miR-133a與MMP-9在急性心肌梗死患者中的表達(dá)及其相關(guān)性探討

譚永錦，譚錦業(yè)，甄錦煥，黃紀(jì)文

（開平市中心醫(yī)院心內(nèi)科，廣東開平 529300）

急性心肌梗死是目前常見的心血管疾病，心肌梗死后心室重構(gòu)（ventricular remodeling）被認(rèn)為是其發(fā)展為慢性心功能不全的主要病理機(jī)制之一。目前有研究發(fā)現(xiàn)基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase,MMP-9）表達(dá)水平的變化可能與心肌梗死后心室重構(gòu)存在一定相關(guān)性，但其調(diào)節(jié)機(jī)制目前尚未明確。microRNA（miR）-133a是人類心臟中最廣泛表達(dá)的miR，能對靶基因mRNA特定序列互補(bǔ)結(jié)合抑制靶基因轉(zhuǎn)錄后的翻譯和修飾，進(jìn)而影響細(xì)胞增殖和分化。同時在腫瘤領(lǐng)域的研究中miR-133a可能對MMP-9的表達(dá)有一定影響，但在心血管研究領(lǐng)域未見相關(guān)報(bào)道。因此進(jìn)一步研究miR-133a與MMP-9在心?；颊咧械谋磉_(dá)及相關(guān)性，將有助于進(jìn)一步闡明心肌梗死后心室重構(gòu)的機(jī)制及尋求新的治療靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月-7月新發(fā)的急性ST段抬高型心肌梗死患者35例，其中男20例，女15例，發(fā)病時間在12 h內(nèi)入組，年齡42歲-80歲，平均年齡為（65±2）歲，其中10例行溶栓治療，25例行急診PCI治療；另外納入10例健康志愿者為對照組。兩組患者年齡、性別、高血壓等無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），具有可比性。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器和材料 RNA提取試劑盒TRI Reagent BD和基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）試劑盒（BD Biosciences公司），RT反轉(zhuǎn)錄試劑盒、熒光定量PCR試劑盒（日本Takara公司）；7500 Fast Real-time PCR儀（美國ABI公司）；羅氏C8000全自動生化分析儀（包括羅氏電化學(xué)發(fā)光試劑盒和比色試劑盒）。

1.3 觀察指標(biāo) 所有患者均在入院后0 h、3 h、6 h、12 h抽取靜脈血5 mL，進(jìn)行如下檢測。

1.3.1 熒光RT-PCR測定血漿miRNA-133a及MMP-9 mRNA的表達(dá) 取全血樣本，4oC下3,000g離心10 min，取血漿于1.5 mL EP管中12,000g離心10 min，取上清，用TRI Reagent BD試劑盒提取總RNA，再采用RT反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄成cDNA，操作均嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。用熒光定量Real-Time PCR法檢測血漿miRNA-133a、MMP-9 mRNA的表達(dá)量，相對表達(dá)量用2-△△Ct法進(jìn)行計(jì)算。

1.3.2 ELISA檢測MMP-9的活性 取全血樣本，4oC下3,000g離心10 min，取血漿于1.5 mL EP管中12,000g離心10 min，取上清液用于檢測，采用MMP-9 ELISA試劑盒檢測患者血漿MMP-9水平，操作均嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，采用卡方檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者miRNA-133a表達(dá)水平的比較 所有心肌梗死患者入院第一份靜脈血miRNA-133a表達(dá)水平最高，隨著時間的推移逐漸下降，12 h內(nèi)其平均水平仍高于對照組，且有顯著差異（P＜0.001）；見表1。

表1 miRNA-133a 表達(dá)水平（Mean±SD）

表2 MMP-9 mRNA表達(dá)水平（Mean±SD）

表3 兩組MMP-9濃度比較（Mean±SD）

2.2 兩組患者M(jìn)MP-9 mRNA表達(dá)水平比較 所有患者心肌梗死患者入院后MMP-9 mRNA表達(dá)水平逐漸升高，與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。見表2。

2.3 兩組患者M(jìn)MP-9活性的變化 MMP-9活性在12 h內(nèi)持續(xù)升高，與對照組比較有顯著差異（P＜0.05）。見表3。

2.4 相關(guān)性分析 將miR-133a與MMP-9 mRNA進(jìn)行相關(guān)性分析，隨著時間的推移，兩者呈負(fù)相關(guān)（r=-0.958,P＜0.05）。

3 討論

目前研究表明，急性心?；颊甙l(fā)生心室重構(gòu)過程中，其主要發(fā)生了心肌細(xì)胞的壞死、心肌細(xì)胞外間質(zhì)纖維膠原的合成與降解的動態(tài)平衡受到破壞。MMP-9是一種具有鈣、鋅依賴性的內(nèi)源性蛋白酶家族中的一員，對細(xì)胞外基質(zhì)成分有較高親和力，是細(xì)胞外基質(zhì)的主要生理性調(diào)節(jié)物質(zhì)，在基質(zhì)成分合成和降解的過程中起著重要作用[1,2]。如王琦等[3]研究顯示，心肌梗死后心肌組織中MMP-9的活性和表達(dá)均顯著增高，膠原纖維含量增加，I/III型膠原比例升高。Zhu等[4]研究發(fā)現(xiàn)，心肌梗死后心肌MMP-9蛋白的表達(dá)明顯上調(diào)，ECM降解增加，導(dǎo)致心室壁變薄及心室腔進(jìn)行性擴(kuò)張；并且隨著心梗后心衰的進(jìn)展MMP-9的表達(dá)也進(jìn)一步升高。Tan等[5]通過對急性ST段抬高型心肌梗死的患者研究發(fā)現(xiàn)，MMP-9的表達(dá)水平升高并且與左心室結(jié)構(gòu)、功能密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)MMP-9在急性心肌梗死患者中表達(dá)升高，且與對照組比較有顯著性差異（P＜0.001），與以往心肌梗死后MMP-9表達(dá)升高的結(jié)論相一致。同時發(fā)現(xiàn)MMP-9的心梗后12 h內(nèi)呈持續(xù)性升高，但何時達(dá)到峰值可能與心肌梗死的面積及是否發(fā)生心力衰竭相關(guān)[4]。

miRNA是一組高度保守、長度約22個核苷酸的內(nèi)源性非編碼RNA。miR多通過與靶基因mRNA特定序列互補(bǔ)結(jié)合抑制靶基因轉(zhuǎn)錄后的翻譯和修飾[6]。miRNA-133a為心肌和骨骼肌特異性表達(dá)的miRNA。目前有研究[7]表明心血管疾病患者中，心肌細(xì)胞損傷后導(dǎo)致miR-133a在血漿中的表達(dá)水平升高。D'Alessandra等[8]研究發(fā)現(xiàn)，心?；颊哂诔霈F(xiàn)心肌缺血癥狀后大約84 min-228 min，血漿中miR-133a表達(dá)水平達(dá)到高峰，持續(xù)約5天逐漸下降至正常水平。本研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)病12 h內(nèi)的心?；颊呷朐旱谝环菅膍iR-133a表達(dá)最高，隨后逐漸下降，提示其表達(dá)峰值可能在12 h內(nèi)。這與Wang[9]在小鼠心肌梗死模型的研究發(fā)現(xiàn)miR-133a的峰值大致相同。而體內(nèi)miR-133表達(dá)上調(diào)被認(rèn)為可以阻止心室重構(gòu)的發(fā)生[10]。Dakhlallah等[11]研究發(fā)現(xiàn)，心肌梗死后miRNA-133a的表達(dá)水平下降，通過促進(jìn)miR-133a的表達(dá)能減少心梗后心肌細(xì)胞凋亡，改善心臟功能及心肌纖維化。結(jié)合既往研究表明miR-133在心室重構(gòu)過程中可能起到短暫且不穩(wěn)定的作用。其表達(dá)的變化對心室重構(gòu)的進(jìn)程有一定影響。但是否通過調(diào)節(jié)MMP-9的表達(dá)起作用，目前未見相關(guān)報(bào)道。本研究將心?；颊哐獫{中的MMP-9 mRNA與miR-133a進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，兩者呈負(fù)相關(guān)，而在腫瘤研究領(lǐng)域中發(fā)現(xiàn)miR-133a能通過下調(diào)MMP-9的表達(dá)來抑制細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移與膠原降解[12,13]，類似的研究發(fā)現(xiàn)miRNA-133a對MT1-MMP的表達(dá)水平有一定影響[14]，提示在心肌梗死后心室重構(gòu)過程中可能存在miR-133a/MMP-9通路。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)MMP-9及miR-133a在急性心肌梗死后表達(dá)均升高，且兩者具有一定相關(guān)性，miR-133a/MMP-9通路可能存在，進(jìn)一步在細(xì)胞學(xué)水平對兩者的相關(guān)性進(jìn)行研究將有助于闡明心肌梗死后心室重構(gòu)的機(jī)制及尋求新的治療靶點(diǎn)。