小鼠抗應激性反應創(chuàng)新實驗教學改進與實踐※

程 鵬 何先元 喻錄容 張義兵

（1 重慶醫(yī)科大學實驗管理中心，重慶 401331；2 重慶醫(yī)科大學中醫(yī)藥學院，重慶 401331）

中藥藥理學是連接現代醫(yī)學和中醫(yī)藥學的關鍵節(jié)點課程，已經證明藥理學采用現代生物醫(yī)學方法及現代儀器設備能夠解釋大量的醫(yī)學現象，中藥藥理學作為藥理學和中藥學交叉綜合的學科，就是要借鑒藥理學及先進的儀器設備來研究和闡明中醫(yī)藥作用機理。通過中藥藥理學實驗來培養(yǎng)學生的創(chuàng)新能力和解決問題的探索能力，提高學生的綜合素質，是我們中藥藥理學實驗教育教學改革的重點內容，也是更快更好地使中醫(yī)藥走向世界的重要途徑［1-5］。由于中藥物質基礎的多樣性和復雜性，導致中藥效應的非線性、多效性、雙向性以及不確定性等特點，我們在實驗教學改革過程中，從培養(yǎng)學生的整體觀出發(fā)，對人參抗應激作用實驗進行改進，在豐富學生理論知識和提高實驗技能的前提下，注重鍛煉學生發(fā)現問題、分析問題和解決問題的能力，達到培養(yǎng)學生將來具備自主學習能力、獨立設計實驗能力和創(chuàng)新思維能力的高素質人才［6-10］。

1 實驗方案的設計

1.1 器材設備 圓柱型玻璃缸（50 cm×50 cm）、磨口廣口瓶300 mL、凡士林、鉛絲（每根1 g 左右）、秒表、冰塊、溫度計、小鼠灌胃器、鼠籠、電子天平、木棒等。

1.2 藥品試劑 鈉石灰、苦味酸、A 人參水煎液1 g/mL、B 黨參水煎劑1 g/mL、C 黃芪水煎劑1 g/mL、D 枸杞子水煎劑1 g/mL、E 四逆湯1 g/mL、F 附子干姜1 g/mL。

1.3 實驗動物 昆明種健康小鼠，體質量（20±2） g，重慶醫(yī)科大學動物實驗中心提供，動物許可證號：SCXK（渝） 2002-0001。

2 實驗教學實施

2.1 實驗準備 由于本次試驗屬于最后一次實驗，我們要求學生全過程參與實驗材料的準備，中藥煎劑，預制冰塊，鉛絲整理等實驗準備工作。

2.2 學生分組 將學生分成6 組，每組選用一種中藥煎劑。選小鼠60 只，隨機分成6 組，每組10 只，灌胃0.2 mL/10 g 所選中藥煎劑。

2.3 實驗過程 各組給藥后1 h 后，在小鼠尾根部束體重5% 的鉛絲，然后將小鼠放入玻璃水缸（50 cm×50 cm），內裝冰水混合物，水深40 cm，水溫0 ℃），木棒敲打水缸邊緣，刺激小鼠快速游動；并開始計時，當小鼠全身顫抖，頭沉入水中，嗆第一次水時終止計時，記錄為小鼠負重抗疲勞抗寒冷時間。然后，將每只小鼠分別放置到有鈉石灰的磨口廣口瓶中，用凡士林密封瓶口，至小鼠死亡，記錄為小鼠寒冷疲勞后耐缺氧時間。

2.4 實驗結果 每小組，記錄小鼠游泳時間，小鼠死亡時間。完整比較小鼠對不同中藥煎劑抗應激效應的結果。

3 實驗教學改革效果

3.1 教學秩序 這次實驗安排在最后一次實驗，經過前面幾次實驗的訓練，以小組為單位的實驗設計和實驗準備都比較充分，實驗操作比較熟練，實驗過程井然有序，學生能很好地完成小鼠捉持、稱重、標記、灌胃、觀察記錄等程序。小鼠數量使用比較多，基本上每個同學都有動手操作的機會，為學生們以后進一步從事研究打下比較好的基礎。

3.2 改進效果 由實驗教師準備實驗材料和設備改變?yōu)樵谇耙淮螌嶒灲Y束時布置本次實驗內容要求，學生在整理實驗臺的過程中也主動為本次實驗做準備；由單一中藥煎劑改變?yōu)槎嘟M中藥煎劑，以前只準備人參煎劑，但是改革后由于各個小組所使用中藥煎劑不一樣，可能中藥效應不一樣，學生積極性非常高，各自小組希望有不一樣的結果；以前只有一味中藥有復方和配伍，結合教材內容的變化，增加常用配伍和常用復方，引導學生對拆方和配伍理論的研究興趣，保持人參煎劑一直不變，這部分每年只能有1~2 組改變，改變后的藥理效應與往年對比，熟悉中藥藥效差異變化趨勢；以前單一疲勞應激因素改變?yōu)槎喾N綜合因素，通過低溫、負重游泳和耐缺氧等綜合因素處理，適當縮短實驗時間，同時又能使學生通過一次實驗了解不同中藥對小鼠抗應激性的作用效果不同；計算分析比較不同組別中藥煎劑之間的效果，明白中藥作用的復雜性和非線性特點。

3.3 結果考核 由于實驗課時少，本實驗實際耗時課堂是不夠的，所以考核時包括課前實驗材料設備的準備、中藥藥理學實驗技能全面考核、儀器設備歸類收放以及實驗臺整理等全過程?？己思骖檪€人和小組，個人考核主要包括小鼠捉持、灌胃、實驗結果、實驗過程記錄及實驗報告，小組考核包括某味中藥煎煮、實驗結果數據分析、實驗設備準備、實驗設備收放、實驗臺整理和實驗室清潔等，最后全班不同小組實驗結果數據分析整理成文檔保存，便于與上一年級同學實驗結果比較，作為下一年級同學分析參考。

4 結語

由于本次實驗設計是要求每個同學都有動手的機會，所以就存在即使是同一小組一種煎劑處理的小鼠，實驗結果數據差異也比較大，除去小鼠個體差異外，還要讓學生明白，不同的實驗操作者，實驗結果也會有差異，激勵學生在以后實驗研究中要熟練掌握實驗操作技能，減少人為因素差異，盡管本實驗數據結論不十分精確，只能作為分析中藥作用效果的趨勢，不能作為科學研究分析的數據，但是學生熟悉了實驗設計、操作技能和數據分析方法，為今后的研究工作打下了基礎。

本實驗在不增加實驗研究經費和實驗操作難度前提下，也可以設計同種中藥煎劑雌雄小鼠分別比較其抗應激性能力的研究，使學生通過動物實驗實際了解雌雄動物抗應激性的差異。沒有設計研究中成藥的中藥藥效，主要考慮是藥效緩慢，實驗課程內難以見到明顯的效果。中醫(yī)專業(yè)學生對本實驗設計研究興趣更加濃厚，可能與醫(yī)學專業(yè)學生更加關注藥物療效，便于指導將來臨床用藥有關，另外，中藥專業(yè)學生對藥物成分分析以及藥品生產興趣要濃厚一些，今后的實驗設計也可以根據不同專業(yè)學生的特點進行適當改革?？梢砸龑W生開展創(chuàng)新實驗研究，通過檢測SOD 以及MDA 等參數進一步分析研究不同中藥煎劑對小鼠抗應激性的差異。

隨著課時普遍減少，中藥藥理學實驗課時就更少，盡管學生有藥理學實驗操作為基礎，具體到中藥學和中醫(yī)學學生來說，其藥理學實驗操作能力還有待提高，所以中藥藥理學實驗教學課程的改革就顯得更加重要，改革的目的是使學生參與的積極性提高，只有這樣學生的實驗操作技能才能提高，我們從改變原來傳統單一的實驗教學內容和模式，構建多元化和系統性的實驗教學模式，增加實驗的趣味性，提高學生的參與度，結合實驗數據結果的不確定性，引導培養(yǎng)學生遇到問題、分析問題、解決問題的能力，也更有利于培養(yǎng)學生的創(chuàng)新性和實踐性，開拓學生研究性思維。