丹皮酚影響哮喘大鼠氣道高反應(yīng)性的研究

趙智麗，黃瑩，應(yīng)夢佳

（深圳市龍華區(qū)人民醫(yī)院藥學部，廣東深圳 518109）

哮喘作為全球患病率、死亡率較高的呼吸系統(tǒng)疾病，近幾年發(fā)病率上升已成為威脅人類身心健康的常見疾病之一，疾病病程長、并發(fā)癥多、易反復(fù)發(fā)作，如何有效治療控制病情發(fā)展、提高患者生存質(zhì)量得到臨床治療者關(guān)注[1]。雖然目前可用于哮喘的西藥較多，但受藥物毒副作用影響，部分患者療效不理想，因此臨床一直在尋求一種質(zhì)優(yōu)價廉、安全穩(wěn)定的藥物來進行治療。近些年隨著中藥廣泛用于臨床疾病治療，有學者研究發(fā)現(xiàn)丹皮中有效成分丹皮酚能有效改善患者肺功能，臨床認為可能與丹皮酚能減輕氣道高反應(yīng)、降低相關(guān)細胞因子水平表達有關(guān)[2]。但目前臨床相關(guān)丹皮酚治療哮喘的機制研究較少，故本文通過觀察哮喘大鼠應(yīng)用丹皮酚后氣道高反應(yīng)性情況，探究藥物治療機制，旨在為后期臨床疾病治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 動物、儀器、試劑 本次選取SD大鼠均為雄性、健康、清潔級，由上海斯萊克實驗動物有限公司提供，許可證號：SCXK滬，2012-0002；共40只，體質(zhì)量230.6 g-264.8 g，平均（247.0±5.8）g，隨機將大鼠分為四組，每組大鼠10只。試劑、儀器：離心機、電子天平、超聲霧化器、全自動酶聯(lián)免疫工作站、動物肺功能分析系統(tǒng)；氫氧化鋁（分析純）、水合氯醛（分析純）、乙酰膽堿、卵清蛋白，丹皮酚注射液 （批準文號：國藥準字H33020043，產(chǎn)品規(guī)格：2 mL：10 mg，寧波天真制藥有限公司）、IgE試劑盒。

1.2 方法

1.2.1 模型制作 模型組、丹皮酚低劑量組、丹皮酚高劑量組大鼠以0.2% OVA凝膠（10%氫氧化鋁凝膠配制后溶入OVA）行十點（即四足趾、頸部、兩側(cè)腹股溝及背部上中下）致敏，每點皮下注射凝膠0.05 mL，最后腹腔注射0.5 mL，同時霧化吸入0.2%OVA，建立哮喘大鼠模型，術(shù)后正常飲水、進食?？瞻讓φ战M致敏及霧化吸入均使用生理鹽水。

1.2.2 給藥 丹皮酚低劑量組、丹皮酚高劑量組分別灌胃給藥丹皮酚75 mg/kg、300 mg/kg，并在給藥后半小時再次行霧化吸入1%OVA，攻擊30 min，空白對照組、模型組給予生理鹽水。如此持續(xù)4周。

1.2.3 血清IgE檢測 在最后一次攻擊1天后，對大鼠以3.5%水合氯醛進行麻醉，取腹主動脈血2 mL-3 mL，進行離心處理，使用離心機參數(shù)3,000 r/min，離心時間15 min，取血清以ELISA法對血清IgE水平進行檢測，嚴格按說明書進行。

1.2.4 氣道反應(yīng)性測定 在取血后對大鼠腹腔注射0.8%戊巴比妥鈉麻醉，行氣管插管，對大鼠尾靜脈注射Ach，濃度依次為1.0 mg/kg、4.0 mg/kg、8.0 mg/kg，每濃度注射間隔5 min，以肺功能儀觀察大鼠、肺順應(yīng)性（Cdyn）、氣道阻力（RL）變化情況。

1.3 觀察指標 觀察大鼠血清IgE水平變化，測定大鼠注射乙酰膽堿（Ach）后氣道反應(yīng)情況，觀察RL、Cdyn下降率。

表1 血清IgE水平變化（Mean±SD,μg/mL）

1.4 統(tǒng)計學分析 以SPSS 20.0系統(tǒng)行統(tǒng)計學分析，計量資料采用均數(shù)±標準差（Mean±SD）表示，采用t檢驗。計數(shù)資料采用率（%）表示，采用卡方檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠模型建立情況 在OVA致敏、激發(fā)后，模型組出現(xiàn)呼吸急促、飲食減少、打噴嚏、煩躁不安、腹部煽動、口唇發(fā)紺等情況，空白對照組小鼠一般狀態(tài)正常，其他兩組大鼠較模型組狀態(tài)有改善，此次建模成功。

2.2 大鼠血清IgE水平變化 各組間血清IgE水平有明顯差異（P＜0.05），具體見表1。

2.3 大鼠氣道高反應(yīng)性變化 不同濃度各組間RL、Cdyn下降率有明顯差異（P＜0.05），具體見表2。

表2 大鼠氣道高反應(yīng)性變化（Mean±SD,%）（n=10）

3 討論

支氣管哮喘是臨床進展性慢性病，臨床癥狀以喘息、胸悶、咳嗽等常見，且易反復(fù)發(fā)作給患者生活、工作等造成影響，臨床認為疾病發(fā)生與氣道高反應(yīng)有關(guān)，目前疾病治療主要以西藥為主，其中糖皮質(zhì)激素是現(xiàn)今最有效的藥。其具有良好抗炎作用，但大量實踐表明此類藥不良反應(yīng)較多，易造成患者依賴性，因此臨床在尋求一種新型藥物來治療疾病[3]。

丹皮酚是中藥丹皮中有效成分，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)其具有抗炎、抑制變態(tài)反應(yīng)的作用，能有效抑制炎癥因子釋放，而哮喘發(fā)生是由多種炎性因子共同作用所致，有學者認為此藥能通過抑制機體炎癥發(fā)展，從而松弛支氣管平滑肌，改善哮喘癥狀[4]。但目前有關(guān)研究較少，故本次觀察哮喘大鼠用藥后的情況，I型變態(tài)反應(yīng)主要是由IgE介導，當IgE水平上升時，機體大量炎性介質(zhì)釋放，細胞浸潤導致氣道分泌粘液增加，血管壁通透性增加、平滑肌收縮，促哮喘發(fā)作，故血清中IgE水平是哮喘病情嚴重程度、緩解的重要指標[5]。本研究中模型組血清IgE水平高于其他三組，而丹皮酚低劑量IgE水平高于丹皮酚高劑量（P＜0.05），提示丹皮酚能有效降低患鼠血清IgE水平，高劑量此藥能抑制炎癥細胞浸潤、防治哮喘發(fā)作。

氣道高反應(yīng)（AHR）是哮喘的特征，哮喘病情嚴重程度與其AHR的高低呈正相關(guān)，故臨床一般以AHR是否降低作為疾病治療有效性的指標，而RL、Cdyn作為AHR評價指標，RL、Cdyn下降率越低表示氣道反應(yīng)越低，哮喘改善效果越好[6]。本次丹皮酚組RL、Cdyn下降率低于模型組，且丹皮酚高劑量下降率低于低劑量（P＜0.05），提示丹皮酚能減輕RL、提高肺順應(yīng)性，從而降低氣道高反應(yīng)性，改善哮喘發(fā)作。

綜上所述，高劑量丹皮酚能降低哮喘大鼠氣道高反應(yīng)性、減少血清IgE水平，可能會對哮喘防治起到一定作用。