禽白血病研究進展

孔冬妮，王 嘉，毛亞卿，吳 濤，王 哲，李 嶺，劉 丹

(中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京海淀100081)

禽白血病(Avian leucosis, AL)是由反轉(zhuǎn)錄病毒科(Retroviridae) 禽白血病/肉瘤病毒群病毒( Avian leukosis /sarcoma virus, ALV)引起的禽類多種腫瘤性疾病的總稱。本病在世界各地均有發(fā)生，是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要疾病之一。ALV導(dǎo)致的經(jīng)濟損失表現(xiàn)在三個方面：一是產(chǎn)生腫瘤，導(dǎo)致雞的死亡；二是產(chǎn)生非腫瘤綜合征，表現(xiàn)為生產(chǎn)指標(biāo)發(fā)生變化,由此嚴(yán)重影響?zhàn)B雞生產(chǎn)；三是ALV感染后可引起雞的免疫抑制，繼發(fā)諸如馬立克病、雞傳染性法氏囊病、雞傳染性貧血等免疫抑制病，從而造成更嚴(yán)重的損失。

1 病原學(xué)

禽白血病是由反轉(zhuǎn)錄病毒科禽白血病/肉瘤病毒群病毒引起的，常被稱為禽白血病病毒。根據(jù)病毒囊膜糖蛋白的不同分為A、B、C、D、E和J等亞群，這種糖蛋白決定了抗原性、病毒對同群或不同群的干擾模式以及宿主范圍。其中E亞群是由整合到宿主細胞DNA上的病毒基因產(chǎn)生的非致癌性內(nèi)源病毒，通常致病性很弱或無致病性。所有ALV的野毒株都是致癌性的，但在致癌性和復(fù)制能力上有所不同。歐洲國家流行最廣的亞群是A和B[1]，自從英國首次分離出J亞群ALV以來，其他許多國家也從患雞骨髓瘤的肉用種雞分離到該病毒。我國在1999年首次從市場肉雞及肉種雞場腫瘤病雞中分離檢出J亞型ALV[2]。近年，我國蛋雞群中流行的ALV-J的囊膜基因出現(xiàn)了多處堿基突變，3′非編碼區(qū)有205 bp堿基缺失，保留了與致瘤相關(guān)的E元件序列。不同亞群ALV的重組時有發(fā)生，我國雞群中已有C亞群與E亞群、C亞群與J亞群和B亞群與J亞群重組的研究報道。

2 流行病學(xué)

雞是所有白血病/肉瘤病毒的自然宿主，除雉雞、鷓鴣和鵪鶉外，其他禽類均未分離到這類病毒。母雞可通過蛋白或蛋黃，或二者同時排放ALV，孵化開始后就可能發(fā)生感染。先天性感染的雞不會產(chǎn)生中和抗體，且多為終生帶毒。雞在出殼后的水平傳播也是很重要的，尤其是出殼后立即與大劑量病毒接觸，如先天感染雞的糞便或污染的疫苗。已經(jīng)確認(rèn)，成年雞的ALV有4種類型：無病毒血癥，無抗體(V-A-)；無病毒血癥，有抗體(V-A+)；有病毒血癥，有抗體(V+A+)；有病毒血癥，無抗體(V+A-)。未感染雞群中的雞和易感雞群中有抗病基因的雞屬于V-A-[3-4]。感染雞群中的基因易感雞屬于其他三類中的一類，大多數(shù)是V-A+，通常V+A-為極少數(shù)，不超過10%。與其他病毒相比，ALV并非高度接觸性，很容易被消毒劑滅活。通過嚴(yán)格的衛(wèi)生措施可降低或避免感染。凈化后，采用標(biāo)準(zhǔn)化疫病控制和衛(wèi)生措施，可以維持雞群無病。公雞在ALV傳播中的作用還不清楚。表面上，感染公雞不影響子代的先天感染率，但可作為病毒攜帶者和接觸源，或通過性傳播而感染其他雞。我國ALV感染雞群常伴有其他免疫抑制病病原(如雞傳染性貧血病毒、網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒等)的混合感染[5-6]。2012年王鑫等從我國地方品系雞中鑒定了新的ALV亞群，定名為K亞群[7]。另外，已在我國野鳥中發(fā)現(xiàn)ALV的流行。

3 致病機理

ALV是一種法氏囊依賴性淋巴系統(tǒng)的克隆性惡性腫瘤[8]。腫瘤轉(zhuǎn)化常出現(xiàn)在正常法氏囊，最早常見于感染4-8周后。大約14周齡之前，通常檢測不到腫瘤。腫瘤幾乎全部由B淋巴細胞組成，在大多數(shù)情況下，B淋巴細胞表面有IgM。至今還沒有發(fā)現(xiàn)抗腫瘤免疫應(yīng)答。除產(chǎn)生耐受性外，感染后一般都容易產(chǎn)生抗體。雞并發(fā)感染馬立克病毒血清2型，即常用的疫苗毒，可以強化雞白血病腫瘤的形成。這種強化作用不僅需要馬立克病毒血清2型的免疫接種，還需要有遺傳性易感雞和ALV的早期感染。因為大多數(shù)品系的商品雞都有耐受性，且易感雞群大部分已經(jīng)凈化了ALV，因此目前并不認(rèn)為這種強化作用是一個現(xiàn)實問題。ALV-J分離株5′非編碼區(qū)堿基的插入能夠增強ALV-J的體外復(fù)制能力，但與ALV-J的致病力增強無直接關(guān)系，而3′非編碼區(qū)205 bp堿基缺失增強了病毒致病性。ALV-J通過誘導(dǎo)IL-6的生成而促進血管內(nèi)皮生長因子及其受體的表達，進而有利于誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生。研究證實，MYC、TERT、ZICI基因是ALV-J整合到宿主細胞中的常見插入位點，可能與ALV-J激活宿主癌基因、誘導(dǎo)髓細胞瘤有關(guān)；而整合到MET基因，能夠誘導(dǎo)MET表達量升高，與誘導(dǎo)血管瘤的形成有關(guān)。從J亞群ALV感染的DF-1細胞上清中分離提取外泌體(Exosomes)，發(fā)現(xiàn)病毒感染細胞分泌的Exosomes可能攜帶了某些病毒蛋白，在細胞信號傳導(dǎo)中傳遞了病毒的組成成分，造成細胞對病毒識別的喪失，從而使病毒能夠順利地在細胞內(nèi)復(fù)制及傳播，確定Exosomes在ALV-J所造成的免疫抑制過程中信號傳遞作用[9]。亞臨床疫病綜合征以產(chǎn)蛋率下降，無腫瘤形成為特征，其經(jīng)濟損失比ALV引起的死亡更為嚴(yán)重。具有亞臨床癥狀的雞可將病毒或病毒抗原排入卵蛋白，其致病機制尚不清楚。

4 診斷技術(shù)

因為ALV廣泛存在于雞群，因此一些病毒檢測試驗(包括病毒分離、PCR及抗原檢測)對于診斷淋巴瘤等自然病例的效果有限，甚至無診斷價值。在缺乏外周神經(jīng)病變時，具體有診斷意義的眼見病變有肝臟、脾臟、法氏囊出現(xiàn)腫瘤。14周齡以上的雞出現(xiàn)腫瘤，組織學(xué)檢查，淋巴細胞形態(tài)一致、數(shù)量多，表面含有IgM和B細胞標(biāo)記物。通過眼觀病變和顯微病變，可將禽白血病腫瘤與馬立克病腫瘤相鑒別，也可以采用分子生物學(xué)技術(shù)，證明前病毒DNA序列已經(jīng)特征性的克隆整合到腫瘤細胞基因中，該基因組攜帶相關(guān)斷裂的原癌基因c-myc。除病毒檢測法外，很難將ALV與網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒引起的B細胞淋巴瘤進行區(qū)分。已經(jīng)研發(fā)出幾種用于特異性檢測的PCR引物，主要針對大多數(shù)ALV分離株，特別是A和J亞群。針對內(nèi)生性E亞群ALV的其他特異性引物，也已投入使用。PCR已用于檢測特征性的ALV毒株，包含禽商品化活毒疫苗[10-14]。用于檢測ALV A、B和J亞群抗體的ELISA試劑盒，已形成商品投入市場[15-17]。我國建立了用于檢測ALV的群特異性抗原ELISA檢測方法、熒光定量PCR診斷方法、多重PCR檢測方法、LAMP鑒別診斷方法等病原學(xué)快速檢測技術(shù)，部分已經(jīng)組裝了試劑盒，如ALV群特異性抗原ELISA檢測試劑盒、膠體金檢測試紙卡等[18]。

5 防控措施

對原種禽群進行ALV的凈化，是控制雞群ALV感染的最有效方法。可使用針對感染性病毒的免疫酶分析方法或生物學(xué)方法，檢測雞卵蛋白中的病毒抗原，以評價種禽群的排毒情況[19]。應(yīng)廢棄排毒母雞所產(chǎn)的蛋，以降低其子代雞群的感染水平。如果飼養(yǎng)規(guī)模小，比較容易鑒別未感染雞群。這些控制措施僅適用于原種雞群。在許多蛋雞種群中，由于采取減少病毒感染的措施，已使ALV的死亡率明顯下降，蛋雞產(chǎn)蛋率也有一定升高；在一些肉用雞群實施類似的控制措施，也同樣取得一定效果。一些育種場采取全面凈化措施，一些育種場更愿意采取降低病毒感染水平的措施。某些品系雞對病毒特定亞群的感染，具有特異的遺傳抗病性。盡管遺傳抗病性不能替代降低病毒感染或凈化，但最近已克隆出細胞受體基因，并開發(fā)出快速分子檢測方法，用于病毒易感性測定。迄今，通過接種疫苗預(yù)防腫瘤仍無太大希望。我國主要開展了ALV凈化措施的研究，制定了《種禽場白血病監(jiān)測凈化方案》。在研制病原學(xué)檢測試劑盒的基礎(chǔ)上，針對我國雞群特點，開展了多輪檢測凈化，部分大型養(yǎng)殖場已基本達到ALV凈化標(biāo)準(zhǔn)。

6 展望

ALV可引起禽類的多種腫瘤性疾病，能作為研究癌癥的重要模型。目前研究表明，腫瘤從本質(zhì)上說是基因病，各種致瘤因子引起細胞非致死性的DNA損害，從而導(dǎo)致原癌基因的激活、抑癌基因的失活、凋亡調(diào)節(jié)基因的改變，使細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化。因此，ALV對人類控制和預(yù)防癌癥有重要的意義。在ALV防控方面，當(dāng)前我國ALV防控體系仍不完善，還未徹底凈化該病，但是一直以來動物疫病防控系統(tǒng)和科研機構(gòu)都在持續(xù)關(guān)注ALV流行趨勢發(fā)展，并致力于研究檢測、預(yù)防、控制該病的方法。近年來，報道了一些ALV的快速檢測技術(shù)、疫苗和凈化策略，對ALV的防控起到積極的作用。