3種食源性細(xì)菌免疫磁珠聯(lián)合ATP發(fā)光檢測(cè)技術(shù)研究

寇曉晶，高 峰，謝 春

（1. 甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅蘭州 730000；2. 鹽城出入境檢驗(yàn)檢疫局，江蘇鹽城 224002；3. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，江蘇南京 210014）

食源性疾病是指病原物質(zhì)通過(guò)食物進(jìn)入機(jī)體引發(fā)的中毒性或感染性疾病，常見(jiàn)的食源性疾病包括食物中毒、腸道傳染病、人獸共患病、寄生蟲(chóng)病等[1]。據(jù)報(bào)道，在發(fā)達(dá)國(guó)家，每年罹患食源性疾病的人口比例高達(dá)30%[2]。在我國(guó)，2011年的食源性疾病監(jiān)測(cè)顯示，全國(guó)平均6.5人中就有1人次罹患食源性疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)，在發(fā)達(dá)國(guó)家，食源性疾病的漏報(bào)率在90%以上，而在發(fā)展中國(guó)家，這個(gè)數(shù)字則要上升到95%以上，所以食源性疾病是當(dāng)前世界上突出的食品安全問(wèn)題之一。98.5%的食源性疾病由微生物污染引起，發(fā)病率居各類(lèi)疾病總發(fā)病率前列，對(duì)人類(lèi)健康、社會(huì)經(jīng)濟(jì)都會(huì)造成極大影響[3]。

沙門(mén)氏菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌和金黃色葡萄球菌是食品中常見(jiàn)的致病菌，在國(guó)內(nèi)外常常引起食源性疾病。如：2011年由單核細(xì)胞增生李斯特菌污染香瓜所引起的美國(guó)多州大型食源性疾病暴發(fā)，造成146種嚴(yán)重侵襲性疾病，30人死亡和1名孕婦流產(chǎn)，是美國(guó)近90年來(lái)致死性最強(qiáng)的一次食源性疾病暴發(fā)[4]；Mihaiu等[5]報(bào)道羅馬尼亞生鮮豬肉和雞肉平均污染率為22.9%；李孝權(quán)等[6]參考《食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)》（GB/T 4789），利用全自動(dòng)熒光酶標(biāo)免疫測(cè)試儀及全自動(dòng)微生物分析儀，對(duì)可疑食品中食源性致病菌進(jìn)行檢測(cè)，在面包樣品中檢出了金黃色葡萄球菌和葡萄球菌腸毒素。近年來(lái)，全球一體化發(fā)展加速，受?chē)?guó)際人口遷徙、貿(mào)易以及食物加工方式改變等因素的影響，食源性致病菌的傳播速度不斷加快，對(duì)人類(lèi)健康造成的威脅逐漸加大，急切需要一種快速檢測(cè)方法。

本研究將免疫磁珠技術(shù)和ATP發(fā)光技術(shù)聯(lián)合用于食品微生物檢測(cè)，選擇沙門(mén)氏菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌病和金黃色葡萄球菌3種最常見(jiàn)的食源性病原菌作為檢測(cè)對(duì)象，建立了快速檢測(cè)這3種食源性病原菌的富集及檢測(cè)新方法。該方法不僅可大大縮短檢測(cè)周期，還可提高檢測(cè)的敏感性和特異性，具有推廣應(yīng)用前景。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)菌株

鼠傷寒沙門(mén)氏菌（ATCC14028）、單核細(xì)胞增生李斯特菌（ATCC19115-1）、金黃色葡萄球菌（ATCC6538-1）：由鹽城檢驗(yàn)檢疫局檢測(cè)中心實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 主要試劑

SS培養(yǎng)基、SC增菌液、LB培養(yǎng)基以及腦心浸液培養(yǎng)基（BHI）：購(gòu)自北京陸橋公司；胰蛋白胨：中國(guó)醫(yī)藥（集團(tuán)）上?；瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn)；酵母粉：浙江省富陽(yáng)市杭富生物制品廠生產(chǎn)；瓊脂粉：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；Bac Titer-Glo發(fā)光檢測(cè)劑 ：Promega公司生產(chǎn)。

1.3 主要儀器和設(shè)備

免疫磁分離機(jī)：浙江大學(xué)生工食品學(xué)院研制；601型攪拌式電極架：海三信儀表廠生產(chǎn)；PHS-3BW微機(jī)型酸度計(jì)：上海理達(dá)儀器廠生產(chǎn)。

經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)，免疫磁分離機(jī)的轉(zhuǎn)速設(shè)置為6 r/min。因?yàn)樵诖宿D(zhuǎn)速下，離心管底部氣泡和殘留液少，因而更能準(zhǔn)確反映試驗(yàn)結(jié)果。

1.4 免疫磁珠清洗

免疫磁珠（IMB）使用前，先取出小瓶裝（2 mL/瓶，5×103個(gè)/mL）IMB，用手上下顛倒搖勻，然后取出0.3～0.9 mL IMB于1.5 mL離心管內(nèi)，加入PBS緩沖液至1.0 mL；接著置于免疫磁分離機(jī)混勻，轉(zhuǎn)速6 r/min，轉(zhuǎn)時(shí)8 min，磁分離2 min；棄去上清液，再加入1.0 mL PBS清洗IMB 1 min；去磁，混勻，轉(zhuǎn)速6 r/min，轉(zhuǎn)時(shí)5 min，磁分離2 min；棄去上清液，重復(fù)1次；最后用PBS懸浮磁珠至0.3～0.9 mL，即回到初始容積量。

1.5 細(xì)菌懸液制備

取出0.5 mL用甘油保存的金黃色葡萄球菌菌種菌液，在生物安全柜中無(wú)菌接種在50 mL LB液體培養(yǎng)基中，37 ℃ 150 r/min振蕩培養(yǎng)8 h。培養(yǎng)完成后，將菌液25 ℃ 3 000 r/min離心5 min；棄去上清液，在沉淀中加PBS緩沖液重新懸浮混勻。取出0.5 mL用甘油保存的單核細(xì)胞增生李斯特菌菌種菌液，在生物安全柜中無(wú)菌接種在50 mL LB液體培養(yǎng)基中，37 ℃ 150 r/min振蕩培養(yǎng)8 h；培養(yǎng)完成后將菌液25 ℃ 3 000 r/min離心5 min；棄去上清液，加PBS緩沖液重新懸浮沉淀，用蝸旋振蕩器混勻。取出0.5 mL甘油保存的沙門(mén)氏菌菌種菌液，在生物安全柜中無(wú)菌接種在50 mL LB液體培養(yǎng)基中，37 ℃ 150 r/min振蕩培養(yǎng)8 h；培養(yǎng)完成后將菌液25 ℃ 3 000 r/min離心5 min；棄去上清液，加PBS緩沖液重新懸浮沉淀，用蝸旋振蕩器混勻。

1.6 不同菌液免疫磁珠密度配比（平板計(jì)數(shù)法）

將免疫磁珠清洗后備用，將上述制備好的3種細(xì)菌懸液分別用PBS按10-1～10-6進(jìn)行10倍梯度稀釋?zhuān)?0-4、10-5、10-63個(gè)稀釋度菌液進(jìn)行平板計(jì)數(shù)，每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行試驗(yàn)，同時(shí)設(shè)立空白對(duì)照。根據(jù)表1的比例在無(wú)菌EP管中加入各試劑。

表1 不同配比的免疫磁珠和細(xì)菌懸液組成 單位：mL

調(diào)節(jié)磁分離機(jī)的參數(shù)為：轉(zhuǎn)速6 r/min，轉(zhuǎn)時(shí)20 min，混勻和磁分離5 min；吸走上清液，分別作好標(biāo)記（waste，簡(jiǎn)稱(chēng)W）；取1 mL PBS沖洗離心管中的菌體-免疫磁珠復(fù)合物，然后再次進(jìn)行磁分離，轉(zhuǎn)速6 r/min，轉(zhuǎn)時(shí)15 min，磁分離2 min；棄去上清液，分別加入0.8 mL（8號(hào)離心管）、0.6 mL（6號(hào)離心管）、0.4 mL（4號(hào)離心管）、0.3 mL（3號(hào)離心管）PBS懸浮菌體-免疫磁珠復(fù)合物（result，簡(jiǎn)稱(chēng)R），去磁即可。

對(duì)于各個(gè)上清液W，10倍比梯度稀釋至10-1～10-5，取10-4和10-52個(gè)密度進(jìn)行平板計(jì)數(shù)，每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行試驗(yàn)。

對(duì)于各個(gè)菌體-免疫磁珠復(fù)合物，10倍比梯度稀釋至10-1～10-5，取10-4和10-52個(gè)梯度進(jìn)行鋪平板。每個(gè)梯度3個(gè)平行。全部培養(yǎng)皿于37 ℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20～24 h后菌落計(jì)數(shù)，接種量100 μL。

將所有接觸過(guò)活菌的試驗(yàn)材料煮沸滅活30 h，將桌面等其它物品用75%酒精擦拭消毒，之后清洗試管等器皿，103 ℃烘箱中干燥30 min。

1.7 免疫磁分離技術(shù)特異性捕獲（平板計(jì)數(shù)法）

將免疫磁珠清洗后備用，將上述制備好的3種細(xì)菌懸液分別用PBS按10-1～10-6進(jìn)行10倍梯度稀釋?zhuān)═est，簡(jiǎn)稱(chēng)T），取10-4、10-5、10-63個(gè)稀釋度菌液進(jìn)行平板計(jì)數(shù)，每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行試驗(yàn)；取出37 ℃ 50 mL LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)16 h的枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis，簡(jiǎn)稱(chēng)BS），用手晃動(dòng)搖勻后，10倍比梯度稀釋至10-1～10-6，取10-3、10-4、10-53個(gè)稀釋度菌液鋪平板，每個(gè)稀釋度做3次平行試驗(yàn)，同時(shí)設(shè)立空白對(duì)照。

按表2中的要求，分別把3種菌液和BS懸菌液加入至滅菌并裝有清洗好IMB的1.5 mL離心管中，6 r/min 20 min，磁分離5 min；倒掉上清液，取1 mL PBS沖洗離心管內(nèi)的菌體-免疫磁珠復(fù)合物，6 r/min離心15 min，磁分離2 min；吸走上清液，加入0.3 mL（3E）、0.2 mL（2E）、0.1 mL（1E）PBS懸浮菌體-免疫磁珠復(fù)合物（Result，簡(jiǎn)稱(chēng)R），去磁即可。

表2 不同配比的菌懸液和BS菌懸液 單位：mL

對(duì)于各個(gè)上清液W，10倍比梯度稀釋至10-1～10-5，取10-4、10-52個(gè)梯度，用顯色培養(yǎng)基進(jìn)行鋪平板，每個(gè)梯度3個(gè)平行。

對(duì)于沙門(mén)氏菌菌體-免疫磁珠復(fù)合物懸浮液（3R、2R、1R），10倍比梯度稀釋至10-1～10-6（107～ 102CFU/mL），取10-4～10-6（104～102CFU/mL）3個(gè)梯度，用SS固體培養(yǎng)基進(jìn)行鋪平板，每個(gè)梯度3個(gè)平行。

對(duì)于單核細(xì)胞增生李斯特菌菌體-免疫磁珠復(fù)合物懸浮液（3R、2R、1R），10倍比梯度稀釋至10-1～10-6（107～102CFU/mL）， 取10-4～10-6（104～ 102CFU/mL）3個(gè)梯度，用BHI固體培養(yǎng)基進(jìn)行鋪平板，每個(gè)梯度3個(gè)平行。

對(duì)于金黃色葡萄球菌菌體-免疫磁珠復(fù)合物懸浮液（3R、2R、1R），10倍比梯度稀釋至10-1～10-6（107～ 102CFU/mL），取10-4～10-6（104～102CFU/mL）3個(gè)梯度，用LB固體培養(yǎng)基進(jìn)行鋪平板，每個(gè)梯度3個(gè)平行。全部培養(yǎng)皿于37 ℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20～24 h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，接種量100 μL。

1.8 ATP生物發(fā)光技術(shù)與免疫磁分離技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用

將調(diào)整好菌落數(shù)的3種細(xì)菌懸液（OD600=0.100，108CFU/mL）稀釋10倍后作為待檢菌液（T）備用；將免疫磁珠清洗，將待檢菌液與免疫磁珠按體積比1:3分別加入10個(gè)EP管中，使管內(nèi)待檢菌液體積為0.3 mL，免疫磁珠IMB 為0.9 mL。該體系中，由于免疫磁珠過(guò)量，此時(shí)可看作捕獲率為100%。分別對(duì)10個(gè)管進(jìn)行磁分離，將獲得的懸浮菌體-免疫磁珠復(fù)合物收集到一個(gè)EP管中，棄上清液，用0.3 mL Tris-HCI緩沖液重懸復(fù)合物，然后加入BacTiter-Glo發(fā)光檢測(cè)劑0.3 mL進(jìn)行磁分離，6 r/min 離心2 min，磁分離1 min；迅速對(duì)該上清液10倍比梯度稀釋至10-1～10-5（107～103CFU/mL），各取每個(gè)稀釋度菌液100 μL檢測(cè)菌液光源計(jì)數(shù)值，每個(gè)菌液重復(fù)檢測(cè)3次，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照（50 μL Tris-HCI緩沖液+50 μL BacTiter-GIo發(fā)光檢測(cè)劑）。

1.9 模擬添加樣品中磁珠吸附率研究

按照 GB/T 4789. 38—2012 中提供的方法，稱(chēng)取 25 g市售嬰兒奶粉，放入盛有 225 mL生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)袋內(nèi)，10 000 r/min 均質(zhì)2 min，制成 1:10 樣品勻液，121 ℃ 高壓滅菌 20 min 備用；將沙門(mén)氏菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌、金黃色葡萄球菌株過(guò)夜培養(yǎng)，用1:10 樣品勻液，分別調(diào)整菌液菌落數(shù)至終菌落數(shù)為107～102CFU/mL，再用勻漿機(jī)徹底混勻，制備成107～102CFU/mL的上述3種食源性致病菌人工污染模擬樣品。

1.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用方差分析的新復(fù)極差法（Duncan法），對(duì)各試驗(yàn)組數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同菌液-免疫磁珠密度配比

所有平板37 ℃培養(yǎng)24 h。合適的梯度計(jì)算公式為：（同一梯度下3個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)之和/3）×10×該計(jì)數(shù)培養(yǎng)皿的稀釋倍數(shù)（CFU/mL）

根據(jù)公式計(jì)算的免疫磁分離前后不同菌液、免疫磁珠配比下的菌落密度見(jiàn)表3。而IMB濃度為5.0×108個(gè)/mL，根據(jù)公式，捕獲率= 磁分離后的菌落數(shù)/磁分離前的菌落數(shù)×100%。 計(jì)算出不同菌液、免疫磁珠配比下的捕獲率見(jiàn)表4。

根據(jù)表4中的捕獲率結(jié)果，繪制圖1。由圖1可以看出，沙門(mén)氏菌和單核細(xì)胞增生李斯特菌待檢菌體濃度與IMB濃度之間體積比下降，則免疫磁珠的捕獲率越高，即待檢菌液中的細(xì)菌個(gè)體分配到的IMB越多，捕獲率越高。當(dāng)一個(gè)菌株能分配到38個(gè)免疫磁珠時(shí)，其捕獲率分別可達(dá)到98.75%、99.49%和98.57%，近似全部的菌體能被IMB捕獲到。金黃色葡萄菌菌液具有同樣的趨勢(shì)，但捕獲率最高的條件為一個(gè)菌株分配到25個(gè)免疫磁珠。

表3 免疫磁分離前后不同菌液、免疫磁珠配比下的菌落數(shù)

表4 不同菌液、免疫磁珠配比下的捕獲率

圖1 不同菌體、免疫磁珠配比下的捕獲率比較

2.2 免疫磁分離技術(shù)特異性捕獲

所有的平板在37 ℃培養(yǎng)24 h后，經(jīng)2.1所述公式計(jì)算得到沙門(mén)氏菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌、金黃色葡萄球菌和枯草煙包桿菌的菌落數(shù)分別為0.93×108、1.2×108、1.25×108和1.55×106CFU/mL（表5）。3個(gè)離心管中，磁分離后各菌的捕獲率見(jiàn)表6。

根據(jù)表6和圖2的結(jié)果可以看出在控制總體積、IMB加入量以及待檢菌和BS菌密度不變的情況下，當(dāng)細(xì)菌體積減小，BS菌體積增加，其捕獲率先下降后上升，出現(xiàn)下降可能是因?yàn)槊庖叽胖榈奶禺愋允艿搅丝莶菅挎邨U菌的影響，因此對(duì)靶標(biāo)菌的富集效率降低，當(dāng)待檢菌體積繼續(xù)下降，使得免疫磁珠的與待檢菌的比例大大過(guò)量，這可能是捕獲率上升的原因。

2.3 ATP生物發(fā)光法與免疫磁分離技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用

免疫磁分離后．各個(gè)稀釋梯度下菌液的光源計(jì)數(shù)值（減去空白后）所得結(jié)果，繪制成相關(guān)性曲線見(jiàn)圖3。由圖3可知，沙門(mén)氏菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌以及金黃色葡萄球菌的ATP生物發(fā)光技術(shù)與免疫磁珠聯(lián)合應(yīng)用的檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)的平板計(jì)數(shù)法具有良好的線性關(guān)系，3個(gè)待檢菌的相關(guān)系數(shù)分別為R2=0.976 2，P＜0.000 1； R2=0.986 6，P＜0.000 1；R2=0.991 1，P＜0.000 1。從結(jié)果來(lái)看，當(dāng)菌液菌落數(shù)較高時(shí)（105～108CFU/mL）兩種檢測(cè)方法的結(jié)果幾乎一致；當(dāng)菌液菌落數(shù)較低時(shí)（103～ 105CFU/mL）兩種方法存在一定差異，但是從總體來(lái)看，相關(guān)性良好。

從圖3中可以看出，初始菌落數(shù)為107CFU/mL的待測(cè)菌液，經(jīng)免疫磁分離技術(shù)濃縮后，待檢菌液密度上升為108CFU/mL；ATP生物發(fā)光技術(shù)的最低檢測(cè)限為103CFU/mL，因此當(dāng)ATP生物發(fā)光技術(shù)與免疫磁珠分離技術(shù)結(jié)合后，可大大降低檢測(cè)極限，使得最低檢測(cè)限下降至102CFU/mL，因此ATP生物發(fā)光技術(shù)與免疫磁珠分離技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用檢測(cè)效率更高。

表5 各個(gè)離心管中的菌落數(shù) 單位：CFU/mL

表6 不同待測(cè)細(xì)菌和枯草芽孢桿菌配比下的捕獲率

圖2 不同的菌液配比的捕獲率比較

圖3 各菌落數(shù)下待捕獲細(xì)菌的光源計(jì)數(shù)值與各菌落數(shù)之間的關(guān)系

2.4 模擬樣本中3種細(xì)菌檢測(cè)

模擬樣本中的待捕獲細(xì)菌的ATP發(fā)光檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表7。表7數(shù)據(jù)顯示，3種細(xì)菌由于使用了免疫磁珠的捕獲，菌落數(shù)被濃縮了近1個(gè)梯度，原來(lái)為107～102CFU/mL的模擬樣本，ATP發(fā)光檢測(cè)分別接近108～103CFU/mL（表7）。

3 討論

在食源性疾病中因微生物引起的比例最高。陳夏威等[7]用描述流行病學(xué)方法，對(duì)珠三角某市2001—2015年食源性疾病暴發(fā)事件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)：共報(bào)告食源性疾病暴發(fā)事件181起，發(fā)病4 493例，主要場(chǎng)所為集體食堂（占59.1%，107/181）和餐飲單位（占29.8%，54/181）；由微生物引起的事件和涉及人數(shù)最多，事件數(shù)和發(fā)病數(shù)分別占總數(shù)的55.8%（101/181）和60.0%（2 696/4 493）。吳雨晨等[8]通過(guò)調(diào)查江蘇省2016年食源性疾病，分析發(fā)現(xiàn) 2016年江蘇省共發(fā)生食源性疾病暴發(fā)事件143起，由食源性致病菌引發(fā)的占63.64%。所以，加強(qiáng)食源性疾病監(jiān)測(cè)、預(yù)警和系統(tǒng)建設(shè)，提升食源性疾病暴發(fā)事件現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查處置能力具有重要意義。

目前國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)雖然也有多款微生物快速檢測(cè)儀可供選擇，但是這些快速檢測(cè)儀多為國(guó)外進(jìn)口產(chǎn)品，價(jià)格昂貴，如果再配上儀器所需要的配件、試劑、耗材及常規(guī)維護(hù)檢修會(huì)大大增加檢測(cè)成本。因此，建立一種快速檢測(cè)食品微生物技術(shù)是我國(guó)食品安全領(lǐng)域科研工作者急需解決的問(wèn)題。

ATP 生物發(fā)光法的優(yōu)點(diǎn)是快速、簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好，但是該技術(shù)對(duì)于細(xì)菌樣品的最低檢測(cè)限為1 000個(gè)/mL，因此該技術(shù)的靈敏度可能會(huì)達(dá)不到衛(wèi)生學(xué)要求[9]。為了提高微生物檢測(cè)的靈敏度，將免疫磁珠分離法與ATP 生物發(fā)光技術(shù)聯(lián)合使用，通過(guò)免疫磁珠分離技術(shù)對(duì)待檢樣品進(jìn)行一定程度的濃縮，再通過(guò)ATP 生物發(fā)光技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，這樣就大大提高了ATP 生物發(fā)光技術(shù)的靈敏度。同時(shí)免疫磁珠分離技術(shù)可以特異性結(jié)合待檢樣品，從而彌補(bǔ)了ATP生物發(fā)光技術(shù)無(wú)法區(qū)分不同微生物的缺陷。因此，兩種技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用在微生物檢測(cè)、細(xì)胞分離、免疫吸附等方面的應(yīng)用越來(lái)越廣泛[10]。該技術(shù)在醫(yī)學(xué)衛(wèi)生領(lǐng)域已發(fā)揮了很大作用，主要用于分離純化和檢測(cè)微生物[11]，比如環(huán)境水及飲用水中微生物檢測(cè)，食品樣品中微生物檢測(cè)[12]，生物樣品中細(xì)菌檢測(cè)，人體內(nèi)T、B淋巴細(xì)胞及多種腫瘤細(xì)胞檢測(cè)[13]。本研究通過(guò)免疫磁珠的富集，使樣品微生物濃度增加了10倍，原本為107～102CFU/mL的模擬樣本，ATP發(fā)光檢測(cè)后分別接近108～103CFU/mL，大大提高了樣本檢出率。這一結(jié)果與Yuxiao等[14]所做出的結(jié)果類(lèi)似，進(jìn)一步說(shuō)明本研究發(fā)明的免疫磁珠富集后聯(lián)合ATP發(fā)光技術(shù)檢測(cè)食品中的沙門(mén)氏菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌以及金黃色葡萄球菌的方法可行，并且具有快速、高敏感、高特異性以及價(jià)格低廉的特點(diǎn)。

表7 模擬樣本中3種食源性致病菌免疫磁珠吸附后的ATP生物發(fā)光檢測(cè) 單位：CFU/mL

4 小結(jié)

本研究比較了不同的菌體-免疫磁珠濃度配比下，免疫磁分離技術(shù)的捕獲率，發(fā)現(xiàn)當(dāng)菌體-IMB濃度配比為1:30時(shí)，沙門(mén)氏菌和單核細(xì)胞增生李斯特菌捕獲率可達(dá)近100%，所有細(xì)菌可被免疫磁珠捕獲。當(dāng)菌體-IMB濃度配比為1:25時(shí)，金黃色葡萄球菌捕獲率可達(dá)近100%，所有菌可被免疫磁珠捕獲。在總體積0.4 mL不變、IMB加入量不變的情況下，比較了3種待測(cè)細(xì)菌和枯草芽孢桿菌不同體積比下的捕獲率，均出現(xiàn)捕獲率先下降后上升情況。免疫磁分離技術(shù)與ATP生物發(fā)光法聯(lián)用技術(shù)與傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)方法有良好的線性相關(guān)性，檢測(cè)限可低達(dá)102CFU/mL。模擬樣本中的待捕獲細(xì)菌ATP發(fā)光檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，3種細(xì)菌由于使用了免疫磁珠捕獲，濃度被濃縮了近10倍。