番荔枝種子化學(xué)成分的研究

李 月， 盧佳慧， 李 祥， 陳建偉， 苗筠杰

（南京中醫(yī)藥大學(xué)， 江蘇 南京210023）

番荔枝種子為番荔枝科番荔枝屬植物番荔枝Annona squamosa Linn. 的干燥成熟種子［1］， 原產(chǎn)于美洲， 目前在我國廣東、 廣西、 云南、 海南、 福建等地都有栽培， 其性味苦、 寒， 歸心、 肺、 肝、腎、 脾經(jīng)， 功效消積殺蟲、 清熱解毒、 解郁、 止血［2-3］， 常用于惡瘡腫痛、 驅(qū)蟲等［2-4］， 亦用于治療痢疾、 癲癇、 發(fā)燒、 出血和潰瘍， 也有抗腫瘤、抗生育等作用［5-7］。 本實驗對番荔枝種子超臨界CO2萃取物的化學(xué)成分進行研究， 從中分離鑒定出7 個化合物， 其中1～3 為新化合物， 4～5 為首次從該植物中分離得到。

1 材料

HA2215006 超臨界CO2萃取儀（江蘇南通華安超臨界設(shè)備有限公司）； EZ Purifer 中壓制備液相［利穗科技（蘇州） 有限公司］； Shimadzu LC-20A 高壓制備液相（日本島津公司）； RE-201B 恒溫水浴鍋（南京金正教學(xué)儀器有限公司）； SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵 （鄭州長城科工貿(mào)有限公司）； UV-2401PC 光譜儀（日本Shimadzu 公司）；SMP10 顯微熔點儀 （英國Stuart 公司）； Brucker ACF-400 核磁共振儀（德國Brucker 公司）； HRESI-Q-TOF 質(zhì)譜儀（美國Waters 公司）； 柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）。 所有試劑均為分析純或色譜純（江蘇漢邦公司）； 水為超純水。

番荔枝種子購自廣東澄海， 經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院陳建偉教授鑒定為正品。

2 提取分離

取番荔枝種子15 kg， 粉碎后超臨界CO2萃取3 h， 萃取條件為35 ℃、 23 MPa、 20%夾帶劑。 將萃取液濃縮至無醇味， 靜置后離心， 取上清（2.3 kg）， 過硅膠柱色譜（200 ～300 目）， 用石油醚、 乙酸乙酯和甲醇依次洗脫， 得到20 個不同餾份Fr.1～20。 使用Kedde 顯色反應(yīng)選取內(nèi)酯含有量較高的Fr.9 （53.8 g）， 稱取80 g 硅膠（100 ～200目） 拌樣， 再稱取665 g 硅膠（200～300 目） 干法裝柱， 石油醚-乙酸乙酯（1 ∶0、 100 ∶1、 50 ∶1、30 ∶1、 20 ∶1、 15 ∶1、 10 ∶1、 5 ∶1、 4 ∶1、 3 ∶1、 2 ∶1、 1 ∶1） 梯度洗脫， 得到組分Fr.9-1 ～Fr.9-40。 Fr.9-2 ～Fr.9-6、 Fr.9-26 ～Fr.9-29 合并，再反復(fù)經(jīng)中壓、 高壓制備液相純化， 甲醇-水（80 ∶20 ～100 ∶ 0） 梯 度 洗 脫， 得 化 合 物 1（25 mg）、 2 （15 mg）、 3 （10 mg）、 4 （25 mg）、 5（10 mg）、 6 （5 mg）、 7 （8 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1： 白色粉末， 易溶于乙酸乙酯、 氯仿等有機溶劑， mp 48～51 ℃。 HR-ESI-MS m／z： ［M＋Na］＋601.444 3， 推測分子式為C36H66O5， 化合物UV λmax210 nm， Raymond 試劑反應(yīng)呈紫紅色， 表明有五元不飽和內(nèi)酯環(huán)的存在。 其1H-NMR 中δ 6.99， 5.00， 1.40 和13C-NMR 中δ 173.9， 134.4，148.8， 78.0， 19.2， 這些是甲基五元不飽和內(nèi)酯環(huán)的特征信號［8］；1H-NMR 中δ 2.26 處的三重峰和δ 6.99 表明C-4 位沒有含氧基團取代［9］；1H-NMR中δ 3.40 （m， 2H）， 3.85 （m， 2H） 和13C-NMR 中δ 83.2， 81.8， 74.1， 74.1 的峰表明其為單THF環(huán)型番荔枝內(nèi)酯類化合物兩側(cè)各有1 個羥基相鄰［10］；13C-NMR 中δ 83.2， 81.8 為THF 環(huán)上2 個連氧碳原子的信號， δ 74.1， 74.1 為THF 環(huán)相鄰羥基碳原子的信號；1H-NMR 中δ 3.40 （m， 2H），3.85 （m， 2H） 范圍內(nèi)共有4 個氫信號， 其中2 個為THF 環(huán)上的氫， 2 個為與THF 環(huán)相鄰羥基碳上的氫， 表明該化合物相對構(gòu)型為th／t／th［11］， 根據(jù)ESI-MS／MS 數(shù) 據(jù) （ m／z： 241， 337， 319， 341，323， 305， 367， 331） 推斷THF 的取代位置在C-13 與C-18 之間。 綜合13C-NMR、1H-NMR、 ESI-MS及理化數(shù)據(jù)， 鑒定化合物1 為1 個新的單四氫呋喃環(huán)型番荔枝內(nèi)酯類化合物， 命名為C36-solamin-A。

化合物2： 白色粉末， 易溶于乙酸乙酯、 氯仿等有 機 溶 劑， mp 44 ～46 ℃。 HR-ESI-MS m／z：［M＋K］＋629.474 8， 推測分子式為C37H66O5， 化合物UV λmax210 nm， Raymond 試劑反應(yīng)呈紫紅色， 表明有五元不飽和內(nèi)酯環(huán)的存在。 其1H-NMR中δ 6.99， 5.00， 1.40 和13C-NMR 中δ 174.0，134.4， 148.9， 77.4， 19.2， 這些是甲基五元不飽和內(nèi)酯環(huán)的特征信號［8］；1H-NMR 中δ 2.26 處的三重峰和 δ 6.99 表明C-4 位沒有含氧基團取代［9］；1H-NMR 中δ 3.40 （m， 2H）， 3.83 （m，2H），13C-NMR 中δ 82.7， 82.6， 74.4， 73.9 的峰表明其為單THF 環(huán)型番荔枝內(nèi)酯類化合物兩側(cè)各有1 個羥基相鄰［10］；13C-NMR 中δ 82.7， 82.6 為THF 環(huán)上二個連氧碳原子的信號， δ 74.4， 73.9 為THF 環(huán)相鄰羥基碳原子的信號；1H-NMR 中δ 3.40（m， 2H）， 3.83 （m， 2H） 范圍內(nèi)共有4 個氫信號， 其中2 個為THF 環(huán)上的氫， 2 個為與THF 環(huán)相鄰羥基碳上的氫， 表明該化合物相對構(gòu)型為th／c／th［11］， 根據(jù)ESI-MS／MS 數(shù)據(jù)（m／z： 113， 139，261， 181， 375， 387， 423， 391） 推斷THF 的取代位置在C-17 與C-22 之間及雙鍵在C25 位上。 綜合13C-NMR、1H-NMR、 ESI-MS 及理化數(shù)據(jù)， 鑒定化合物2 為1 個新的單四氫呋喃環(huán)型番荔枝內(nèi)酯類化合物， 命名為cis-D25-uvariamicin-II。

化合物3： 白色粉末， 易溶于乙酸乙酯、 氯仿等有 機 溶 劑， mp 42 ～44 ℃。 HR-ESI-MS m／z：［M＋Na］＋647.459 2， 推測分子式為C37H68O7， 化合物UV λmax210 nm， Raymond 試劑反應(yīng)呈紫紅色， 表明有五元不飽和內(nèi)酯環(huán)的存在。 其1H-NMR中δ 7.18， 5.05， 1.41 和13C-NMR 中δ 174.6，131.2， 151.8， 78.0， 19.1， 這些是甲基五元不飽和內(nèi)酯環(huán)的特征信號［8］；1H-NMR 中H-3 兩個質(zhì)子不等價， 分別出現(xiàn)在δ 2.40 和δ 2.51 處， 結(jié)合δ 7.18， 表 明C-4 位 有 羥 基 取 代［9］；1H-NMR 中δ 3.40 （m， 2H） 和3.82～3.88 （m， 2H） 和13C-NMR中δ 83.1， 82.2， 74.6， 71.7 的 峰 表 明 其 為 單THF 環(huán)型番荔枝內(nèi)酯類化合物兩側(cè)各有1 個羥基相鄰［10］；13C-NMR 中δ 83.1， 82.2 為THF 環(huán)上2 個連氧碳原子的信號， δ 74.6， 71.7 為THF 環(huán)相鄰羥基碳原子的信號；1H-NMR 中δ 3.40 （m， 2H） 和3.82～3.88 （m， 2H） 的4 個氫信號， 2 個為THF環(huán)上的氫， 2 個為與THF 環(huán)相鄰羥基碳上的氫， 表明該化合物相對構(gòu)型為th／t／er［11］， 根據(jù)ESI-MS／MS 數(shù)據(jù)（m／z： 141， 233， 311， 293， 275， 293，313， 277， 385， 367， 441， 423， 405） 推斷THF的取代位置在C-16 與C-21 之間， C-4、 C-12 各有1 個羥基取代。 綜合13C-NMR、1H-NMR、 ESI-MS 及理化數(shù)據(jù)， 鑒定化合物3 為1 個新的單四氫呋喃環(huán)型番荔枝內(nèi)酯類化合物， 命名為glacin-C。

化合物4： 白色蠟狀固體， mp 62～64 ℃。 HRESI-MS m／z： ［M＋Na］＋587.463 4， 推測分子式為C35H64O5。1H-NMR （400 MHz， CDCl3） δ： 6.98（1H， d， J ＝1.5 Hz， H-33）， 5.00 （1H， qd， J ＝7.0， 1.5 Hz， H-34）， 3.77 ～3.82 （2H， m， H-14，17）， 3.41 （2H， m， H-13， 18）， 2.26 （2H， t， J ＝6.2 Hz， H-3）， 1.41 ～1.56 （6H， m， H-12， 19，31）， 1.30～1.70 （42H， m， H-4～11， 15 ～16， 20 ～30）， 1.41 （3H， d， J ＝7.0 Hz， H-35）， 0.88 （3H，t， J ＝7.0 Hz， H-32）；13C-NMR （100 MHz， CDCl3）δ： 173.9 （C-1）， 148.9 （C-33）， 134.3 （C-2），82.7 （C-14， 17）， 77.4 （C-34）， 74.1 （C-13， 18），33.4 （C-12， 19）， 31.9 （C-30）， 29.3 （C-16），28.8 （C-15）， 25.6 （C-3）， 25.2 ～29.7 （C-4 ～11，20 ～29）， 22.7 （C-31）， 19.2 （C-35）， 14.1 （C-32）， 根據(jù)ESI-MS 數(shù) 據(jù) （m／z： 281， 327， 209，227， 331， 367） 推斷四氫呋喃環(huán)的取代位置在C-13 與C-18 之間。 以上數(shù)據(jù)與文獻［12］ 基本一致， 故鑒定為cis-panatellin。

化合物5： 白色蠟狀固體， mp 63～66 ℃。 HRESI-MS m／z： ［M＋Na］＋587.465 9， 推測分子式為C35H64O5。1H-NMR （400 MHz， CDCl3） δ： 6.99（1H， d， J ＝1.5 Hz， H-33）， 5.00 （1H， qd， J ＝7.0， 1.5 Hz， H-34）， 3.77 ～3.83 （2H， m， H-16，19）， 3.41 （2H， m， H-15， 20）， 2.26 （2H， t， J ＝6.2 Hz， H-3）， 1.41 ～1.59 （6H， m， H-14， 21，31）， 1.30～1.69 （42H， m， H-4～13， 17 ～18， 22 ～30）， 1.41 （3H， d， J ＝7.0 Hz， H-35）， 0.88 （3H，t， J ＝7.0 Hz， H-32）；13C-NMR （100 MHz， CDCl3）δ： 173.9 （C-1）， 148.9 （C-33）， 134.3 （C-2），82.6 （C-16， 19）， 77.4 （C-34）， 74.0 （C-15， 20），33.5 （C-14， 21）， 31.9 （C-30）， 29.2 （C-18），28.8 （C-17）， 25.6 （C-3）， 25.1-29.7 （C-4 ～13，22～29）， 22.7 （C-31）， 19.2 （C-35）， 14.1 （C-32）， 根據(jù)ESI-MS 數(shù) 據(jù) （m／z： 263， 281， 299，359， 377， 395， 269， 277） 推斷四氫呋喃環(huán)的取代位置在C-15 與C-20 之間。 以上數(shù)據(jù)與文獻［12］ 基本一致， 故鑒定為cis-solamin。

化合物6： 白色蠟狀固體， mp 67～69 ℃。 HRESI-MS m／z： ［M＋Na］＋587.465 2， 推測分子式為C35H64O5。1H-NMR （400 MHz， CDCl3） δ： 6.99（1H， d， J ＝1.5 Hz， H-33）， 5.00 （1H， qd， J ＝7.0， 1.5 Hz， H-34）， 3.81 ～3.89 （2H， m， H-16，19）， 3.41 （2H， m， H-15， 20）， 2.26 （2H， t， J ＝6.2 Hz， H-3）， 1.41 ～1.59 （6H， m， H-14， 21，31）， 1.30～1.73 （42H， m， H-4～13， 17 ～18， 22 ～30）， 1.40 （3H， d， J ＝7.0 Hz， H-35）， 0.88 （3H，t， J ＝7.0 Hz， H-32）；13C-NMR （100 MHz， CDCl3）δ： 173.9 （C-1）， 148.8 （C-33）， 134.4 （C-2），83.2 （C-16）， 81.8 （C-19）， 77.4 （C-34）， 74.1（C-15， 20）， 33.5 （C-14， 21）， 31.9 （C-30）， 29.0（C-18）， 28.4 （C-17），25.7 （C-3），25.2-29.7 （C-4～13， 22～29）， 22.7 （C-31）， 19.2 （C-35）， 14.1（C-32）， 根 據(jù) ESI-MS 數(shù) 據(jù) （m／z： 295， 277，295， 269， 251， 299， 281， 395， 377） 推斷四氫呋喃環(huán)的取代位置在C-15 與C-20 之間。 以上數(shù)據(jù)與文獻［13］ 基本一致， 故鑒定為solamin。

化合物7： 白色蠟狀固體， mp 57～58 ℃。 HRESI-MS m／z： ［M＋Na］＋587.467 5， 推測分子式為C35H64O5。1H-NMR （400 MHz， CDCl3） δ： 6.99（1H， d， J ＝1.5 Hz， H-33）， 5.00 （1H， qd， J ＝7.0， 1.5 Hz， H-34）， 3.81 ～3.91 （2H， m， H-18，21）， 3.41 （2H， m， H-17， 22）， 2.26 （2H， t， J ＝6.2 Hz， H-3）， 1.42 ～1.58 （6H， m， H-16， 23，31）， 1.37～1.68 （42H， m， H-4～15， 19 ～20， 24 ～30）， 1.43 （3H， d， J ＝7.0 Hz， H-35）， 0.88 （3H，t， J ＝7.0 Hz， H-32）；13C-NMR （100 MHz， CDCl3）δ： 173.9 （C-1）， 148.8 （C-33）， 134.4 （C-2），82.8 （C-18）， 81.1 （C-21）， 77.4 （C-34）， 74.1（C-17， 22）， 34.3 （C-16， 23）， 31.9 （C-30）， 29.2（C-20）， 28.3 （C-19），25.8 （C-3），25.1-29.5 （C-4～15， 24～29）， 22.7 （C-31）， 19.2 （C-35）， 14.1（C-32）， 根 據(jù) ESI-MS 數(shù) 據(jù) （m／z： 271， 253，423， 405， 241， 323， 305） 推斷四氫呋喃環(huán)的取代位置在C-17 與C-22 之間。 以上數(shù)據(jù)與文獻［14］ 基本一致， 故鑒定為annotemoyin-1。

4 討論

研究表明， 番荔枝內(nèi)酯具有較強的抗腫瘤活性［15-17］， 而番荔枝種子中含有多種該類成分， 極具開發(fā)價值。 因此， 本實驗所得化合物可進一步用于番荔枝內(nèi)酯抗腫瘤的作用機理及構(gòu)效關(guān)系研究。