幾種新型毒品在急性中毒大鼠體內(nèi)死后再分布情況的探索

代 勇， 李華云， 周曉英， 龔 冶， 蔡玉剛

(1.四川警察學(xué)院刑事科學(xué)技術(shù)系， 四川瀘州 646000； 2.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院， 四川瀘州 646000；3.瀘州市公安局， 四川瀘州 646000)

0 引言

新型毒品，常被稱作 “俱樂部藥”、“休閑藥”、“舞會藥”等，主要為人工化學(xué)合成的毒品，所以又被稱作 “實驗室毒品”、“化學(xué)毒品”。我國主要將新型毒品分為4類：第一類是以中樞興奮作用為主，代表物是包括甲基苯丙胺(俗稱“冰毒”)在內(nèi)的大部分苯丙胺類興奮劑；第二類是致幻劑，如麥角乙二胺(LSD)、麥司卡林和氯胺酮(俗稱“K粉”)；第三類是興奮致幻劑，以3，4-亞甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA，俗稱“搖頭丸”)為代表；第四類則以中樞抑制作用為主，包括三唑侖、γ-羥基丁酸等[1-4]。藥物濫用是指反復(fù)、大量地使用具有依賴性特性或依賴性潛力的藥物,屬于非醫(yī)療目的用藥。隨著濫用行為日漸廣泛，聯(lián)合濫用也逐漸普遍，并且針對特定濫用物質(zhì)組合出現(xiàn)特定稱謂，如MDMA和LSD合用稱為“candy flipping”，MDMA和致幻菌素聯(lián)用則稱為“hippy flipping”，MDMA和K粉合用稱為“kippy flipping”[5]。自上世紀(jì)以來，多藥濫用現(xiàn)象十分普遍，已成為主要的藥物濫用模式。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：Agilent-1200 series液相色譜儀，配G6130A質(zhì)譜儀；色譜柱為鍵合EC-C18柱(4.6×100 mm，2.7 μm；Agilent公司)。萃取頭(美國Supelco公司)：85 μm聚丙烯(PA) 、100 μm聚二甲基硅氧烷(PDMS)、60 μm聚二甲基硅烷- 二乙烯基苯共聚物萃取頭(PDMS/DVB)，SPME 進樣器(美國Supelco公司)，CORNING固相微萃取采樣臺(美國Supelco公司)，GPA224S萬分之一分析天平(Sartorius公司)；KH3200E型超聲清洗儀(上海聲源超聲波儀器設(shè)備有限公司)；XH-B型旋渦混合器(江蘇康健醫(yī)療用品有限公司)；JJ-2型組織勻漿機(榮華儀器制造有限公司)；TG-16高速離心機(四川蜀科儀器有限公司)、移液槍(德國Eppendorf公司)。

試劑：鹽酸亞甲基二氧基甲基苯丙胺(MDMA)、鹽酸氯胺酮標(biāo)準(zhǔn)品，鹽酸氯胺酮注射液(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司)，均由瀘州市公安局提供。甲醇、乙腈均為色譜純，乙酸銨等其余試劑均為分析純，水為純化水。

動物：SPF級Wistar大鼠48只，體重250±15.29 g。由成都達碩實驗動物有限公司提供，使用許可證號：SYXK(川)2013-098，飼養(yǎng)于清潔恒溫室中，動物室內(nèi)的溫度為24 ℃，相對濕度為50%～60%，保持12 h光照循環(huán)，自由攝食飲水。

1.2 急性染毒模型的建立

將48只Wistar大鼠隨機分成4組，分別為A組(氯胺酮組)、B組(MDMA組)、C組(聯(lián)合用藥組)、D組(對照組)，每組12只。禁食不禁水12 h。A組按120 mg·kg-1劑量灌胃，B組按120 mg·kg-1劑量灌胃，C組按A和B組劑量灌胃，D組給與同等體積的生理鹽水，同時觀察大鼠的行為表現(xiàn)。2 h后，將4組大鼠頸椎脫臼處死，室溫下仰臥放置，分別于0 h、6 h、12 h、24 h、48 h進行解剖取材(心血、心肌、肝、腎、脾、肺)。

1.3 樣品處理

將大鼠心血或者組織(心肌、肝、腎、腦、肺)剪碎，加入0.5倍生理鹽水，勻漿，準(zhǔn)確量取1 mL大鼠心血或者稱取1 g組織勻漿液放入10 mL樣品瓶中，放入磁攪拌子，擰緊瓶蓋，將樣品瓶置于SPME專用采樣臺上于35 ℃下加熱攪拌，同時將經(jīng)老化過的含60 μm聚二甲基硅烷- 二乙烯基苯共聚物萃取頭(PDMS/DVB)的SPME針管插入樣品瓶中，推出萃取纖維頭，使之浸入樣品液中萃取10 min后取出，再將SPME針管插入SPME/HPLC接口解吸池中解析1 min后，進行數(shù)據(jù)采集。

1.4 儀器分析條件

色譜條件：采用EC-C18柱(4.6×100 mm，2.7 μm)色譜柱，以0.1%(v/v)甲酸(A)-甲醇(B)作為流動相，梯度洗脫：0～6 min，70%A→30%A，6～7 min，30%A→10%A，保持2 min。流速0.2 mL·min-1，進樣量1 μL，柱溫40°。

質(zhì)譜條件：采用電噴霧電離源正離子掃描(ESI+)，SIM模式；干燥氣(N2)流速：10 L/min，干燥器溫度：350°，霧化電壓3 kV，數(shù)據(jù)采集0～7 min。待檢測物的SIM監(jiān)測離子和碰撞能見表1。

表1 SIM監(jiān)測離子和碰撞能

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 染毒后大鼠的反應(yīng)觀察

給藥后，A組與D組相比，大鼠活動異?；钴S，上躥下跳，發(fā)出“唧唧”的尖叫聲，給藥15 min后，A組大鼠有淺快呼吸、四肢震顫現(xiàn)象； B組、C組的大鼠與D組相比，給藥20～30 min后開始出現(xiàn)均全身震顫、頭部晃動明顯、呼吸頻率加快、性情兇猛、難以捕捉的現(xiàn)象。

2.2 死后48 h內(nèi)大鼠各組織中氯胺酮的濃度變化

死后48 h內(nèi)，采集大鼠心血、心肌、肝、腎、脾、肺，經(jīng)檢驗后得到A組和C組大鼠各組織中氯胺酮的濃度，詳細值見表2。以采集時間(h)為橫坐標(biāo)，氯胺酮的濃度(μg·mL-1或μg·g-1)為縱坐標(biāo)，做死后48 h內(nèi)各組織氯胺酮濃度變化曲線圖，結(jié)果見圖1。死后0 h，A組和C組各組織氯胺酮的濃度分布基本一致，依次為：腎、肝、脾、心肌、肺、心血(C組的肝濃度稍高于腎濃度)。隨著死后時間的延長，A組和C組的大鼠各組織均呈現(xiàn)一定的變化，死后48 h和死后0 h心血濃度之比分別為280%和290%，心肌濃度之比分別為77%和103%，肝臟的濃度之比分別為165%和80%，腎臟的濃度之比分別為106%和108%，脾的濃度之比分別為139%和60%，肺的濃度之比分別為146%和199%。

2.3 死后48 h內(nèi)大鼠各組織中MDMA的濃度變化

死后48 h內(nèi)，采集大鼠心血、心肌、肝、腎、脾、肺，經(jīng)檢驗后得到B組和C組大鼠各組織中MDMA的濃度，詳細值見表3。以采集時間(h)為橫坐標(biāo)，MDMA的濃度(μg·mL-1或μg·g-1)為縱坐標(biāo)，做死后48 h內(nèi)各組織MDMA濃度變化曲線圖，結(jié)果見圖2。死后0 h，B組和C組各組織MDMA的濃度分布基本一致，依次為：肝、脾、肺、心血、心肌、腎(C組的腎濃度稍高于心肌濃度)。隨著死后時間的延長，B組和C組的大鼠各組織均呈現(xiàn)一定的變化，死后48 h和死后0 h心血濃度之比分別為495%和462%，心肌濃度之比分別為529%和637%，肝臟的濃度之比分別為454%和372%，腎臟的濃度之比分別為964%和900%，脾的濃度之比分別為351%和388%，肺的濃度之比分別為477%和89%。

表2 死后48 h內(nèi)不同時間點大鼠各組織中氯胺酮的濃度(μg·mL-1或μg·g-1)

圖1 大鼠死后48 h內(nèi)各組織中氯胺酮的濃度變化曲線圖

3 討論

隨著大鼠死后時間的延長，外周血的采集越困難，所以本實驗僅取了心血作為檢測的體液樣本。實驗采用的提取方法為固相微萃取法，該方法使用的萃取頭非常纖細，易折斷，所以各組織的勻漿應(yīng)該盡量均勻，避免萃取頭被破壞。

表3 死后48 h內(nèi)不同時間點大鼠各組織中MDMA的濃度(μg·mL-1或μg·g-1)

圖2 大鼠死后48 h內(nèi)各組織中MDMA的濃度變化曲線圖

氯胺酮的親脂性較好，與血漿蛋白結(jié)合相對較少，進入體循環(huán)后可以迅速分布到血液運輸較為豐富的組織，在2 h可達到峰濃度。在本實驗中，只灌胃氯胺酮的大鼠在死后48 h內(nèi)心血、肺部的氯胺酮濃度呈上升趨勢，腎臟和脾臟呈先上升后下降趨勢，說明在大鼠死后，氯胺酮存在再分布現(xiàn)象。大劑量的氯胺酮給藥時，體內(nèi)代謝情況與正常的代謝有所不同，氯胺酮在體內(nèi)大量蓄積，并未被代謝，當(dāng)大鼠死后，氯胺酮濃度較高的組織如腎臟開始向肝臟等部位進行轉(zhuǎn)移，形成了再次分布。氯胺酮在肝臟中的濃度較高，可能因為65%～85%的氯胺酮是經(jīng)過肝P450酶代謝的，而腎中濃度較高可能與其主要腎臟排泄和腎小管重新收相關(guān)。MDMA是弱堿性藥物，有一定的親脂性，在小腸的吸收最為迅速。MDMA濫用會危及心血管功能，引發(fā)腦部供血損傷，還可能導(dǎo)致凝血功能障礙、肝損傷和腎衰竭。有研究表明，口服75 mg或125 mg MDMA后，血壓和心率顯著升高。服用125 mg的峰濃度達標(biāo)時間遠小于75 mg的峰濃度達標(biāo)時間。本實驗發(fā)現(xiàn)，大劑量灌服MDMA的大鼠在死后48 h內(nèi)，各組織MDMA濃度均呈現(xiàn)不同程度的升高，說明在大鼠死后，氯胺酮存在再分布現(xiàn)象。同時灌胃氯胺酮和MDMA的多藥濫用組大鼠死后48 h內(nèi)，心血的變化趨勢與單灌胃氯胺酮或MDMA組的變化趨勢一致，均呈上升趨勢，但是在心肌、脾和肝的變化趨勢有所不同。