長(zhǎng)沙縣地區(qū)地中海貧血篩查與基因診斷結(jié)果分析

楊牡丹 賀丹

410100長(zhǎng)沙縣婦幼保健醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙

地中海貧血(TM)是一種較為嚴(yán)重的遺傳病，主要是由于珠蛋白基因的缺失或點(diǎn)突變，抑制蛋白鏈的合成所致。雖然輕型TM 不會(huì)影響正常發(fā)育和日常生活，但會(huì)引起遺傳性危害，而中間型及重型TM不僅會(huì)給家庭帶來重大的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)，也會(huì)明顯影響患兒生長(zhǎng)發(fā)育。產(chǎn)前診斷是阻止重癥患兒的有效手段[1]，產(chǎn)前篩查及基因診斷是目前控制TM的有效措施。而開展產(chǎn)前診斷是了解和掌握管轄范圍內(nèi)出現(xiàn)TM的概率和相應(yīng)的基因類型。對(duì)2016年12月-2018年11月在我院進(jìn)行產(chǎn)前篩查及基因診斷的資料進(jìn)行回顧性分析，旨在掌握我縣TM發(fā)病情況。

資料與方法

2016年12-2018年11月在我院進(jìn)行地中海貧血篩查及基因診斷標(biāo)本18 500例，年齡20～38歲，平均32歲。

方法：①篩查：嚴(yán)格按照采血規(guī)范，抽取2 mL EDTA K2血常規(guī)管，采用全自動(dòng)高壓液相毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行檢測(cè)，相關(guān)指標(biāo)作為地中海貧血的初步篩查依據(jù)。②基因檢測(cè)：對(duì)于初步檢測(cè)為陽性的孕婦，收集夫婦血樣或孕婦孕期在B 超引導(dǎo)下抽取羊水或臍血，7 d 內(nèi)送至上級(jí)醫(yī)院或華大基因研究公司地貧基因診斷。高通量測(cè)序(NGS)采用Magen 核酸提取試劑盒進(jìn)行DNA 提取，利用質(zhì)量值和深度對(duì)SNP和InDel進(jìn)行過濾得到變異結(jié)果。

基因檢測(cè)指標(biāo)：①α-地中海貧血基因采用缺口PCR，即gap-PCR 方法診斷，主要檢測(cè)SEA、3.7 和4.2 三種缺失型突變。②β-地中海貧血基因采用PCR結(jié)合反向點(diǎn)雜交作為診斷依據(jù)，主要檢測(cè)常見17種點(diǎn)突變。

結(jié) 果

初步篩查陽性率：18 500 例孕婦共檢出地中海貧血表型陽性1 427例，陽性率為7.71%。

基因診斷：對(duì)地中海貧血表型陽性進(jìn)一步經(jīng)基因篩查，陽性517 例，攜帶率為2.79%，其中α型251 例(48.55%)?；蝾愋停孩?-SEA/α α 94 例(37.45%，標(biāo)注型)；②--SEA/-α3.7 10例(3.98%，中型)；③--SEA/-α4.2 58 例(23.11%，標(biāo)注型)；④αα/-α3.7 51 例(20.32%，靜止型)；⑤αα/-α4.2 38 例(15.14% ，靜止型)。β型 266 例(51.45%)，基因類型：①CD41-42 109 例(40.98%)；②IVS-Int654 95 例(35.71%)；③CD17 40 例(15.04%)；④CD43 22 例(8.27%)。

討 論

我國(guó)地中海貧血發(fā)病集中在長(zhǎng)江以南，以廣東、廣西、貴州、四川、湖北、湖南等省為高發(fā)地帶[2]。本病以α地中海貧血及β地中海貧血最為常見。輕型地中海貧血臨床癥狀不明顯，容易漏診、誤診，而重型患者貧血嚴(yán)重，往往需輸血維持生命，患兒生命脆弱。由于危害重大，對(duì)其研究從未止步。了解發(fā)病機(jī)制才能從本質(zhì)上加以認(rèn)知，從而制定有效預(yù)控措施。①珠蛋白基因缺失和突變：珠蛋白基因分為α珠蛋白基因簇及β珠蛋白基因簇，其在紅系發(fā)育過程中具有較高的紅系組織特異性和發(fā)育階段特異性，若此兩類基因發(fā)生缺失或突變，便會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)貧血疾病的發(fā)生?？v觀國(guó)內(nèi)外近年來的研究，對(duì)地中海貧血發(fā)生的機(jī)制主要集中在珠蛋白基因上，并發(fā)現(xiàn)α地中海貧血基因突變類型有約46種點(diǎn)突變和35種缺失突變，而β地中海貧血基因有約186 種突變類型，主要是點(diǎn)突變[3-4]。②表觀遺傳：表觀遺傳可提供時(shí)間、地址、方式三種信息的遺傳指令，其遺傳可不改變DNA 序列下進(jìn)行。國(guó)內(nèi)外諸多研究表明，多種遺傳性疾病與表觀遺傳有關(guān)。③DNA 甲基化：研究發(fā)現(xiàn)，DNA 甲基化也是導(dǎo)致基因失活的主要機(jī)制。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，DNA 甲基化修飾與類珠蛋白基因表達(dá)調(diào)控有關(guān)[5]。

本研究中，18 500 例孕婦中共檢出地中海貧血表型陽性1 427例，陽性率為7.71%，再次經(jīng)基因診斷地貧攜帶517例，攜帶率為2.79%，低于文獻(xiàn)報(bào)道的廣東(8.3%)、廣西(15.2%)[6-7]，說明地中海貧血存在地域差異。雖然本研究攜帶率低于鄰近省，但對(duì)于一個(gè)人口大省的湖南來說，攜帶總數(shù)仍是個(gè)大數(shù)目，不可小覷，產(chǎn)前診斷及干預(yù)措施仍不可懈怠。本研究中α地貧及β地貧所占比例無明顯差異，說明我地區(qū)地貧類型未出現(xiàn)明顯改變，今后預(yù)防措施依舊以這兩類為主。α地中海貧血中標(biāo)準(zhǔn)型最為常見(60.56%)，以--SEA/αα為主。中型10 例(3.98%)，未出現(xiàn)嚴(yán)重型，說明我地區(qū)地貧尚可控，這與切實(shí)有效的產(chǎn)前篩查工作密不可分。266例β型中常見基因類型為CD41-42，與以往報(bào)道一致[8]。

地中海貧血為常染色體單基因隱性遺傳病，與性別無關(guān)。通過我院多年統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析，父母為攜帶者，子代地貧攜帶陽性率大于理論值，若父母均為攜帶者，且容易出現(xiàn)中型。復(fù)合型地貧(曾出現(xiàn)一孕婦連續(xù)兩次懷孕均為中型α地貧胎兒)，考慮缺陷基因具有遺傳規(guī)律和遺傳傾向，更容易遺傳給子代。特別是兩個(gè)β地貧攜帶者婚配，可能會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重型β地貧患兒，此類患兒只能通過輸血維持生命，且容易出現(xiàn)相關(guān)并發(fā)癥，一般壽命不長(zhǎng)。因此，通過血液學(xué)表型篩查和產(chǎn)前基因診斷，可避免中型和重型地貧患兒的出生，提高出生人口素質(zhì)。