；而同TTF-1、NapSinA 進(jìn)行組合，能夠準(zhǔn)確診斷肺腺癌轉(zhuǎn)移；與PAX-8、WT-1、ER、PR、P53、Ki67 等對(duì)于卵巢癌轉(zhuǎn)移診斷，尤其是在卵巢漿液性癌中表達(dá)極高。CR 是間皮細(xì)胞特異性抗體CK5/6、WT-1、D2-40 在對(duì)間皮瘤以及間皮細(xì)胞進(jìn)行鑒別的時(shí)候，聯(lián)合應(yīng)用能夠提升診斷準(zhǔn)確率。對(duì)于肺腺癌進(jìn)一步進(jìn)行EGFR 基因突變檢測(cè)，則能夠幫助對(duì)EGFR-TKI靶向治療的敏感情況進(jìn)行預(yù)測(cè)。就現(xiàn)階段而言，在治療癌癥病患的時(shí)候，治療觀念正在向著循證醫(yī)學(xué)、精準(zhǔn)醫(yī)療，靶向性治療等模式進(jìn)行轉(zhuǎn)變，所以需要對(duì)病理標(biāo)本進(jìn)行免疫組化檢查，以便對(duì)于腫瘤準(zhǔn)確診斷分型，查找原發(fā)部位，從而指導(dǎo)治療方案判斷預(yù)后，進(jìn)行基因檢測(cè)、對(duì)于腫瘤患者進(jìn)行靶向治療、合理且科學(xué)的選擇治療藥物，具有重大意義[9-10]。

綜上所述，對(duì)于漿膜腔積液患者而言，選擇細(xì)胞蠟塊免疫標(biāo)記、基因檢測(cè)方式進(jìn)行檢測(cè)能夠?qū)Ψe液的性質(zhì)進(jìn)行鑒別，提高惡性漿膜腔積液檢出率，診斷惡性腫瘤類型，指導(dǎo)查找原發(fā)部位，支持判斷預(yù)后，能提供分子靶向藥物基因檢測(cè)新型標(biāo)本，幫助臨床醫(yī)生便于科學(xué)且具有針對(duì)性的制定治療方案。