治帶片中4種藥物的薄層鑒別

黃志端，吳敏，魏茂陳

（1.貴陽職業(yè)技術學院，貴州 貴陽 550000；2.貴陽新天藥業(yè)股份有限公司，貴州 貴陽 550000）

0 引言

治帶片的處方含有苦參、蒼術、墓頭回、知母、金櫻子五味藥材，其功效在于止帶、清利濕熱，在臨床中常常用以治療女性白帶、赤帶、黃帶等癥?！吨腥A人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》(中藥成方制劑)第一冊第104頁[標準編號：WS3-B-0102-89]所收載的品種治帶片是其處方來源[1]。在原有的標準項之中，并不存在鑒別項，為對其質(zhì)量作出很好地把控，使其質(zhì)量標準更為嚴格，本試驗最終確定以藥典法[2]，通過薄層色譜來定性鑒別蒼術、金櫻子、知母及苦參。

1 儀器與試藥

本試驗采用了BYCDE薄層自動鋪板器、電子天平（1/10000）BS-210S型兩種實驗儀器。試藥則選用了中國藥品生物制品檢定所提供的金櫻子對照藥材（批號：121047-200302）、菝葜皂苷元對照品（批號：110744-200509）、蒼術（北蒼術）對照藥材（批號：120983-200503）、苦參堿對照品（批號：121019-200705）。貴陽新天藥業(yè)股份有限公司提供的治帶片（批號：20101201、20101202、20101203）。此外還有甲醇、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、環(huán)己烷、正丁醇、正己烷、丙酮、苯、甲苯、石油醚（60-90℃）、冰醋酸、氨水、硫酸、乙醇，均為分析純。香草醛、次硝酸鉍、碘化鉀、對二甲氨基苯甲醛均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 治帶片中金櫻子的薄層鑒別

（1）對照藥材溶液的制備：選取1 g金櫻子對照藥材浸泡于甲醇（25 mL）之中，振搖均勻，在超聲環(huán)境下進行提取，持續(xù)時間為三十分鐘，過濾處理，蒸干濾液，將20 mL的水添至殘渣之中，使其溶解，然后將其進行轉(zhuǎn)移，置于分液漏斗內(nèi)，采用20 mL的石油醚（60-90℃）作萃取處理，重復兩次，再將石油醚液去除，然后采用20 mL的水飽合正丁醇再次實施萃取，重復兩次，對正丁醇液進行合并，而后將氨試液（40 mL）加入其中，振搖后放置，將上層液分離出來作蒸干處理，然后使用1 mL甲醇將殘渣溶解，據(jù)此來獲得對照藥材溶液。

（2）供試品溶液的制備：將藥品的包衣去除，研磨內(nèi)容物，使其粉末細膩，稱量選取4 g，與前文①的處理方式相同，據(jù)此獲得供試品溶液。

（3）陰性對照溶液的制備：此外取陰性樣品（處方不包含金櫻子），與前文②的處理方式相同，據(jù)此來獲得陰性對照溶液。

（4）薄層色譜條件與結(jié)果：在相同的硅膠G薄層板（黏合劑選用的是羧甲基纖維素鈉）中分別點上10μl的供試品（3個批號）、對照藥材、陰性對照溶液，選用比例為（3：5：7）的甲醇-乙酸乙酯-環(huán)己烷溶液作為展開劑，展開后將其晾干，然后將濃度為10%的硫酸乙醇溶液噴灑于薄層板之上，使用105℃的溫度進行加熱，至斑點呈現(xiàn)出清晰的顏色。最終結(jié)果表明，對于供試品色譜而言，對應對照藥材色譜的相同位置，其斑點的顏色一致，且陰性樣品不存在干擾，點間有較理想的分離度，如圖1所示。

圖1 治帶片中金櫻子TLC圖

2.2 治帶片中知母的薄層鑒別

（1）對照品溶液的制備：對照品溶液由菝葜皂苷元對照品加苯配制而成，濃度為0.5 mg/mL。

（2）供試品溶液的制備：選取成品，將其包衣去除，研磨內(nèi)容物，使其粉末細膩，稱量選取1 g，將乙醇（20 mL）添至其中，進行回流提取，持續(xù)四十分鐘，靜置冷卻后吸取10 mL上清液，通過水浴鍋將其蒸干，然后將水（10 mL）添至殘渣之中使其溶解，并轉(zhuǎn)移至錐形瓶內(nèi)，將1 mL鹽酸添至其中進行回流操作，持續(xù)一小時，將其冷卻，直至與室溫相當，再進行過濾，將濾液去除，另于錐形瓶內(nèi)置入濾紙、濾渣，將50 mL二氯甲烷添至其中，振搖使其溶解，再進行過濾處理，然后取濾液將其蒸干處理，最后將二氯甲烷（2 mL）添至其中使其溶解，以此獲得供試品溶液。

（3）陰性對照溶液的制備：此外取陰性樣品（處方不包括知母），研磨使其呈細粉狀，稱取1 g，將乙醇（20 mL）添至其中，進行回流提取，持續(xù)四十分鐘，靜置冷卻后將10 mL上清液吸取，通過水浴鍋將其蒸干，然后將水（10 mL）添加至殘渣之中使其溶解，并轉(zhuǎn)移至錐形瓶內(nèi)，將1 mL鹽酸添至其中進行回流操作，持續(xù)一小時，將其冷卻，直至與室溫相當，再進行過濾，轉(zhuǎn)移濾液到分液漏斗內(nèi)，將20 mL二氯甲烷添至其中，進行振搖萃取，重復萃取兩次，然后將二氯甲烷液合并進行蒸干處理，再將二氯甲烷（2 mL）添至殘渣內(nèi)以溶解殘渣，以此來獲得陰性對照溶液。

（4）薄層色譜條件與結(jié)果：在相同的硅膠G薄層板（黏合劑選用的是羧甲基纖維素鈉）中分別點入10μl的供試品（3個批號）、陰性對照溶液，5μl的對照品溶液，選用比例為（12：4：0.1）的環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸溶液作為展開劑，展開后將其晾干，然后將5%香草醛的10%硫酸乙醇溶液噴灑于薄層板之上，使用105℃的溫度進行加熱，至斑點呈現(xiàn)出清晰的顏色。最終結(jié)果表明，對于供試品色譜而言，對應對照品色譜的相同位置，其斑點的顏色一致，且陰性樣品不存在干擾，點間有較理想的分離度，如圖2所示。

圖2 治帶片中知母TLC圖

2.3 治帶片中苦參的薄層鑒別研究

（1）對照品溶液的制備：對照品溶液由苦參堿對照品加甲醇配制而成，濃度為0.15 mg/mL。

（2）供試品溶液的制備：選取成品，將其包衣去除，研磨內(nèi)容物，使其粉末細膩，稱量選取1 g，于錐形瓶內(nèi)放置，將濃氨溶液1 mL添至其中，靜置，保持五分鐘，再將乙醇（20 mL）添至其中，超聲處理，持續(xù)半小時，然后進行過濾操作，蒸干濾液，將甲醇（2 mL）添至殘渣中使其溶解，以此獲得供試品溶液。

（3）陰性對照溶液的制備：選取陰性樣品（處方不包含苦參），與前文2.3（2）處理方法一致，據(jù)此來獲得陰性對照溶液。

（4）薄層色譜條件與方法：在相同的硅膠G板（黏合劑為2%的氫氧化鈉溶液配制的羧甲基纖維素鈉）中分別點入10μl的供試品（3個批號）、對照品、陰性對照溶液，選用比例為（8：3：0.5）的甲苯-丙酮-甲醇溶液作為展開劑，展開后將其晾干，然后將碘化鉍鉀溶液噴灑于薄層板之上，至斑點呈現(xiàn)出清晰的顯色。最終結(jié)果表明，對于供試品色譜而言，對應對照品色譜的相同位置，其斑點的顏色一致，且陰性不存在干擾，圖3為最終結(jié)果。

圖3 治帶片中苦參TLC圖

2.4 治帶片中蒼術的薄層鑒別研究

（1）對照藥材溶液的制備：稱取0.5 g的北蒼術對照藥材，將正己烷（4 mL）添至其中，超聲處理，持續(xù)十五分鐘，進行過濾處理，揮發(fā)濾液，使其體積為1 mL，據(jù)此獲得對照藥材溶液。

（2）供試品溶液的制備：將成品的包衣去除，研磨內(nèi)容物，使其粉末細膩，稱量選取1g，與前文2.4.1的處理方式相同，據(jù)此獲得供試品溶液。

（3）陰性對照溶液的制備：選取陰性樣品（處方不包含蒼術），與前文2.4（2）處理方法一致，據(jù)此來獲得陰性對照溶液。

（4）薄層色譜條件與結(jié)果：在相同的硅膠G薄層板（黏合劑選用的是羧甲基纖維素鈉）中分別點入5μl的供試品（3個批號）、對照藥材、陰性對照溶液，選用比例為（20：1）的石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯溶液作為展開劑，展開后將其晾干，然后將5%對二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液噴灑于薄層板之上，使用105℃的溫度進行加熱，至斑點呈現(xiàn)出清晰的顯色。最終結(jié)果表明，對于供試品色譜而言，對應對照藥材色譜的相同位置，其斑點的顏色一致，且陰性不存在干擾，點間有較理想的分離度，圖4為最終結(jié)果。

圖4 治帶片中蒼術TLC圖

3 討論

就治帶片的知母鑒別項中，為何對供試品、陰性樣品兩種溶液采用差別性的處理方法展開下列分析：試驗摸索期間，兩種溶液皆沿用了2.2（3）所使用的處理手段，結(jié)果察覺到陰性對照品、供試品色譜中與對照品的相同位置均不存在斑點，所以判斷此法會將樣品內(nèi)所含全部皂苷類成分去除，因此對方法加以變更，采用2.2（2）的處理方案，結(jié)果表明盡管供試品色譜中存在和對照品色譜位置、顏色一致的斑點，但陰性樣品卻存在干擾。在認真查閱文件后得知治帶片僅有知母含有菝契皂苷元[3-9]，所以對陰性樣品使用2.2（2）的處理方法盡管會存在一定干擾，但否定了菝契皂苷元在發(fā)揮作用，因此陰性樣品最終確定2.2（3）這一可能徹底清除皂苷類成分的處理方案，供試品溶液確定2.2（2）的可將菝契皂苷保留的處理方案。