益腎化痰法對乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者血液PTHrP、FGF-β、BSP水平的影響及作用機制分析

王俊濤，尹怡，李曉婷，馬征，馬金玉，郅中怡，楊明明，楊冠森，王祥麒

(河南中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院 腫瘤科一病區(qū)，河南 鄭州 450000)

乳腺癌成為威脅女性生命健康的惡性腫瘤之一，乳腺癌細胞喪失正常細胞的特征，細胞間的連接較為松散，極易脫落而借助淋巴液或血液轉(zhuǎn)移，形成轉(zhuǎn)移灶，對患者生命威脅較大[1]。骨轉(zhuǎn)移為乳腺癌常見的轉(zhuǎn)移類型，中醫(yī)認為乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的發(fā)生與患者患病日久，正氣不足，腎經(jīng)耗損，骨髓空虛，邪毒借此侵入骨體而發(fā)病，故臨床治療應以補腎益氣散結(jié)為主。益腎化痰法以補助正氣，充養(yǎng)腎精，散結(jié)，化痰，消瘀為主要功效，與乳腺癌骨轉(zhuǎn)移之病因病機相對應[2]。筆者在我院乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者中應用益腎化痰方，發(fā)現(xiàn)該方法應用后患者的血液PTHrP、FGF-β、BSP水平得到改善，現(xiàn)將本次研究報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

以河南中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院收治的乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者90例為研究對象，年齡范圍(36～65)歲，平均年齡(48.31±10.14)歲。診斷標準：依照中國抗癌協(xié)會乳腺癌專業(yè)委員會制定的[3]《中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范(2017年版)》中乳腺癌的診斷標準為標準，行X平片、CT、MRI、PET或骨穿刺活檢等手段診斷骨轉(zhuǎn)移。納入標準：患者符合乳腺癌骨轉(zhuǎn)移診斷標準；患者未使用研究治療方案外藥物；患者無過敏與嚴重不良反應；患者不存在心功能衰竭、腎功能衰竭、肝功能不全等情況。剔除標準：患者隨意使用藥物；患者出現(xiàn)嚴重過敏與不良反應被迫終止干預。

1.2 分組與干預方法

1.2.1 分組方法

將2014年12月—2017年12月收治的乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者90例為研究對象，采取數(shù)字表隨機分組法分為觀察組與對照組各45例，對照組實施常規(guī)乳腺癌骨轉(zhuǎn)移治療方法，觀察組以對照組為基礎(chǔ)使用益腎化痰方。其中觀察組年齡范圍(36～64)歲，平均年齡(50.07±11.01)歲;疾病分期：III期18例，IV期25例;手術(shù)類型：全乳房切除術(shù)34例,保乳手術(shù)11例。觀察組年齡范圍(36～64)歲，平均年齡(50.13±10.99)歲;疾病分期：III期19例，IV期24例;手術(shù)類型：全乳房切除術(shù)33例，保乳手術(shù)12例。兩組一般資料無明顯差異，P>0.05，具有對比價值。

1.2.2 治療方法

兩組均在影像學檢查結(jié)果引導下行乳腺癌手術(shù)，對照組采取常規(guī)乳腺癌術(shù)后治療方法：放射性療法、化學療法、內(nèi)分泌療法、生物靶向治療聯(lián)合或單獨療法，骨轉(zhuǎn)移使用唑來膦酸、雙膦酸鹽等骨轉(zhuǎn)移對抗藥物，癌痛嚴重者依據(jù)情況選擇輔佐劑、非麻醉性止痛藥與麻醉性止痛藥[4]。放化療期間出現(xiàn)胃腸道不良反應者使用奧美拉唑、碳酸氫鈉、六君子湯等胃動力與胃黏膜保護類藥物。

觀察組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上使用益腎化痰法，自擬益腎化痰方進行治療：益腎化痰方：熟地黃30 g,杜仲15 g,懷牛膝15 g,桑寄生9 g,白芍15 g,山慈菇12 g,白芥子15 g,生牡蠣30 g,浙貝母15 g,皂角刺12 g,片姜黃15 g,蘇木12 g。將生藥用5倍體積量水浸泡2 h,煮沸30 min,過濾分離藥液及藥渣,藥渣再加入3倍體積量水煎煮20 min,過濾后留藥液，合并兩次藥液共500 mL左右。250 mL/次，2次/d，于早上9點與晚上9點按時服用。

兩組均以2周為1療程，干預4療程后進行治療效果評估。

1.3 評價指標

1.3.1 甲狀旁腺相關(guān)肽(PTHrP)表達檢測

采用常規(guī)ABC法進行PTHrP的免疫組織化學染色[5]。PTHrP的陽性細胞染色為棕黃或棕褐色,定位于胞質(zhì),連續(xù)計數(shù)>10個高倍視野,每個高倍視野計數(shù)100個腺上皮細胞,計算陽性細胞的平均百分率，陽性細胞數(shù)<25%為陰性,25%～80%為弱陽性(+),>80%為強陽性(++)。

1.3.2 纖維細胞生長因子(FGF-β)檢測

FGF-β染色[6]陽性者在細胞漿有棕黃色顆粒沉著, 部分細胞同時存在核染色。為精確判斷蛋白的表達程度及減少假陽性率, 制定免疫組化半定量標準: 每張切片隨機觀察10個高倍視野,每個視野計數(shù)100個癌細胞,根據(jù)細胞漿的著色程度及著色細胞的百分率進行評分并計算陽性系數(shù):基本不著色者為0分,著色淡者為1分,著色適中者為2分,著色深者為3分。著色細胞占計數(shù)細胞百分率≤5%為0分,6%～25%為1分,26%～50%為2分,≥51%為3分。將每張切片著色程度得分與著色細胞百分率得分各自相乘,即為陽性系數(shù)。陽性系數(shù)0、1分為陰性(-),2、3分為弱陽性(+),4～6分為陽性(++)，7～9分為強陽性(+++)。

1.3.3 骨唾液酸蛋白(BSP)檢測

參照文獻[7],采用免疫組織化學染色對組織標本處理: 固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片。在光學顯微鏡下觀察，根據(jù)棕色反應的陽性強度及陽性細胞數(shù)判斷結(jié)果。BSP每張切片觀察5個高倍視野，陽性細胞染色為胞漿棕黃或棕褐色，計算陽性細胞比例。陽性細胞比例=陽性細胞個數(shù)/總細胞個數(shù)×100.00%。

1.3.4 不良反應

觀察兩組惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、皮疹、感染、放射性皮炎等不良反應發(fā)生情況，記錄例數(shù)，計算發(fā)生率。

1.4 統(tǒng)計學方法

使用SPSS19.0版本統(tǒng)計學軟件進行研究數(shù)據(jù)分析，以t值檢驗各組計量資料，χ2檢驗計數(shù)資料以，a=0.05為檢驗水準，P<0.05認為差異具有統(tǒng)計學方面意義。

2 結(jié)果

2.1 干預前后兩組患者PTHrP細胞陽性率對比

結(jié)果顯示，干預前兩組的PTHrP細胞陽性率無明顯差異，P>0.05，干預后兩組患者陽性率均降低，但觀察組陽性率(69.42±3.12)%低于對照組(77.53±4.01)%，兩組相比P<0.05，詳見表1。

表1 干預前后兩組患者PTHrP細胞陽性率對比(%)

2.2 干預前后兩組患者FGF-β細胞陽性指數(shù)對比

結(jié)果顯示，干預前兩組患者的FGF-β細胞陽性指數(shù)無明顯差異，P>0.05，干預后兩組的細胞陽性指數(shù)均下降，但觀察組的陽性指數(shù)(5.02±0.94)分低于對照組(6.80±0.82)分，兩組相比P<0.05，詳見表2。

表2 干預前后兩組患者FGF-β細胞陽性指數(shù)對比(分)

2.3 兩組干預前后BSP細胞陽性率對比

結(jié)果顯示，干預前兩組的BSP細胞陽性率無明顯差異，P>0.05，干預后兩組患者陽性率均降低，但觀察組陽性率(61.31±6.45)%低于對照組(70.40±6.10)%，兩組相比P<0.05，詳見表3。

表3 兩組干預前后BSP細胞陽性率對比(%)

2.4 兩組不良反應情況對比

結(jié)果顯示，觀察組患者的治療不良反應發(fā)生率低于對照組(28.98% VS 53.33%)，兩組相比P<0.05，詳見表4。

表4 兩組不良反應情況對比

3 討論

乳腺癌骨轉(zhuǎn)移為常見乳腺癌轉(zhuǎn)移類型，當骨轉(zhuǎn)移發(fā)生時患者須承受巨大疼痛，臨床一般使用唑來膦酸、骨硬化蛋白抗體等骨轉(zhuǎn)移對抗藥物聯(lián)合常規(guī)乳腺癌療法方式治療[8-10]，近些年有學者提出中藥在骨轉(zhuǎn)移中的治療價值，方穎等在其研究[11]中提出補腎活血湯聯(lián)合唑來膦酸可促進乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者骨質(zhì)恢復并降低骨性疼痛。筆者在我院乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者常規(guī)治療基礎(chǔ)上使用益腎化痰方，效果滿意。

中醫(yī)理論中認為腎主骨生髓，當骨骼出現(xiàn)改變時多為患者腎臟功能異常，而乳腺癌患者發(fā)病日久損耗正氣，進而腎臟功能受到影響，腎氣不足則骨髓空虛，為骨轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件。而益腎化痰方以熟地黃與杜仲為君藥，起到滋陰補血、填精益髓、補肝腎強筋骨的功效，桑寄生、懷牛膝與白芍為臣藥輔助君藥發(fā)揮強肝腎止痛之功，山慈菇、白芥子散結(jié)化痰，生牡蠣軟堅聯(lián)合浙貝母、皂角刺兩味佐藥共奏化痰消積之功，片姜黃活血止痛，蘇木引經(jīng)為使藥。各藥合用可奏補益腎精、充盈骨髓、驅(qū)邪外出之效。西醫(yī)認為骨轉(zhuǎn)移與血液PTHrP、FGF-β、BSP水平密切相關(guān)，方藥中熟地黃可促進成骨細胞增殖與分化；杜仲總黃酮可優(yōu)化骨細胞增殖能力，優(yōu)化細胞抗氧化能力；懷牛膝甾體與皂苷成分可優(yōu)化血清堿性磷酸酶、血清骨鈣素及Ca2+水平,降低血清P水平，優(yōu)化血液黏度并對抗炎癥反應；白芍總苷可起到鎮(zhèn)痛作用；浙貝母中有效成分如貝母甲素、貝母乙素、貝母辛具有逆轉(zhuǎn)錄腫瘤細胞作用；皂角刺提取物可改善人體IL-2、IL-6、IL-12、TNF-α的表達水平，強化機體免疫力。

結(jié)果顯示，干預前兩組的PTHrP細胞陽性率無明顯差異，P>0.05，干預后兩組患者陽性率均降低，但觀察組陽性率(69.42±3.12)%低于對照組(77.53±4.01)%，兩組相比P<0.05；干預前兩組患者的FGF-β細胞陽性指數(shù)無明顯差異，P>0.05，干預后兩組的細胞陽性指數(shù)均下降，但觀察組的陽性指數(shù)(5.02±0.94)分低于對照組(6.80±0.82)分，兩組相比P<0.05；干預前兩組的BSP細胞陽性率無明顯差異，P>0.05，干預后兩組患者陽性率均降低，但觀察組陽性率(61.31±6.45)%低于對照組(70.40±6.10)%，兩組相比P<0.05；觀察組患者的治療不良反應發(fā)生率低于對照組(28.98% VS 53.33%)，兩組相比P<0.05。

綜上所述，乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用益腎化痰方能夠有效改善患者的血液PTHrP、FGF-β、BSP水平，對抗骨轉(zhuǎn)移癥狀，并降低不良反應發(fā)生率，其機制與益腎化痰方改善腎虛骨髓空虛及藥物有效成份可抑制骨破壞增加骨形成、對抗腫瘤細胞增殖并改善免疫功能有關(guān)。