沙眼衣原體感染對男性精子頂體酶活性的影響

王洪華 江世文 林孟遠(yuǎn) 顧 曄 張怡璇 熊 芳 陳道楨 楊亞萍

南京醫(yī)科大學(xué)大學(xué)附屬無錫婦幼保健院（江蘇無錫 214002）

根據(jù)相關(guān)流行病學(xué)調(diào)查顯示，育齡夫婦不孕不育發(fā)生率為10%～15%，其中一半為男性原因[1-3]，導(dǎo)致男性不育的因素較多，主要分為外部因素和內(nèi)部因素，其中男性生殖系統(tǒng)炎癥可改變精子生成及成熟的微環(huán)境，是影響男性精液質(zhì)量導(dǎo)致不育的重要因素之一[4]，在影響男性不育的諸多因素中生殖系統(tǒng)感染約占4%～10%[5]?，F(xiàn)對在本院診斷為精子頂體酶活力低下并有沙眼衣原體感染的不育男性患者39例進(jìn)行治療，將結(jié)果報道如下。

合肥市軌道交通1號線車站建筑方案設(shè)計的思路及探討………………………………………………………… 閆陽（10-44）

資料和方法

一、研究對象

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡22～37歲；（2）不育時間3～9年，平均4.5年；（3）夫妻同居12個月以上，正常性生活，未采取任何避孕措施，未使女方受孕，且精液常規(guī)檢查結(jié)果參數(shù)正常者；（4）無藥物過敏史；（5）被診斷為精子頂體酶活力低下（＜36.0IU/106）并有沙眼衣原體感染。經(jīng)抗炎治療后轉(zhuǎn)為陰性的男性不育患者。按上述標(biāo)準(zhǔn)，2016年9月至2017年11月在我院生殖醫(yī)學(xué)中心就診的39例男性不育患者被納入研究，作為治療組；同時選取1年內(nèi)正常生育男性45例作為對照組。

精子頂體酶活力低下并有沙眼衣原體感染的患者的治療是口服羅紅霉素膠囊（浙江亞太藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字號：H10970189），0.15g，2次/d，連續(xù)2周，治療期間禁止同房。

二、研究方法

1. 計算機(jī)輔助精子分析 （CASA）：采用計算機(jī)輔助精子分析儀檢測精子濃度、前向運(yùn)動（RP）精子百分率等。

段文瀚解釋說，第一個“綠色”之所以叫“綠色礦山”，是因?yàn)樵铺旎捎米钕冗M(jìn)、效率最高的開采技術(shù)，極大提高了對磷礦石的利用率，做到了對資源的充分利用和循環(huán)利用。除此之外，云南的磷礦大都是膠磷礦，雜質(zhì)含量較多，這就需要采用先進(jìn)的浮選技術(shù)對膠磷礦進(jìn)行加工，使其更干凈、有害因子更少。同時，礦產(chǎn)開采完之后，云天化還會對土壤進(jìn)行回填，利用先進(jìn)技術(shù)進(jìn)行浮土植被的種植。浮土植被的種植聽起來簡單，實(shí)際上對技術(shù)有很高的要求，前期投入巨大。據(jù)段文瀚介紹，上個世紀(jì)80年代至今，云天化單是復(fù)墾植被，恢復(fù)綠色的投入就將近10億元，目的就是希望從源頭支撐整個綠色發(fā)展理念的運(yùn)行。

2. 精子形態(tài)學(xué)分析 （Diff-Quik法）：檢測精子畸形率=畸形精子數(shù)/計數(shù)精子總數(shù)×100%。

3. 檢測精子頂體酶活性：采用改良Kennedy法（試劑盒由南京欣迪生物科技公司提供）測定，正常參考值為≥36.0IU/106。

美國專利鏈接制度實(shí)施幾十年以來，隨著第IV段專利挑戰(zhàn)數(shù)量的增加，因此而引發(fā)的訴訟數(shù)量也隨之增加。據(jù)統(tǒng)計，1992-2001年10年間，美國共有75件針對首個第IV段專利聲明提起的專利訴訟，每年平均僅有7.5件；? 同注釋?。而在2003年至2009年7年間就有238件此類訴訟，每年平均達(dá)34件，且每年的訴訟量逐年上升。? RBC Capital Markets Corp. Analyzing Litigation Success Rates，January 15, 2010.

5. 精液采集及頂體酶活性測定 對于上述患者進(jìn)取精檢查（內(nèi)容包括精液常規(guī)、精子形態(tài)及頂體酶測定），受檢者禁欲3～7 d，手淫法采集精液置入干凈的一次性取精杯內(nèi)，立即在37℃恒溫水浴靜置，待其完全液化后進(jìn)行檢測。對于不液化的標(biāo)本，采用機(jī)械振蕩或吹打的方法使其液化，嚴(yán)格依據(jù)WHO第5版精液分析標(biāo)準(zhǔn)行精液參數(shù)檢查。

4. 檢測CT感染情況：嚴(yán)格按照CT-DNA 熒光定量PCR試劑盒（由中山達(dá)安基因公司提供）說明書操作，拷貝數(shù)大于103copy/mL判定為陽性。

?Helena Machado，“Biologising Paternity，Moralising Maternity:The Constitution of Parenthood in the Determination of Paternity Through the Courts in Portugal”，F(xiàn)eminist Legal Study，215(16)，2008，p．221．

三、統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 19.0 軟件，對以上數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，結(jié)果數(shù)據(jù)采用（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

由表1可見，治療組治療前后在PR精子百分率、精子濃度及精子正常形態(tài)率方面與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。精子頂體酶活性治療組治療后明顯高于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），治療后與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。沙眼衣原體感染率治療后獲得明顯改善，與治療前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），治療后與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 兩組精液指標(biāo)以及沙眼衣原體感染率精子頂體酶活性結(jié)果比較

討 論

不孕不育是困擾許多育齡夫婦的一個世界性問題。帶給社會和家庭的負(fù)擔(dān)是難以想象的，不僅加重經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，還給患者帶來很大的心理壓力。據(jù)相關(guān)流行病學(xué)調(diào)查顯示，在不孕不育夫婦中，男性因素占25%～40%，男性不育的患者數(shù)量不斷增加，受到了社會多方面的廣泛重視。導(dǎo)致不育有多種因素，備受關(guān)注的是男性生殖道感染，其中沙眼衣原體感染對正常生育力影響的機(jī)制部分已得到明確。沙眼衣原體是一種在宿主細(xì)胞內(nèi)生長的革蘭氏陰性病原微生物，全球每年大約有1億新增感染病例，在許多國家每年感染例數(shù)還在不斷增加[6,7]，有報道生殖道衣原體感染可導(dǎo)致競爭凋亡增加，引起頂體消失，從而造成精子穿透力減弱[8]。

精子頂體酶是一種胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶，以酶原的形式合成并儲存在頂體中與頂體膜相連，當(dāng)發(fā)生頂體反應(yīng)時，就會釋放頂體酶原被激活成有活性的頂體酶并被釋放出來，水解卵透明帶上的糖蛋白，精子劇烈運(yùn)動及楔樣作用，順利穿過卵丘再穿過透明帶，讓精子能夠進(jìn)入到卵子的胞漿內(nèi)完成受精過程。另外，頂體酶還具有增加生殖道激肽釋放、增強(qiáng)精子活性和促進(jìn)精子運(yùn)動的作用。因此可見，頂體酶是受精過程中不可缺少的一種中性蛋白水解酶，其活性的高低很大程度決定了受精過程是否能順利進(jìn)行。其活性程度對生育有著直接的影響[9,10]。有研究表明鋅在高濃度時，會使所有結(jié)合形式的酶失活，而低濃度時則可誘導(dǎo)頂體酶的激活，這種對頂體酶的可逆性調(diào)控作用使精子活動免受男、女生殖道對其潛在的損傷，直到與卵子結(jié)合。近年來有許多研究認(rèn)為精子頂體酶是判斷精子生育能力很有價值的指標(biāo)[11]在活化的蛋白激酶A作用下磷酸化，磷酸化后可激發(fā)頂體外膜的電壓依賴性鈣通道開放，Ca2+釋放至胞質(zhì)；Ca2+使磷脂酶C 活化并水解磷脂酰肌醇二磷酸后激活蛋白激酶C，從而導(dǎo)致質(zhì)膜上電壓依賴性鈣通道開放，大幅升高胞質(zhì)Ca2+濃度，引起精子獲能、質(zhì)膜溶解及頂體反應(yīng)發(fā)生。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)低濃度NO 則具有保護(hù)精子活力的作用，而高濃度NO 則抑制精子活動力，降低頂體反應(yīng)率[12]。已有研究發(fā)現(xiàn)生殖道慢性炎癥可明顯影響精子頂體酶活性、精子總活力、精子活動率及前向運(yùn)動精子百分率、正常形態(tài)率及精子低滲腫脹，但對精液pH、精液量及精子密度等參數(shù)無明顯影響。由于這些患者前列腺液中含有大量激活的炎癥細(xì)胞，促發(fā)炎癥反應(yīng)，一方面可能通過與精子直接接觸方式損傷精子，另一方面可能通過粒細(xì)胞產(chǎn)生可溶性物質(zhì)來升高精漿中的活性氧（ROS）水平而至精子功能受到損害[13]并可引起精子頂體酶受損破裂，導(dǎo)致頂體酶流失或使其活性改變，致頂體反應(yīng)性降低，從而影響精子活動率、精子運(yùn)動參數(shù)和精卵結(jié)合而導(dǎo)致不孕不育。 近年來頂體酶活性的相關(guān)性研究逐漸成為男性不育領(lǐng)域的熱點(diǎn)，這都為廣大致力于男性不育癥診療的科技和臨床工作者提供了廣闊的領(lǐng)域。值得注意的是在精液參數(shù)正常的情況下，精子頂體酶活性的檢測是從另一個角度提供判斷精子生育能力的方式，這是常規(guī)精液檢測無法比擬的。