天名精化學(xué)成分的研究

錢群剛 蔡 亮楊勝輝邵 莉 龔力民周小江?

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南長沙410208；2.湖南省中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)化及功能工程技術(shù)研究中心，湖南 長沙410208；3.湖南省疾病預(yù)防控制中心，湖南 長沙410005）

天名精為湖南省的地方用藥，收載于2009年版《湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》，為菊科天名精屬植物天名精Carpesium abrotanoidesL.的干燥全草，有清熱解毒、去痰止血的功效，主治咽喉腫痛、扁桃體炎、支氣管炎，外用治創(chuàng)傷出血、疔瘡腫毒、蛇蟲咬傷［1-2］。其果實(shí)為中藥“北鶴虱”，其性平，味苦、辛，有小毒，主治蛔蟲病、蟯蟲病、絳蟲病和蟲積腹痛。天名精主要含有倍半萜內(nèi)酯類成分，具有抗腫瘤、抑菌、抗炎、殺蟲和細(xì)胞毒活性等作用［3-6］。課題組前期從天名精中分離鑒定了14個(gè)化合物，其中1個(gè)為結(jié)構(gòu)非常新穎的倍半萜二聚體，并且具有較好的抗甲流和抗腫瘤的活性［7-8］。為了尋找更多的抗甲流和抗腫瘤活性成分，繼續(xù)對(duì)天名精進(jìn)行成分研究，采用硅膠、反相硅膠、Sephadex LH-20等多種柱色譜，從中分離鑒定了11個(gè)化合物，且所有化合物均為首次從該種植物中分離得到。

1 材料

Bruker Avance Ⅲ 600核磁共振儀（德國Bruker 公司，TMS 為內(nèi)標(biāo)）；Waters 質(zhì)譜儀（美國Waters 公司）；Agilent 1260高效液相色譜儀（美國Agilent 公司）；EYELA N-1300旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（東京理化器械株式會(huì)社）；AS 系列超聲波清洗機(jī)（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）；BSZ-100自動(dòng)部份收集器（上海滬西分析儀器廠有限股份公司）；Dr.Maisch 色譜柱（250 mm×10 mm，5 μm，德國邁克公 司）；Sephadex LH-20（美 國 Amersham Bioscience 公司）。RP-18反相硅膠（40～63 μm，日本Daiso 公司）；MCI gel CHP-20P（日本三菱化學(xué)株式會(huì)社）；柱層析硅膠（200～300目）、硅膠H 和薄層層析硅膠GF254（青島海洋化工廠）；顯色劑10%硫酸乙醇溶液；所用試劑均為分析純。

實(shí)驗(yàn)用天名精藥材于2016年10至11月采自湖南省長沙市望城區(qū)，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)周小江教授鑒定為菊科植物天名精Carpesium abrotanoidesL.的干燥全草。

2 提取與分離

60 kg 天名精干燥全草切段，用8倍量70%乙醇回流提取2次，每次1 h，濾過，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，加蒸餾水混懸，用乙酸乙酯萃取，減壓回收溶劑得乙酸乙酯部位浸膏2.45 kg。乙酸乙酯部位過正相硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫（70 ∶30 ∶1、70 ∶30 ∶3、70 ∶30 ∶5、70 ∶30 ∶10、70 ∶30 ∶20、70 ∶30 ∶30、70 ∶30 ∶40、70 ∶30 ∶70、甲醇），檢識(shí)，合并，得10個(gè)部分（Fr.1～Fr.10）。Fr.1（371 g）經(jīng)MCI柱色譜，甲 醇-水（30 ∶ 70、40 ∶ 60、50 ∶ 50、60 ∶40、70 ∶30、80 ∶20、90 ∶10、甲醇）梯度洗脫，檢識(shí)，合并，得7個(gè)部分（Fr.1-1～Fr.1-7）。Fr.1-1（18.4 g）經(jīng)正相硅膠柱，環(huán)己烷-乙酸乙酯（10 ∶1）等度洗脫，檢識(shí)，合并，得8個(gè)部分（Fr.1-1-1～Fr.1-1-8），F(xiàn)r.1-1-1經(jīng)HPLC ［甲醇-水（50 ∶50）］純化得化合物8（1.3 mg）。Fr.1-1-3經(jīng)HPLC ［甲醇-水（30 ∶70）］純化得化合物1（4.6 mg）。Fr.1-1-8經(jīng)HPLC ［甲 醇-水（35 ∶65）］純化得化合物2（2.1 mg）。Fr.1-1-7經(jīng)HPLC ［甲醇-水（25 ∶ 75）］純化得化合物7（2.8 mg）。Fr.1-2（8.1 g）經(jīng)反相硅膠柱，甲醇-水（30 ∶70、40 ∶60、50 ∶50、60 ∶40、70 ∶30、80 ∶20、90 ∶10、甲醇）梯度洗脫，檢識(shí)，合并，得5個(gè)部分（Fr.1-2-1～Fr.1-2-5）。Fr.1-2-4經(jīng)HPLC ［甲醇-水（40 ∶ 60）］純化得化合物4（2.5 mg）、5（1.8 mg）。采用環(huán)己烷-乙酸乙酯（10 ∶1）洗脫，對(duì)Fr.1-2-2（3.5 g）進(jìn)行正相硅膠柱色譜分離，檢識(shí)，合并，得12個(gè)部分（Fr.1-2-2-1～Fr.1-2-2-12），F(xiàn)r.1-2-2-2經(jīng)HPLC ［甲醇-水（30 ∶70）］純化得化合物11（6.9 mg），F(xiàn)r.1-2-2-4經(jīng)HPLC ［甲醇-水（40 ∶60）］分離，得化合物3（5.2 mg）、6（14.2 mg）、9（1.4 mg）、10（1.0 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，溶于三氯甲烷、甲醇。HRESI-MSm／z：197.117 8 ［M ＋H］＋，（計(jì)算值197.117 8），分子式C11H16O3。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：1.25（3H，s，H-10），1.30（3H，m，H-11），1.57（3H，s，H-12），1.82（1H，m，H-4b），1.93（1H，m，H-5b），2.01（1H，m，H-5a），2.09（1H，m，H-4a），3.65（1H，m，H-3），5.75（1H，s，H-9）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：24.6（C-10），24.9（C-11），25.2（C-12），27.5（C-4），34.7（C-5），42.7（C-2），76.9（C-3），88.9（C-6），115.9（C-9），174.4（C-8），183.0（C-1）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］基本一致，故鑒定為（3R，6S）-3-hydroxy-2，2，6-trimethyl-7-oxabicyclo［4.3.0］-non-9-en-8-one。

化合物2：白色粉末，溶于三氯甲烷、甲醇。HRESI-MSm／z：248.138 7 ［M ＋Na］＋，（計(jì)算值248.138 8），分子式C13H20O3。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：1.12（3H，s，H-12），1.21～1.27（1H，m，H-4b），1.31～1.35（1H，m，H-2b），1.36（3H，s，H-11），1.44（3H，s，H-13），1.90（1H，m，H-2a），2.17（1H，m，H-4a），2.28（3H，s，H-10），4.22（1H，m，H-3），5.91（1H，s，H-8）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：27.0（C-10），29.2（C-11），30.8（C-13），32.5（C-12），36.9（C-1），49.9（C-4），50.0（C-2），64.4（C-3），72.5（C-5），101.3（C-8），120.1（C-6），202.2（C-9），211.1（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］基本一致，故鑒定為蚱蜢酮。

化合物3：淡黃色油狀物，溶于三氯甲烷、甲醇。HRESI-MSm／z：248.136 2 ［M＋Na］＋，（計(jì)算值248.138 8），分子式C13H20O3。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：0.96（3H，s，H-11），1.18（3H，s，H-12），1.19（3H，s，H-13），1.58（1H，d，J=12.8 Hz，H-2a），1.65（1H，dd，J=9.2，14.3 Hz，H-4b），2.29（3H，s，H-10），2.30（1H，m，H-4a），3.76（1H，m，H-3），6.18（1H，d，J=15.7 Hz，H-8），7.17（1H，d，J=15.8 Hz，H-7）；13CNMR（150 MHz，CD3OD）δ：20.2（C-13），25.3（C-12），27.6（C-10），29.9（C-11），36.3（C-1），41.5（C-4），47.8（C-2），64.5（C-3），68.9（C-5），70.9（C-6），133.9（C-8），145.6（C-7），200.4（C-9）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］基本一致，故鑒定為（3S，5R，6S）-3-hydroxy-5，6-epoxy-βionone。

化合物4：無色針晶（甲醇），溶于三氯甲烷、甲醇。HRESI-MSm／z：246.121 3 ［M＋Na］＋，（計(jì)算值246.123 2），分子式C13H18O3。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：1.01（3H，s，H-7），1.06（3H，s，H-8），1.89（3H，s，H-9），2.28（1H，d，J=17.4 Hz，H-6b），2.30（3H，s，H-4′），2.60（1H，d，J=17.0 Hz，H-6a），5.94（1H，s，H-2），6.43（1H，d，J=15.8 Hz，H-2′），6.99（1H，d，J=15.8 Hz，H-1′）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：19.2（C-8），23.5（C-9），24.7（C-7），27.6（C-4′），42.7（C-5），50.5（C-6），79.9（C-4），128.0（C-2），131.7（C-2′），148.4（C-1′），164.7（C-3），200.4（C-1），200.7（C-3′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］基本一致，故鑒定為4-hydroxy-4-（3-oxo-1-butenyl）-3，5，5-trimethylcyclohex-2-en-1-one。

化合物5：無色油狀物，溶于三氯甲烷、甲醇。HRESI-MSm／z：382.300 6 ［M＋Na］＋，（計(jì)算值382.139 2），分子式C20H22O6。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：3.03（2H，dd，J=8.8，16.6 Hz，H-8，8′），3.84（6H，s，3，3′-OCH3），3.94（2H，dd，J=6.0，9.1 Hz，H-9a，9a′），4.34（2H，m，H-9b，9b′），4.87（2H，d，J=4.0 Hz，H-7，7′），6.76（2H，d，J=8.0 Hz，H-6，6′），6.80（2H，dd，J=1.7，8.1 Hz，H-5，5′），6.93（2H，d，J=1.8 Hz，H-2，2′）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：54.2（C-8，8′），54.7（3，3′-OCH3），72.2（C-9，9′），88.8（C-7，7′），110.8（C-2，2′），116.0（C-5，5′），120.2（C-6，6′），133.4（C-1，1′），147.5（C-4，4′），149.2（C-3，3′）。以 上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］基本一致，故鑒定為松脂素。

化合物6：黃色晶體粉末，溶于三氯甲烷、甲醇。HRESI-MSm／z：193.120 4 ［M-H］-，（計(jì)算值193.050 1），分子式C10H10O4。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：3.91（6H，s，2，5-OCH3），7.21（2H，s，H-3，6），9.71（2H，s，1，4-CHO）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：56.8（2，5-OCH3），108.2（C-3，6），128.7（C-1，4），149.7（C-2，5），192.8（2，5-CHO）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為1，4-dimethoxy-2，5-diformylbenzene。

化合物7：淺黃色油狀物，溶于甲醇。HRESIMSm／z：206.087 5［M＋Na］＋，（計(jì)算值206.091 9），分子式C10H14O3。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：2.22（3H，s，H-7），3.26（1H，m，H-8），3.84（4H，m，H-9，10），6.60（2H，br d，J=6.3 Hz，H-2，6），6.97（1H，d，J=8.4 Hz，H-5）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：21.1（C-7），45.9（C-8），63.9（C-9，10），117.1（C-2），121.3（C-6），124.6（C-5），129.9（C-4），138.4（C-1），156.5（C-3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］基本一致，故鑒定為9，10-dihydroxythymol。

化合物8：淡黃色固體，溶于三氯甲烷、甲醇。HRESI-MSm／z：204.070 3 ［M＋Na］＋，（計(jì)算值204.076 2），分子式C10H12O3。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：2.57（2H，t，J=7.7 Hz，H-8），2.81（2H，t，J=7.7 Hz，H-7），3.63（3H，s，4-OCH3），6.68（2H，d，J=8.5 Hz，H-3，5），7.01（2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：31.2（C-7），37.1（C-8），52.0（4-OCH3），116.2（C-3，5），130.2（C-2，6），132.7（C-1），156.8（C-4），175.3（C-9）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］基本一致，故鑒定為dihydro-p-methoxy cinnamic acid。

化合物9：無色油狀液體，溶于乙醇、甲醇。HRESI-MSm／z：196.060 7 ［M-H］-，（計(jì)算值196.061 0），分子式 C9H11NO4。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：1.95（3H，s，4-CH3），2.61（2H，m，H-1′），2.67（2H，m，H-2′），3.66（3H，s，3′-OCH3）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：8.4（4-CH3），20.1（C-1′），32.7（C-2′），52.2（3′-OCH3），140.3（C-3），140.7（C-4），174.2（C-2），174.4（C-5），174.5（C-3′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］基本一致，故鑒定為methyl hematinate。

化合物10：無色結(jié)晶，溶于甲醇、乙醇、三氯甲烷。HRESI-MSm／z：135.049 0 ［M-H］-，（計(jì)算值135.044 6），分子式C8H8O2。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：2.52（3H，s，4-CH3），6.82（2H，d，J=8.8 Hz，H-3，5），7.87（2H，d，J=8.8 Hz，H-2，6）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：26.2（4-CH3），116.5（C-2，6），129.8（C-4），132.2（C-3，5），164.8（C-1），199.5（-COOH）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［18］基本一致，故鑒定為對(duì)甲基苯甲酸。

化合物11：黃色至淡棕色結(jié)晶粉末，溶于甲醇、乙 醇、乙酸乙酯、丙 酮。HRESI-MSm／z：123.044 5 ［M＋H］＋，（計(jì)算值123.044 6），分子式C7H6O2。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.90（2H，d，J=8.6 Hz，H-3，5），7.77（2H，d，J=8.6 Hz，H-2，6），9.75（1H，s，-CHO）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：116.9（C-3，5），130.1（C-1），133.5（C-2，6），165.6（C-4），192.8（-CHO）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［19］基本一致，故鑒定為對(duì)羥基苯甲醛。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)采用硅膠柱、Sephadex LH-20凝膠柱等對(duì)天名精的乙酸乙酯部位化學(xué)成分進(jìn)行研究，并從中分離得到11個(gè)化合物，均為首次從該植物分離得到。其中化合物1～4為倍半萜類，藥理研究發(fā)現(xiàn)，這類化學(xué)成分多具有細(xì)胞毒性、抗癌、抗炎、抑菌等活性［4，20-21］?；衔?～8、10～11為芳香族化合物，其中化合物10作為抗癌藥物丙卡巴肼合成的初始原料［22］。

在新藥研究過程中，通過化合物活性篩選而獲得具有生物活性的先導(dǎo)化合物是創(chuàng)新藥物研究的基礎(chǔ)，而從天然產(chǎn)物中得到先導(dǎo)化合物是其主要途徑。近年來多位學(xué)者從天名精中分離得到倍半萜二聚體［7，23-24］，并且都具有顯著的抗腫瘤和細(xì)胞毒活性，這為天名精的進(jìn)一步研究提供了研究方向，課題組也將進(jìn)一步研究，以期發(fā)現(xiàn)更多具有良好生物活性的新型先導(dǎo)化合物。